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下面總結(jié)了幾點關(guān)于培養(yǎng)基適用性試驗時會經(jīng)常遇到的問題，以及如何解決它們。

問題 1：自制培養(yǎng)基平皿表面水珠凝聚，造成涂布培養(yǎng)后菌落蔓延無法計數(shù)。

原因分析：主要是培養(yǎng)基澆碟子時，培養(yǎng)基溫度過高造成的。

解決辦法：規(guī)范培養(yǎng)基制備流程。

? 推薦的培養(yǎng)基制備流程：

1、上午11點開始用干粉培養(yǎng)基天平稱重，11點20開始滅菌，13:00結(jié)束后立即開鍋，在滅菌鍋中冷卻至13:30（滅菌鍋虛掩）。

2、將自制培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基置于50℃水浴鍋中待用。

（知識點：滅菌鍋滅菌結(jié)束時，需要及時開鍋，避免培養(yǎng)基長時間在滅菌鍋中缺氧，造成培養(yǎng)基品質(zhì)下降，培養(yǎng)基適用性失敗且影響實驗結(jié)果。）

? 培養(yǎng)基澆碟：

1、50℃水浴鍋取出后，一般5分鐘之內(nèi)將培養(yǎng)基澆置空平皿中。平皿冷卻后，觀察培養(yǎng)基表面有無水珠，若無水珠則可直接進行涂布操作。多余的培養(yǎng)基可以放置在生物安全柜中或置密封袋（不是呼吸袋）里2-8℃保存。

2、需要當(dāng)天使用則打開平皿蓋，輕輕甩掉表面的水珠，在運行的生物安全柜中放置0.5-1h直到表面沒有水珠，然后進行涂布計數(shù)。

3、若不需要當(dāng)天使用：

（1）直接放置在生物安全柜中，蓋上平皿，生物安全柜關(guān)機，7天內(nèi)使用。

（2）裝入自封袋中保存在2-8℃冰箱中，2周內(nèi)使用。使用前，提前一天取出，使平皿中水珠自動蒸發(fā)消失。

圖1 常見培養(yǎng)基滅菌制備流程圖

問題 2：培養(yǎng)后計數(shù)結(jié)果超標(biāo)

原因分析：培養(yǎng)后沒有每天上下午觀察計數(shù)，沒有掌握計數(shù)規(guī)則。

解決辦法：每天上下午觀察，掌握計數(shù)規(guī)則。

圖2 定量菌株推薦使用流程圖

? 知識點：黑曲霉和白色念珠菌容易在底部聚集，使用前一定再要渦旋10s。  

問題 3：培養(yǎng)后無法計數(shù)或計數(shù)結(jié)果統(tǒng)計錯誤

原因分析：培養(yǎng)后沒有每天上下午觀察計數(shù)，沒有掌握計數(shù)規(guī)則。

解決辦法：每天上下午觀察，掌握計數(shù)規(guī)則。

 表1 培養(yǎng)基適用性的常見菌株生長特點

? 計數(shù)結(jié)果判定：

兩個平行平板的菌落數(shù)平均值不小于15，兩個平板的菌落計數(shù)結(jié)果不能相差1倍或以上。

舉例：

表2 平皿樣本可接受性評估

? 建議定量菌株的計數(shù)結(jié)果控制在20cfu以上，原因是20cfu以下微生物結(jié)果的不確定度就增大，結(jié)果可信度降低。USP <1227>章節(jié)中示例，當(dāng)平板菌落數(shù)小于 25 cfu/皿時，誤差大于 20%，因此平板菌落數(shù)較少時，誤差較大，不宜作為計數(shù)結(jié)果報告。

? 定量菌株隨著保存時間的增加，數(shù)量在逐漸減少。可以采用增加吸取體積的方法。