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嘉峪檢測網(wǎng) 2024-12-11 08:43
總結(jié)1
最近做TLC遇到拖尾現(xiàn)象，經(jīng)過網(wǎng)上查閱相關(guān)文章，總結(jié)以下幾點原因及處理方法供大家分享：
1、首先考慮的是樣品濃度過大，薄層板過載導(dǎo)致。這種情況直接降低樣品濃度或者是上樣量就可以驗證了。
2、樣品對硅膠的吸附能力過強導(dǎo)致的拖尾。對不同體系加入不同的調(diào)節(jié)劑，酸體系加冰醋酸，堿體系加氨水。
3、展開劑的極性與樣品極性不附，不能做到有效展開導(dǎo)致?？梢酝ㄟ^調(diào)節(jié)展開劑極性解決。
4、如果是長帶狀，那最可能的原因是展開劑對樣品的溶解度不夠所導(dǎo)致?？梢愿鶕?jù)極性表換極性相近的對樣品溶解度更好的溶劑做展開劑。
以上是對網(wǎng)上一些觀點的總結(jié)，大家有更好的看法和建議可以在回帖中說明，希望通過本帖，能對TLC拖尾的原因及解決方法有個全面的認識與了解。
一般都是加酸加堿，以及換體系來整，還是得多跑板才能找到合適的。
總結(jié)2
拖尾原因
1.樣品未溶解完全，點在班上的樣品有未溶固體樣品；
2.板未干,含水，或者放入展開劑前未充分吹干；
3.樣品為強極性物質(zhì)，含有氨基或者羧基等極性官能團；
4.硅膠質(zhì)量有問題
相應(yīng)解決辦法：
1.點在薄層板上的樣品一定要是溶液形式；
2.雖然經(jīng)過一夜水分會揮發(fā)干，保險起見還是放置久一些或烘干活化一下，尤其是氣候特別潮濕的地方；
3.對堿性和酸性樣品應(yīng)分別在展開劑中加入堿性或酸性溶劑形成競爭吸附避免拖尾，或者制成堿性板（用一定濃度氫氧化鈉制板）或酸性板；
4.有些硅膠在出廠時不合格，應(yīng)及時要求退貨
補充一下，點樣的時候濃度太大也會拖尾,取樣后用溶劑稀釋一下，或減少點樣量。堿性物質(zhì)跑板在展開劑中加一滴三乙胺,酸性物質(zhì)在展開劑中加一滴乙酸。調(diào)節(jié)點板液的濃度:堿加堿,如TEA,酸加酸,如乙酸。有時候也可以通過改變展開體系來改善，比如說找找對該產(chǎn)品溶解度較好的溶劑，二氯/甲醇之類的配比，或者產(chǎn)物含有較多苯環(huán)的可用含甲苯的展開劑等。
薄層色譜是樣品與硅膠之間的吸附/解吸附的過程，當(dāng)你的樣品與硅膠吸附能力過強的時候，就會造成拖尾（不考慮過載，過載大多會造成拖尾）。這時候需要更強的溶劑系統(tǒng)來解吸附，因此對于羧酸類化合物，需要醋酸或者甲酸來加強洗脫極性；另外，羧酸的電離也會造成拖尾，因此加入醋酸或者甲酸抑制電離，使得薄層點比較圓。同理，對于堿性物質(zhì)，也需要加堿（通常是三乙胺、二乙胺或者氨水）來加強洗脫極性和抑制電離。
由于普通的硅膠板都是弱酸性的，所以對于某些酸敏感的化合物，需要用堿板。在鋪板時，用0.05～0.5％的NaOH代替水來鋪就可以得到堿板
總結(jié)3
薄層色譜是樣品與硅膠之間的吸附/解吸附的過程，當(dāng)你的樣品與硅膠吸附能力過強的時候，就會造成拖尾（不考慮過載，過載大多會造成拖尾）。這時候需要更強的溶劑系統(tǒng)來解吸附，因此對于羧酸類化合物，需要醋酸或者甲酸來加強洗脫極性；另外，羧酸的電離也會造成拖尾，因此加入醋酸或者甲酸抑制電離，使得薄層點比較圓。同理，對于堿性物質(zhì)，也需要加堿（通常是三乙胺、二乙胺或者氨水）來加強洗脫極性和抑制電離。
由于普通的硅膠板都是弱酸性的，所以對于某些酸敏感的化合物，需要用堿板。在鋪板時，用0.05～0.5％的NaOH代替水來鋪就可以得到堿板了。
總結(jié)4
最近剛進實驗室，用TLC對反應(yīng)進行檢測，但是關(guān)于展開劑的資料不多，我們實驗室大多就是兩個體系:石油醚/乙酸乙酯，氯仿/甲醇，其他的就很少了，所以我下決心把這個實驗室比較常用的技術(shù)搞清楚。一種簡單的辦法是根據(jù)你產(chǎn)物的溶解性選擇一種極性最強的溶劑學(xué)（如醇類，乙氰等），再根據(jù)你實際展開的情況慢慢加入極性弱的溶劑（如四氯化碳、石油醚、二氯甲烷等）調(diào)節(jié)體系的極性。以得到最好的展開效果。把我的祖?zhèn)髅胤礁嬖V你吧 PE(60-90) EtAc/PE=1:2 EtAc/PE/AcOH=15:5:1 EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:1 8年來我用這四種體系,沒有出現(xiàn)過什么問題我一直在用的是乙酸乙酯：環(huán)已烷，不斷調(diào)節(jié)比例，直到有滿意的Rf值，有拖尾時可能要加酸或堿，我一般乙酸和三乙胺。我用了好幾年了，都還好。不妨一試！
氨基酸都有專用的展開劑，常用丁醇和水，再加酸堿選擇展開劑一般要用混合溶劑：一般要有一種對所要展開樣品溶解度較大的溶劑，視樣品的極性，再選用相應(yīng)的體系。極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng) 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸(應(yīng)該交好)甲醇：氯仿對于胺類比較好我常用的展開劑有：氯仿/甲醇；環(huán)已烷/丙酮；醋酸乙酯/石油醚；甲醇/吡啶/水；等.本人用過的展開系統(tǒng)中，苯-丙酮用的最多，通過調(diào)節(jié)不同比例可以得到較好的效果俺的：EtOAc/Hexanes Ch2Cl2（EtOAc）/MeOH， 0-1% TEA or NH3 極性乙酸乙酯和非極性的石油醚按不同比例混合對一般的都能適應(yīng)人民衛(wèi)生出版社的《分析化學(xué)》（下冊）有專門的介紹，很詳細。我一般用乙酸乙酯和石油醚配成不同比例的混合溶劑。實驗時調(diào)整至Rf=0.3--0.5我們做的氨基酸,用的都是丁醇:醋酸:水二氯甲烷：甲醇，調(diào)節(jié)不同的配比基本解決大多數(shù)問題. 用二氯甲烷與甲醇體系非常有用，只要調(diào)整好比例。展開劑的使用一看自己的喜愛；二看產(chǎn)品特點。我多用氯仿/甲醇或石油醚/乙酸乙酯！主要是調(diào)節(jié)比例！掌握了幾種展開劑的比例和極性，處理起來就容易多了！用乙酸乙酯/正己烷，必要時加醋酸或三乙胺。我常用：正己烷+乙酸乙酯；氯仿+甲醇（常為10：1）；石油醚+丙酮。拖尾的話常滴加兩三滴三乙胺了事。過柱最好不用三乙胺，可以添加1%的二乙胺，這樣有利于餾分收集后的濃縮和送譜。如果用三乙胺，在油泵上抽數(shù)個小時，送nmr仍可見三乙胺的殘留。同理，可能的情況下最好用甲酸代替乙酸。我們這里都是用石油醚和乙酸乙酯，然后不斷的調(diào)比例，效果不錯。我們通常用石油醚，二氯甲烷，乙酸乙酯。不斷的點板看，但夏天蒸出來后極性有些小。拖尾不要緊，改溶劑過柱子就可以。首先，選一種易溶你產(chǎn)品的一種不溶的；接著，按照溶：不溶＝1：2的比例配比，看一下其展開的情況; 再次，太高就減少溶的比例，太低就減少不溶的比例！這樣正常情況下時可行的！祝大家好運！
我一般用氯仿打底，根據(jù)化合物的極性、第二溶劑的極性、RF值等來考察配比及溶劑種類.當(dāng)然是最便宜，最安全，最環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻中有寫用正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過因為極 性很小，有時還是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡覺，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸附是一個放熱過程，所以夏天的時候經(jīng)常會在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時候會好一些。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理，比如說重結(jié)晶等。其他的溶劑用的相對較少，要依個人的不同需要選擇了。由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴格的柱分時就要對溶劑重蒸。當(dāng)然過原料時就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。另外溶劑在過柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費，缺點是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過柱同時進行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會導(dǎo)致極性的變化，一般會使得極性變大，在梯度淋洗時比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓，因為在減壓旋蒸時會有部分低沸點的雜質(zhì)一起出來，常壓時就會減少這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了我的處理方法是在點板前，取一點要點板的液體稀釋，只要足夠稀則可．同意，前幾天點板時沒有稀釋，還被老板訓(xùn)了一下。 要求濃度為5%左右柱層析和TLC是有機化學(xué)工作者必須下苦功夫的兩項實驗技術(shù)。這兩項技術(shù)掌握與否，對于提高實驗的效率至關(guān)重要。常見的例子是：在柱層析時，由于層析柱中的硅膠填料裝得不均勻（沒有填嚴實），使得柱子在淋洗過程中就因為出現(xiàn)太多氣泡變花，導(dǎo)致分離效果不好。更常見的例子是：層析柱雖然裝得不錯，但是由于淋洗劑選擇不恰當(dāng)，結(jié)果導(dǎo)致幾十毫克產(chǎn)品，用了幾百毫升淋洗劑都還沒有完全分離。分離同樣的東西，熟手可能只需要半個小時，而一個層析技術(shù)不過關(guān)的人可能半天都不能得到純品。由此可見，這兩項技術(shù)掌握與否，對于提高工作效率，減輕工作量，減少有機溶劑的使用，從而對身心健康和環(huán)境保護都有明顯的作用。
薄層色譜小知識
1、怎樣提高點樣效率？點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。
定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應(yīng)注意更換樣品時，應(yīng)將毛細管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距離1-2cm底邊距離1.5cm;HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm底邊距1cm.
2、展開劑的選擇
TLC與HPLC相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性，流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1－0.7之間并達到較好的分離，與此對應(yīng)的是流動相要有適當(dāng)?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大，溶質(zhì)Rf值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點組成，這種方法較為直觀，也較簡單。理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：
1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；
2、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨使用； 3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；
展開劑選擇的大概原則
選擇展開劑一般要用混合溶劑：一般要有一種對所要展開樣品溶解度較大的溶劑，視樣品的極性，再選用相應(yīng)的體系 極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng) 極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸 我個人覺得以下的經(jīng)驗和所遇到的問題也很實用
關(guān)于展開劑：
分離的樣品酸性比較大，一般在展開劑中加酸加甲酸是因為該樣品是酸性的，加酸的量和該物質(zhì)的酸性成正比關(guān)系，加水可能是因為你的樣品是苷類的用酸水做一下緩沖，目的就是讓斑點圓滑，不脫尾，展距良好。飽和也非常重要，邊緣效應(yīng)很嚴重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內(nèi)壁，這樣飽和效果會好一些
1)在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性；
2)以展開劑邊緣效應(yīng)的大小，確定展開劑平衡時間的長短，一般平衡時間在30分鐘即可。有機溶劑的極性，甲醇>氯仿，因此在氯仿：甲醇：氨水（10:1:0.6）這個展開劑中，如果極性略大，可適當(dāng)降低甲醇比例；如極性太小，可適當(dāng)增大甲醇比例。 氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2 極性肯定是相同的，這有問題嗎？ 另外還有一個問題，這個展開劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。 不同的展開系統(tǒng)意思是其中至少應(yīng)該有一種溶劑不同（最好是不同分類組的溶劑），而不是比例不同?；蛘呤褂貌煌墓潭ㄏ?。關(guān)于展開： TLC中樣品拖尾現(xiàn)象是什么原因?該如何解決? 2.TLC中樣品跑成幾乎為一條線,斑點沒有清晰的分離,想請教一下這是什么原因造成的?一般情況下該如何解決? 造成問題1的原因基本相同： a、對于一些具有酸堿性的化學(xué)成分，在溶液中部分電離，事實上展開時存在分子、離子兩 種狀態(tài)，以中性的有機試劑展開必然會出現(xiàn)兩種層析行為，造成脫尾甚至是一條線。b、展開劑選擇不當(dāng) c、點樣量過大，樣品超載解決辦法： a、在展開劑中加幾滴甲酸或冰醋酸；b、展開時以氨水飽和 c、減少點樣量 d、參考文獻，調(diào)整展開劑種類、比例 我想問問，關(guān)于TLC二次展開，是在第一次展開顯色后再在繼續(xù)第二次展開，還是在第一次展開后，換另一種展開劑接著展開??？？ 請哪位大俠指點一下關(guān)于TLC的二次展開。二次展開是依據(jù)樣品定的，但肯定要在第一次展開后，將板晾干或吹干，再放入另一種展開劑中展開，有的樣品二次展開還要換展開方向，和原方向垂直。所以要以實際分離樣品需要而定。一般是因為樣品成分多，極性差別有的大。
關(guān)于顯色：
在工作中研究過用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，后改用不加CMC輔的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。感覺輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達1：3.5左右，而且研磨后要盡快涂布，不能易于凝固而難于涂布，我是百思不得其解，難道CMC還有類似穩(wěn)定劑的作用 2. “0.5%的板加熱時間長了就會黑”，是在層析完，顯色后吧，我也遇到過同樣的情況，這只有嚴格控制加熱顯色的時間。 這個問題應(yīng)該是這樣回答：但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，若改用不加CMC輔的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，但不加CMC輔的板又太軟，點樣時容易點出洞，有個好辦法是將CMC的濃度調(diào)至0.1%，這樣就不易烘黑的。不信你試試，我們這邊藥檢所都這樣做的 3. 關(guān)于薄層板加熱變黑的問題，其實很容易解決：當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了，可以用電吹風(fēng)在板子背面吹吹就能顯色了．我們實驗室里一般都采用此法，簡便、快潔．如果一非想使用烘箱烘的話，一定要用帶玻璃窗的，當(dāng)看到顯色了就取出，不然不好控制顯色時間，時間過長，ＣＭＣ容易碳化變黑 4．各位樓主真是經(jīng)驗豐富，我鋪的0.5%的板加熱時間長了就會黑，有什么好著嗎？ 根據(jù)我的經(jīng)驗，薄層版變黑與CMC－Na的濃度過大有關(guān)，如果你留意的話，你會發(fā)現(xiàn)，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時，加熱時間稍長就會變黑（其他顯色劑是沒事的），我老師說這是因為濃硫酸把CMC－Na炭化了，其實[color=blue=這種情況你只要適當(dāng)降低CMC-Na的濃度就可以了，當(dāng)然如果不加CMC-Na的話容易把板弄破。一般我都是顯色后用電吹風(fēng)吹的，要均勻吹，電吹風(fēng)離板的距離要遠些，防止部分會黑。 另還要注意顯色劑，如果顯色劑中含有硫酸，加熱時間一定要掌握好，不可太長。 5．CP2000中277頁蘇氨酸的TLC的其它氨基酸檢查似乎有問題: ...以"正丁醇\丁酮\濃氨溶液\水"為展開劑, 展開后,晾干,噴以茚三酮的丙酮溶液(1-50),... 茚三酮與濃氨溶液起顯色反應(yīng), 弄得整塊板都有色,茚三酮氧化蘇氨酸后再與釋放出的氨氣起反應(yīng)生成的點在整塊板中尚能看到,其它氨基酸就別想看了. 氨基酸類的薄層鑒別過程中，顯色前先將展完的板子在烘箱內(nèi)烘一段時間，從而確保展開劑揮干凈，效果不錯 。
來源：Internet
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