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細(xì)胞在體外培養(yǎng)時大多呈現(xiàn)為單層貼壁生長，少量的細(xì)胞種類可以懸浮聚團(tuán)成球生長。不管細(xì)胞啊以何種形式生長，我們都需要為其提供生長空間，常見的有培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、多孔板、攪拌瓶、多層培養(yǎng)瓶也稱為細(xì)胞工廠。

1、 培養(yǎng)瓶

其中，培養(yǎng)瓶這種耗材，以材質(zhì)來看，又分為玻璃和塑料兩種?，F(xiàn)在的實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)很少使用玻璃材質(zhì)的培養(yǎng)瓶了，基本上是使用一次性的已滅菌塑料培養(yǎng)瓶，這種培養(yǎng)瓶的核心材料是聚丙乙烯。

我們在訂購或使用前，常會遇到這個小細(xì)節(jié)，培養(yǎng)瓶是否經(jīng)過表面處理，什么是表面處理呢？

因?yàn)榫郾蚁┍旧硎鞘杷缘模绻?xì)胞要想貼在培養(yǎng)瓶內(nèi)表面生長，就需要人工處理一下這個表面，讓它帶上電荷，這樣細(xì)胞就能比較容易貼上去了。

所以，如果你要培養(yǎng)的細(xì)胞是貼壁生長的，需要選擇經(jīng)過表面處理的培養(yǎng)器皿，如果是懸浮生長的，則無所謂。

培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿有大的也有小的，多孔板的孔數(shù)也有不同規(guī)格，要以什么為依據(jù)去選擇培養(yǎng)耗材的類型，以及耗材的規(guī)格呢？

2、培養(yǎng)板

要看你培養(yǎng)細(xì)胞的目的。如果培養(yǎng)的細(xì)胞不需要特別多，但后續(xù)需要拿去做多次、重復(fù)的檢測，要使用多孔板培養(yǎng)細(xì)胞，如果培養(yǎng)的細(xì)胞需求量較大，目的是為了練手、凍存細(xì)胞資源、或拿去做一些對細(xì)胞量要求特別多的實(shí)驗(yàn)，則建議用培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿，新手的話優(yōu)先選擇培養(yǎng)瓶，更為安全。因?yàn)榕囵B(yǎng)瓶的敞口比培養(yǎng)皿要小得多，污染的風(fēng)險(xiǎn)相對會更低。

如果希望單次培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)量能達(dá)到108的數(shù)量級，則建議使用多層培養(yǎng)瓶，也就是細(xì)胞工廠。如果細(xì)胞是懸浮生長的，且單次需求數(shù)量也達(dá)到上述的數(shù)量級，則建議使用攪拌瓶配合攪拌來培養(yǎng)。

這里有一張圖表，是以HeLa細(xì)胞為例，計(jì)算其在不同類型、不同規(guī)格的培養(yǎng)器皿內(nèi)的產(chǎn)量數(shù)量級?；旧?，表面積越大，能產(chǎn)的細(xì)胞數(shù)量也越多，但其中并不是完全的線性關(guān)系，因?yàn)榧?xì)胞的產(chǎn)量還和培養(yǎng)基的總量、氧氣和二氧化碳的交換效率等因素有關(guān)。

從表里還可以看到，多孔板的規(guī)格是按孔的數(shù)量來劃分的，孔越少，每個孔的培養(yǎng)面積越大；培養(yǎng)皿的規(guī)格是按皿的直徑來劃分的，直徑越大，培養(yǎng)面積越大，培養(yǎng)瓶一般按培養(yǎng)面積的代號來劃分，例如T25，代表培養(yǎng)面積是25cm2。

3、 其他耗材

細(xì)胞工廠由于是一個立體培養(yǎng)，所以規(guī)格既包括每層的培養(yǎng)面積也有層數(shù)，越多則細(xì)胞產(chǎn)量越大。攪拌瓶的標(biāo)準(zhǔn)主要是噴灑或非噴灑，意思是是否在培養(yǎng)時向內(nèi)部噴灑5%的二氧化碳，因?yàn)楫?dāng)大量細(xì)胞在一個空間內(nèi)生長時，不斷攪拌+噴灑二氧化碳有利于促進(jìn)細(xì)胞的生長，提高產(chǎn)量。

4、 經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

在使用培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞時，還有一個細(xì)節(jié)需要注意，如果培養(yǎng)瓶蓋是密閉不透氣的，那么在放進(jìn)培養(yǎng)箱時，應(yīng)該把瓶蓋擰松一圈，確保內(nèi)部產(chǎn)生的過量二氧化碳能及時排出，培養(yǎng)箱內(nèi)的二氧化碳也可以進(jìn)入瓶內(nèi)。

當(dāng)然，如果瓶蓋是透氣設(shè)計(jì)的就最好了，這樣直接擰緊即可，也不用擔(dān)心污染問題。

在使用多孔板、培養(yǎng)皿時，最好能使用封口膜把蓋子和皿或板的邊緣封起來，因?yàn)檫@兩種耗材的蓋子是無法完全緊閉合上的，在培養(yǎng)過程中容易出現(xiàn)靠近邊緣的部位或孔，因蒸發(fā)比中間位置更嚴(yán)重，而出現(xiàn)細(xì)胞生長不均勻的現(xiàn)象，其具體表現(xiàn)為邊緣位置的細(xì)胞會長得比較慢，時間長了就造成中間的細(xì)胞密度高邊緣的低。