中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

SDS-PAGE電泳是蛋白質(zhì)分離純化中最常用的技術(shù)之一，但實(shí)驗(yàn)過程中，我們常常會(huì)遇到各種各樣的問題。下面總結(jié)了一些常見的SDS-PAGE電泳問題以及相應(yīng)的解決方法，希望對(duì)你有幫助！

 

在了解相關(guān)問題之前，我們首先要搞清楚SDS-PAGE電泳是怎么工作的？

 

想象一下，我們有一堆不同大小的豆子，想把它們按照大小排隊(duì)。而SDS-PAGE電泳就是蛋白質(zhì)的“篩子”，它能把不同大小的蛋白質(zhì)按照“身高”（分子量）排成一隊(duì)。

 

SDS

 

SDS是一種特殊的化學(xué)試劑，它可以包裹住蛋白質(zhì)，讓所有的蛋白質(zhì)都帶上負(fù)電荷。這樣，在電場(chǎng)的作用下，所有的蛋白質(zhì)都能夠向正極移動(dòng)。

 

凝膠

 

凝膠就像一個(gè)布滿小孔的海綿，不同的孔大小不一，作用類似于蛋白質(zhì)的“跑道” 。蛋白質(zhì)在電場(chǎng)的作用下，就像參加比賽一樣，從凝膠的一端往另一端跑。大的蛋白質(zhì)跑得慢，小的蛋白質(zhì)跑得快。最后，它們就會(huì)按照大小排成一個(gè)梯度。

 

 

（圖片來源：https://gyansanchay.csjmu.ac.in/wp-content/uploads/2022/10/SDS-PAGE.pdf）

 

常見問題及解答

 

1、分離膠濃度的選擇

 

在SDS-PAGE電泳中，分離膠濃度是一個(gè)至關(guān)重要的參數(shù)，直接影響著蛋白質(zhì)的分離效果。濃度越高，孔徑越小，越適合分離小分子蛋白質(zhì)；濃度越低，孔徑越大，越適合分離大分子蛋白質(zhì)。以下是我們總結(jié)的一個(gè)常見凝膠溶液濃度與蛋白質(zhì)分子量范圍的對(duì)應(yīng)關(guān)系表：（僅供參考）

 

2、凝膠凝結(jié)的太慢或不凝固

 

SDS-PAGE凝膠的凝固時(shí)間一般在30分鐘～1小時(shí)之間。如果凝固速度過慢，很可能是因?yàn)橐l(fā)聚合反應(yīng)的兩種試劑——TEMED和APS出了問題。TEMED和APS的用量不足或者失效都會(huì)導(dǎo)致凝膠凝固緩慢。

 

其中，APS（過硫酸銨）非常不穩(wěn)定，容易分解失效，所以每次使用前都需要現(xiàn)配。而TEMED也比較敏感，容易被氧化變黃，失去活性。

 

解決方法：

 

檢查并調(diào)整引發(fā)劑用量，確保TEMED和APS用量準(zhǔn)確，并按比例混合。

 

保證APS現(xiàn)配現(xiàn)用，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。

 

TEMED要注意避光保存，并置于4℃冰箱中。

 

3、條帶拖尾和彌散

 

 

可能的原因：

 

樣品降解：蛋白質(zhì)在制備過程中發(fā)生降解，導(dǎo)致分子量變小，條帶彌散。

 

樣品過載：上樣量過多，導(dǎo)致條帶重疊，分辨率降低。

 

樣品緩沖液配制錯(cuò)誤：緩沖液的pH值或離子強(qiáng)度不合適，影響蛋白質(zhì)的遷移。

 

樣品溶解不充分：蛋白質(zhì)沒有完全溶解，導(dǎo)致部分蛋白質(zhì)沒有進(jìn)入凝膠。

 

解決方案：

 

延長(zhǎng)變性時(shí)間：確保蛋白質(zhì)充分變性，一般在95-100℃加熱5～10分鐘。

 

減少上樣量：逐步減少上樣量，直到條帶清晰為止。

 

更換緩沖液：如果緩沖液使用時(shí)間過長(zhǎng)，需要更換新鮮的緩沖液。

 

4、“微笑”型條帶（條帶兩邊翹起，中間凹下）

 

 

這種現(xiàn)象通?？赡苁怯捎谝韵聨讉€(gè)原因造成，需要逐一排查。

 

凝膠凝固不均勻

 

在較厚的凝膠中，凝膠的中間部分凝固的不均勻。建議待凝膠充分凝固后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

 

電流過大

 

電流過大可能導(dǎo)致凝膠局部過熱，從而引起條帶彎曲?？梢赃m當(dāng)降低電泳電壓，減少電流，或使用恒流電源，確保電流穩(wěn)定。

 

電泳時(shí)間過長(zhǎng)

 

電泳時(shí)間過長(zhǎng)也可能導(dǎo)致凝膠過熱，引起條帶彎曲?？梢赃m當(dāng)縮短電泳時(shí)間，并觀察溴酚藍(lán)指示劑的位置，當(dāng)其到達(dá)凝膠底部時(shí)停止電泳。

 

玻璃板未夾緊

 

檢查玻璃板之間的密封性，確保沒有漏液現(xiàn)象。

 

上樣不均勻

 

樣品在上樣時(shí)分布不均，也可能導(dǎo)致條帶彎曲。建議使用微量移液器緩慢、均勻地將樣品加入樣品孔中。

 

5、“皺眉”型條帶（條帶兩邊向下，中間鼓起）

 

 

出現(xiàn)這種現(xiàn)象通?？赡苁怯捎谝韵聨讉€(gè)原因造成：

 

樣品不均一或上樣量過多：

 

樣品中含有不溶性顆?；蚋邼舛塞}，導(dǎo)致樣品在孔中沉淀，影響電泳遷移。上樣量過大導(dǎo)致樣品孔中的蛋白質(zhì)濃度過高，中間部分的蛋白質(zhì)遷移受到阻礙。建議充分溶解樣品，去除不溶性物質(zhì)，控制上樣量，避免過載。

 

電泳條件不穩(wěn)定：

 

電壓波動(dòng)、電流不穩(wěn)定等因素都會(huì)影響蛋白質(zhì)的遷移。

 

玻璃板：

 

玻璃板上有殘留的雜質(zhì)，影響了樣品的遷移。也有可能是兩塊玻璃板之間的底部間隙氣泡沒有排盡，阻礙電場(chǎng)均勻分布，影響樣品遷移。