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某化合物極易溶于水，需用制備色譜制備其中的雜質(zhì)作為對照品。該化合物分析檢測方法流動相為四丁基高氯酸銨，C18色譜柱，195nm波長。色譜圖如下所示：

目標(biāo)雜質(zhì)出峰時間約為3.0min。通過檢測方法及出峰時間可知，API及目標(biāo)雜質(zhì)極性較大。實(shí)驗(yàn)人員嘗試采用不加鹽或揮發(fā)性鹽的流動相進(jìn)行制備，但化合物主峰導(dǎo)嚴(yán)重干擾目標(biāo)雜質(zhì)峰，無法進(jìn)行有效分離制備。

既然簡單的揮發(fā)性體系無法實(shí)現(xiàn)制備，考慮采取其他方案。后續(xù)有三個方向可開展：離子交換、Hilic模式及反相加鹽。離子交換我們僅有分析柱，上樣量太小，而且方法需開發(fā)，比較耗時，難以脫鹽。Hilic有制備級填料，可用于填裝DAC50色譜柱，但需重新開發(fā)方法定位雜質(zhì)，同樣比較耗時。反相加鹽，直接參照分析方法加入四丁基高氯酸銨。但如何脫鹽？目標(biāo)雜質(zhì)和四丁基高氯酸銨均有較好的水溶性，難以通過萃取等方式脫鹽。二次過柱脫鹽時，一般都是以水和乙腈為流動相體系，通過保留目標(biāo)雜質(zhì)的形式進(jìn)行脫鹽。但目標(biāo)雜質(zhì)在C18填料上不保留該如何脫鹽？

過柱脫鹽利用目標(biāo)物與鹽類之間保留差異進(jìn)行脫鹽。此目標(biāo)雜質(zhì)雖然在C18色譜柱中無保留，然而四丁基高氯酸銨卻能良好的在色譜柱上保留。二次上樣后，目標(biāo)雜質(zhì)在死時間附近流出，四丁基高氯酸銨需要增加流動相才能洗脫下來。按照此方案進(jìn)行雜質(zhì)制備，一次制備圖譜如下所示：

脫鹽利用純水和乙腈作為流動相，采用C18填料，接取5-10鐘之間的色譜峰。高氯酸根在此之前出峰，四丁基銨在此之后出峰。脫鹽圖譜如下所示：

對脫鹽前后樣品溶液中的四丁基高氯酸銨殘留量利用質(zhì)譜檢測。未脫鹽前制備液1.5L，約含2.4g四丁基銨。脫鹽后30ml濃縮液目標(biāo)雜質(zhì)含量約1.7 g，四丁基銨約3mg，含量約為0.2%。通過此方法，有效的去除了目標(biāo)雜質(zhì)中的四丁基銨。當(dāng)然，高氯酸根的殘留量沒有檢測，理論應(yīng)該也不會太多

在利用制備色譜制備雜質(zhì)時，對于極性較大的目標(biāo)物，如果難以用揮發(fā)性組分進(jìn)行制備必須選擇加鹽，此時可考慮加入與目標(biāo)物極性差異較大的鹽類。脫鹽時通過將鹽類保留而目標(biāo)物不保留的方式進(jìn)行脫鹽。