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一、實(shí)驗(yàn)原理

蘇木精-伊紅染色法（Hematoxylin-Eosin staining）簡稱為HE染色，是組織學(xué)和組織病理學(xué)中常見的化學(xué)染色方法之一，在識(shí)別不同類型的組織及其形態(tài)變化中具有重要意義。蘇木精為天然堿性染料，能與細(xì)胞核內(nèi)的核酸等酸性物質(zhì)以離子鍵或氫鍵的形式結(jié)合從而將細(xì)胞核染成藍(lán)色，伊紅則為化學(xué)合成的一種酸性染料，其能在水中解離為帶負(fù)電荷的陰離子，從而與細(xì)胞質(zhì)中帶正電荷的蛋白質(zhì)等物質(zhì)結(jié)合從而將胞質(zhì)染成紅色。藍(lán)色的細(xì)胞核與紅色的細(xì)胞質(zhì)形成了鮮明的對比，從而便于觀察。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1)樣品準(zhǔn)備

提前準(zhǔn)備好待染色的石蠟切片或冰凍切片（注意：兩者的染色步驟基本一致，但冰凍切片省略了脫蠟這一步，且染色時(shí)間也較石蠟切片短，以下僅以石蠟切片HE染色作一介紹）。

2)脫蠟

二甲苯Ⅰ，10 min→二甲苯Ⅱ，10 min。

3)復(fù)水

100%乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各5 min→蒸餾水Ⅰ，2 min→蒸餾水Ⅱ，2 min。

4)蘇木精染細(xì)胞核

蘇木精，3 min，而后用蒸餾水洗去浮色。

5)分化

1%的鹽酸酒精分化液中分化30s→自來水Ⅰ，3 min→自來水Ⅱ，3min。

6)伊紅染細(xì)胞質(zhì)

伊紅染液，2 min，而后用蒸餾水洗去浮色。

7)脫水

75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇中各1 min。

8)透明

二甲苯Ⅰ，1 min→二甲苯Ⅱ，1 min。

9)封片

在組織中央滴加適量的中性樹脂后，一手持載玻片，一手持蓋玻片，輕輕讓蓋玻片中心點(diǎn)接觸到中性樹脂脂滴的凸點(diǎn)，待其兩者接觸后，緩緩放下蓋玻片，讓中性樹脂自然地在蓋玻片下擴(kuò)散開來即可，這樣可以很大程度上避免氣泡產(chǎn)生。

三、注意事項(xiàng)

1)實(shí)驗(yàn)步驟中的時(shí)間需視HE染色試劑盒、組織大小、組織性質(zhì)、室溫等因素而定，初次操作最好預(yù)實(shí)驗(yàn)探明條件后再進(jìn)行正式試驗(yàn)；

2)切片的質(zhì)量直接影響到染色效果的好壞，一般情況下切片厚度通常為3 μm左右，且需注意切片要厚薄均勻，鋪展平整，組織結(jié)構(gòu)完整；

3)脫蠟一定要徹底，否則殘蠟會(huì)附著于組織上導(dǎo)致染出來的片子非常臟，甚至影響觀察；

4)梯度乙醇、二甲苯需要定期更換新的，乙醇揮發(fā)、切片進(jìn)出帶來的水分均會(huì)影響試劑，達(dá)不到實(shí)驗(yàn)的預(yù)期效果，這也提醒我們在每次進(jìn)入下一步之前應(yīng)該吸干切片上多余的水分；

5)染色過程中切勿干片，否則會(huì)導(dǎo)致切片收縮、變形，影響組織形態(tài)；

6)采用中性樹脂封片時(shí)需要注意選擇合適的蓋玻片，以剛好完全蓋住組織為宜；滴加中性樹脂需適量，太少不足以覆蓋整個(gè)組織，太多則會(huì)外溢（外溢后可用棉簽蘸取二甲苯對周圍進(jìn)行擦拭，但一定要小心處理，片子未干前不要碰到蓋玻片）；封片時(shí)最好不要有氣泡產(chǎn)生，以免影響觀察。