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培養(yǎng)基，又稱生長介質，是由人工配制，用于培養(yǎng)微生物、細胞、組織等，有利其生長繁殖或代謝物產生的的固態(tài)、半固態(tài)、液態(tài)混合營養(yǎng)基質或介質。培養(yǎng)基中含有提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎物質，如碳源、氮源、無機鹽、生長因子等，以及適宜的pH值和滲透壓。

 

培養(yǎng)基在生物學研究中扮演著非常重要的角色。它不僅為微生物提供生長環(huán)境，還可用于分離、純化、鑒定、計數微生物，以及進行藥物篩選、基因工程等研究。下面，將為你詳細介紹實驗室中常用的幾種培養(yǎng)基及其配制方法。

 

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（Nutrient Broth）

 

● 牛肉膏：3.0g

 

● 蛋白胨：10.0g

 

● NaCl：5.0g

 

● 瓊脂粉：15-20g（用于固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

LB培養(yǎng)基

 

● 胰蛋白胨：10g

 

● 酵母粉：5g

 

● NaCl：10g

 

● 瓊脂粉：15-20g（用于固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

LB培養(yǎng)基（含Amp）

 

● 胰蛋白胨：10g

 

● 酵母粉：5g

 

● NaCl：10g

 

● 瓊脂粉：15-20g（用于固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）

 

● 馬鈴薯提取物：200 g（通常使用新鮮馬鈴薯）

 

● 葡萄糖：20 g

 

● 瓊脂粉：15-20 g（用于固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

配制方法：將新鮮馬鈴薯去皮切塊，加入配方所需量蒸餾水煮沸20分鐘，稍稍冷卻后用雙層紗布過濾，得到馬鈴薯浸出液。隨后將葡萄糖和瓊脂粉加入馬鈴薯浸出液中，加熱溶解。pH調至5.6左右， 將配制好的培養(yǎng)基分裝到三角瓶或試管中，121℃高壓滅菌15分鐘。

 

葡萄糖糖發(fā)酵管

 

● 蛋白胨：10g

 

● 酵母粉：5g

 

● 氯化鈉：5g

 

● 磷酸氫二鉀：2g

 

● 葡萄糖：10g

 

● 酚紅指示劑：0.02g

 

● 瓊脂：15g（用于半固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

SOB培養(yǎng)基

 

● 胰蛋白胨：20g

 

● 酵母粉：5g

 

● NaCl：0.5g

 

● ddH2O：加至1L

 

高氏1號培養(yǎng)基

 

● 可溶性淀粉：20g

 

● KNO?：1g

 

● NaCl：0.5g

 

● K?HPO?·3H?O：0.5g

 

● MgSO?·7H?O：0.5g

 

● FeSO?·7H?O：0.01g

 

● 瓊脂：15-20g

 

● ddH2O：加至1L

 

馬丁氏培養(yǎng)基

 

● 葡萄糖：10g

 

● 蛋白胨：5g

 

● KH?PO?：1g

 

● MgSO?：0.5g

 

● 孟加拉紅：0.33g (抑制細菌和放線菌)

 

● 鏈霉素：30mg (抑制細菌和放線菌)

 

● 瓊脂：20g

 

● ddH2O：加至1L

 

明膠培養(yǎng)基

 

● 明膠：120g

 

● 牛肉膏：5g

 

● 蛋白胨：5g

 

● NaCl：5g

 

● ddH2O：加至1L

 

在學實驗中，我們經常還需要需要在培養(yǎng)基中添加抗生素，以篩選含有特定抗性基因的細菌。例如，在克隆實驗中，為了篩選含有重組質粒的細菌，會在培養(yǎng)基中加入相應的抗生素。只有含有抗性基因的細菌才能在含有抗生素的培養(yǎng)基中生長。下面我們再來看看實驗室中常用抗生素的配方：

 

氨芐青霉素（Ampicillin）

 

● 溶解性：易溶于水

 

● 母液濃度：100 mg/mL

 

● 工作濃度：50-100 μg/mL

 

配制方法：稱取1g氨芐青霉素，加入10mL無菌水，充分溶解。分裝成小份，-20℃保存。使用前，根據實驗需要稀釋至工作濃度。

 

卡那霉素（Kanamycin）

 

● 溶解性：易溶于水

 

● 母液濃度：50 mg/mL

 

● 工作濃度：25-50 μg/mL

 

配制方法：稱取0.5g卡那霉素，加入10mL無菌水，充分溶解。分裝成小份，-20℃保存。使用前，根據實驗需要稀釋至工作濃度。

 

氯霉素（Chloramphenicol）

 

● 溶解性：易溶于乙醇

 

● 母液濃度：34 mg/mL

 

● 工作濃度：25 μg/mL

 

配制方法：稱取0.34g氯霉素，加入10mL無菌乙醇，充分溶解。分裝成小份，-20℃避光保存。使用前，根據實驗需要稀釋至工作濃度。

 

四環(huán)素（Tetracycline）

 

● 溶解性：微溶于水，易溶于酸

 

● 母液濃度：12.5 mg/mL

 

● 工作濃度：10-50 μg/mL

 

配制方法：稱取0.125g四環(huán)素，加入10mL無菌水或稀鹽酸，充分溶解。分裝成小份，-20℃避光保存。使用前，根據實驗需要稀釋至工作濃度。

 

需要注意的是，抗生素溶液在配制完畢后，均需要使用針頭過濾器對其進行過濾。配制好的抗生素溶液并非永久有效，應注意保質期。