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摘 要： 建立高效液相色譜法測(cè)定化妝品中3種甘草類功效成分。樣品經(jīng)75%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇溶液超聲提取，采用Luna C18 （2）100A色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05%（體積分?jǐn)?shù)）磷酸溶液-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，流量為1.0 mL/min，進(jìn)樣體積為10 μL，柱溫為30 ℃，采用二極管陣列檢測(cè)器，在275、251、372 nm波長下分別測(cè)定甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A，以保留時(shí)間和紫外吸收光譜定性，外標(biāo)法定量。甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A的質(zhì)量濃度分別在1～20、2～40、0.5～10 μg/mL范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)的色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均為0.999 9。平均回收率為95.8%～111.8%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均不大于3.6%（n=6）。檢出限為0.05～0.6 μg/g。該方法操作簡便，靈敏度高，適用于化妝品中甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜法； 甘草素； 甘草酸； 甘草查爾酮A； 化妝品

 

隨著人們生活水平的提高，愈加追求天然、綠色、安全、健康的生活品質(zhì)，天然中草藥作為化妝品功效成分的添加已經(jīng)成為市場發(fā)展的主流，深受消費(fèi)者的喜愛[1]。甘草是豆科植物烏拉爾甘草、脹果甘草和光果甘草的干燥根和根莖[2]。甘草中含有大量的美白活性成分，如黃酮類、三萜類及多糖類，因能抑制酪氨酸酶活性，具有美白和抗炎作用，并具有一定的抗氧化作用，在化妝品中廣泛添加。甘草中美白效果較好的有甘草素[3]，其可作為指示甘草提取物保濕活性的質(zhì)量標(biāo)志物[4]。已發(fā)布的已使用化妝品原料目錄(2021年版)共收錄27個(gè)與甘草相關(guān)的物質(zhì)，據(jù)文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)報(bào)道，2014～2021年甘草在化妝品中使用頻次超過10萬次[5]，其中使用頻率較高的是光果甘草根提取物[6]。隨著越來越多消費(fèi)者重視化妝品功效，一些企業(yè)往往會(huì)將功效成分作為營銷噱頭，實(shí)際添加成分、添加量有待考究，因此有必要建立甘草類功效成分檢測(cè)方法，評(píng)估產(chǎn)品的實(shí)際添加情況，為化妝品質(zhì)量監(jiān)管提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

目前，甘草類功效成分檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法[7?9]、超高效液相色譜法[10]、液相色譜-質(zhì)譜法等[11?14]，筆者采用目前化妝品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室普遍具備的分析技術(shù)，建立高效液相色譜法測(cè)定化妝品中3種甘草類功效成分，該方法簡單易操作、靈敏度高、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。

 

1、實(shí)驗(yàn)部分

 

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：SHIMADZA LC-20AT型，配二極管陣列檢測(cè)器，日本島津儀器有限公司。

電子天平：(1)ME204型，感量為0.1 mg；(2)XS205型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司。

超聲波清洗器：S300H型，德國艾爾瑪公司。

渦旋混合器：LabDancer型，德國艾卡集團(tuán)。

超純水發(fā)生器：Milli Q Reference型，美國密理博公司。

疏水性PTFE濾膜：0.45 μm，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A：質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為98%，上海源葉生物科技有限公司。

甲醇、乙腈：均為色譜純，美國霍尼韋爾公司。

磷酸：優(yōu)級(jí)純，上海麥克林生化科技有限公司。

實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)純化水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A各10 mg (精確至0.01 mg)，分別至10 mL容量瓶中，加75%甲醇溶液溶解，定容至標(biāo)線，搖勻待用。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：依次取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液2、4、1 mL至同一20 mL容量瓶中，加75%甲醇溶液溶解，定容至標(biāo)線，搖勻待用。

系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：取上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1、0.2、0.4、1、2 mL，分別至10 mL容量瓶中，加75%甲醇溶液溶解，定容至標(biāo)線，即得甘草素質(zhì)量濃度分別為1、2、4、10、20 μg/mL，甘草酸質(zhì)量濃度分別為2、4、8、20、40 μg/mL，甘草查爾酮A質(zhì)量濃度分別為0.5、1、2、5、10 μg/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品處理

稱取樣品1 g (精確至0.1 mg)至10 mL具塞比色管中，加入5 mL 75%甲醇溶液，渦旋震蕩至均勻，再定容至標(biāo)線，超聲提取15 min，必要時(shí)離心，經(jīng)0.45 μm疏水性PTFE濾膜過濾，取濾液作為待測(cè)液。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：Luna C18 (2) 100A柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，美國飛諾美公司)；進(jìn)樣體積：10 μL；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長：甘草素為275 nm、甘草酸為251 nm、甘草查爾酮A為372 nm；流動(dòng)相：A相為0.05%磷酸溶液，B相為乙腈，流量：1.0 mL/min；洗脫方式：梯度洗脫，梯度洗脫程序見表1。

表1   梯度洗脫程序

Tab. 1   Gradient elution program

 

2、 結(jié)果與討論

 

2.1 色譜柱的選擇

參考相關(guān)文獻(xiàn)[7?10]，選擇使用廣泛的C18色譜柱，按1.4條件，分別考察了Luna C18 (2) 100A柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Agilent ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、CAPCELL PAK MGⅡ C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)三款色譜柱，結(jié)果表明三款色譜柱均分離良好、色譜峰形尖銳，能滿足系統(tǒng)適用性要求，最終選擇Luna C18 (2) 100A色譜柱進(jìn)行檢測(cè)。

2.2 流動(dòng)相的選擇

分別考察了體積比均為25∶75的乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.05%磷酸溶液、乙腈-0.01%磷酸溶液5種流動(dòng)相體系。結(jié)果表明，在乙腈-水、甲醇-水體系下，甘草酸均無保留，且甲醇-水體系洗脫能力較弱，目標(biāo)物集中在高有機(jī)相出峰。參考相關(guān)文獻(xiàn)[7?10]，水中加入適量磷酸，在0.1%磷酸溶液(pH值2.13)、0.05%磷酸溶液(pH值2.34)下甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A分離良好、峰形尖銳，滿足實(shí)驗(yàn)要求。在0.01%磷酸溶液(pH值2.88)下甘草酸色譜峰形較差，不適用于分析。基于對(duì)色譜柱的保護(hù)，選擇pH值稍高的0.05%磷酸溶液與乙腈組成流動(dòng)相體系。不同波長下3種甘草類功效成分混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。

圖1   混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

Fig. 1   Mixed standard solution chromatograms

2.3 檢測(cè)波長的選擇

使用二極管陣列檢測(cè)器，在190～700 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A分別在275、251、372 nm波長處有最大吸收，基于所檢測(cè)物質(zhì)為中藥提取物，且3種成分最大吸收波長各異，為了達(dá)到更好的檢測(cè)靈敏度，所以選擇各自最大吸收波長為檢測(cè)波長。各成分紫外吸收光譜分別見圖2。

圖2   各成分紫外吸收光譜圖

Fig. 2   UV absorption spectra of each component

2.4 提取溶劑與超聲時(shí)間的選擇

3種甘草類功效成分均易溶于極性溶劑，選擇水劑、乳液、膏霜3種劑型樣品，分別考察了常用于化妝品且毒性較低的75%乙醇溶液、75%甲醇溶液作為提取溶劑，結(jié)果表明，兩種溶劑都能均勻分散3種劑型樣品。由于75%乙醇溶液提取完成后，部分膏霜樣品因乳化嚴(yán)重導(dǎo)致過濾困難，75%甲醇溶液則可避免這個(gè)問題，所以選擇75%甲醇溶液作為提取溶劑。確定了提取溶劑后，在空白樣品中加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別考察15、20、25 min超聲提取時(shí)間，結(jié)果顯示，15、20、25 min各成分的回收率無明顯區(qū)別，所以超聲提取時(shí)間選擇15 min，結(jié)果見表2。

表2   不同超聲時(shí)間回收率

Tab. 2   Recovery rate of different ultrasound times

 

2.5 濾膜的選擇

甘草類功效成分的檢測(cè)中濾膜的影響罕見文獻(xiàn)討論，建立方法的過程中使用常規(guī)尼龍有機(jī)濾膜和疏水性PTFE濾膜過濾回收率樣品，回收率結(jié)果見表3。由表3可見，甘草酸、甘草查爾酮A可能被濾膜吸附，導(dǎo)致回收率偏低，膏霜樣品中3種成分的回收率均受影響且吸附情況更嚴(yán)重；PTFE濾膜具有更強(qiáng)的化學(xué)兼容性，選用疏水性PTFE濾膜過濾，則得到滿意的回收率結(jié)果。

表3   2種濾膜回收率

Tab. 3   Filter membrane recovery rates of two types

2.6 線性范圍和檢出限

按1.4條件，采用外標(biāo)定量分析法，測(cè)定了系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。分別以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸分析。結(jié)果表明，甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A在質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)的色譜峰面積均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均為0.999 9。根據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)衛(wèi)生化學(xué)檢測(cè)方法總則要求，檢出限以3倍空白噪聲時(shí)對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度表示[15]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4   線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、方法檢出限

Tab. 4   Linear range， linear equation, correlation coefficient, method detection limit

2.7 樣品加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)

稱取水劑、乳液、膏霜3種劑型空白樣品各1 g，進(jìn)行高、低兩個(gè)濃度水平加標(biāo)，每個(gè)加標(biāo)水平平行制備6份，按照該方法進(jìn)行樣品處理和測(cè)定，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果表明，樣品的平均回收率為95.8%～111.8%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為小于3.6%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5?？瞻讟悠放c加標(biāo)樣品色譜圖分別見圖3和圖4。

表5   加標(biāo)試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)結(jié)果

Tab. 5   Results of spiked recovery and precision test

圖3   空白樣品色譜圖

Fig. 3   Chromatogram of blank sample

圖4   甘草素加標(biāo)樣品色譜圖

Fig. 4   Chromatogram of glycyrrhizin spiked sample

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

考察了高、低兩個(gè)濃度水平的空白基質(zhì)樣品加標(biāo)溶液的穩(wěn)定性，于4 ℃冰箱中放置3 d，比較甘草素、甘草酸、甘草查爾酮A色譜峰面積并計(jì)算相對(duì)偏差，結(jié)果見表6。由表6可見，3種成分在3 d內(nèi)穩(wěn)定，穩(wěn)定性相對(duì)偏差小于1.1%。

表6   穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

Tab. 6   Stability determination results

 

3、 結(jié)語

 

建立的化妝品中3種甘草類功效成分的檢測(cè)方法，操作簡便，靈敏度高、準(zhǔn)確度好。該方法為新型中藥功效化妝品的研究提供參考，為化妝品監(jiān)管部門提供市場基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和技術(shù)保障。

 

參考文獻(xiàn)：

 

1 于天浩，陳萍，周敬，等.天然植物原料在化妝品中的應(yīng)用與展望［J］.日用化學(xué)品科學(xué)，2015，38（6）：37.

    YU Tianhao，CHEN Ping，ZHOU Jing，et al. Application and prospects of natural plant raw materials in cosmetics［J］. Detergent ＆ Cosmetics，2015，38（6）：37.

 

2 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（2015年版）：三部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：86.

    Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China（2015 Edition）：Part Ⅲ［M］. Beijing：China Medical Technology Press，2015：86.

 

3 林婧，寧平.常用根莖類中藥在美白化妝品中的應(yīng)用現(xiàn)狀研究［J］.香料香精化妝品，2020（2）：62.

    LIN Jing，NING Ping. Study on the application of common rhizome traditional chinese medicine in whitening cosmetics［J］. Flavour Fragrance Cosmetics，2020（2）：62.

 

4 楊悅，劉鳴暢，楊艷歌，等.甘草提取物的生物功能評(píng)價(jià)及相關(guān)質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)［J］.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2023，54（1）：72.

    YANG Yue，LIU Mingchang，YANG Yan'ge，et al. Evaluation of biological function of licorice extracts and prediction of related quality markers［J］. Journal of Shenyang Agricultural University，2023，54（1）：72.

 

5 李雪，王燕萍，楊兆均，等.2014-2021年含植物原料的國產(chǎn)普通化妝品現(xiàn)狀分析［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2022，52（8）：875.

    LI Xue，WANG Yanping，YANG Zhaojun，et al. Analysis of domestic general cosmetics containing plant materials from 2014 to 2021［J］. China Surfactant Detergent & Cosmetics，2022，52（8）：875.

 

6 肖樹雄，周智明，梁柱業(yè)，等.植物源化妝品原料安全性問題及監(jiān)管建議［J］.中國食品藥品監(jiān)管，2021（1）：42.

    XIAO Shuxiong，ZHOU Zhiming，LIANG Zhuye，et al. Safety problems of plant-derived cosmetic raw materials and relevant regulatory countermeasures［J］. China Food & Drug Administration，2021（1）：42.

 

7 吳曉云，李思龍，刁飛燕，等.多波長HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定美白類化妝品中8種甘草化學(xué)成分［J］.藥學(xué)研究，2023，42（9）：680.

    WU Xiaoyun，LI Silong，DIAO Feiyan，et al. Simultaneous determination of 8 chemical constituents from Glycyrrhizae Radix et Rhizoma in whitening cosmetics by multi-wavelength HPLC-DAD［J］. Journal of Pharmaceutical Research，2023，42（9）：680.

 

8 楊紅美，徐嘉琪，龔盛昭，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定化妝品原料甘草提取液中甘草苷和甘草酸［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2021，51（3）：250.

    YANG Hongmei，XU Jiaqi，GONG Shengzhao，et al. Simultaneous determination of liquiritin and glycyrrhizic acid by high performance liquid chromatography in licorice extract in raw materials of cosmetics［J］. China Surfactant Detergent & Cosmetics，2021，51（3）：250.

 

9 文瑾，楊海寧，車宏偉，等. HPLC同時(shí)測(cè)定疏清口服液中甘草素、甘草酸銨含量［J］.藥學(xué)研究，2019，38（3）：148.

    WEN Jin，YANG Haining，CHE Hongwei，et al. Simultaneous determination of liquiritigenin and ammonium glycyrrhizinate in Shuqing Oral Liquid by HPLC［J］. Journal of Pharmaceutical Research，2019，38（3）：148.

 

10 胡婷，高智強(qiáng)，尹彥超，等. UPLC法測(cè)定烏拉爾甘草與光果甘草中7個(gè)黃酮類成分的含量［J］.藥物分析雜志，2019，39（5）：763.

    HU Ting，GAO Zhiqiang，YIN Yanchao，et al. Determination of seven flavonoids in Glycyrrhiza uralensis Fisch.and Glycyrrhiza glabra L.by UPLC［J］. Journal of Pharmaceutical Analysis，2019，39（5）：763.

 

11 熊陳思慧，定天明，劉杰，等.超高效液相色譜-線性離子阱/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜法快速檢測(cè)化妝品中22種功效成分［J］.色譜，2022，40（9）：817.

    XIONG Chensihui，DING Tianming，LIU Jie，et al. Rapid determination of 22 functional components in cosmetics using ultra-high performance liquid chromatography-linear ion trap/orbitrap high resolution mass spectrometry［J］. Chinese Journal of Chromatography，2022，40（9）：817.

 

12 董亞蕾，喬亞森，王啟林，等. UHPLC-MS/MS法測(cè)定甘草類化妝品中光甘草定的研究［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2021，51（2）：161.

    DONG Yalei，QIAO Yasen，WANG Qilin，et al. Determination of glabridin in cosmetic by UHPLC-MS/MS method［J］. China Surfactant Detergent & Cosmetics，2021，51（2）：161.

 

13 陸林玲，魯輝，閔春艷，等. UHPLC-MS/MS法測(cè)定面膜化妝品中甘草、人參和黃芩類功效成分［J］.日用化學(xué)工業(yè)（中英文），2024，54（1）：107.

    LU Linling，LU Hui，MIN Chunyan，et al. Determination of functional components of Glycyrrhizae，Ginseng and Scutellariae in facial masks by UHPLC-MS/MS［J］. China Surfactant Detergent & Cosmetics，2024，54（1）：107.

 

14 鄧映明，陳媛，鄧美凌，等.液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定甘草組方化妝品中4種標(biāo)志性成分［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2021，51（12）：1 278.

    DENG Yingming，CHEN Yuan，DENG Meiling，et al. Determination of four characteristic components in Glycyrrhiza uralensis based cosmetics by LC-MS method［J］. China Surfactant Detergent & Cosmetics，2021，51（12）：1 278.

 

15 國家食品藥品監(jiān)督管理總局化妝品安全專家委員會(huì).化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015版）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2017，151.

    The Cosmetic Safety Expert Committee of the State Food and Drug Administration. Safety technical specifications for cosmetics 2015 Edition［M］. Beijing：People's Health Publishing House，2017，151.

 

引用本文： 劉小娟，徐嘉銘，李楊杰 . 高效液相色譜法測(cè)定化妝品中3種甘草類功效成分［J］. 化學(xué)分析計(jì)量，2024，33（10）：74. (LIU Xiaojuan, XU Jiaming, LI Yangjie. Determination of 3 licorice active ingredients in cosmetics by high-performance liquid chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(10): 74.)