中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

圖片來源：https://www.technologynetworks.com/proteomics/articles/an-introduction-to-post-translational-modifications-343603

翻譯后修飾（Post-translational modifications, PTMs）由于通常是通過在蛋白分子上增加一個基團達成修飾，對分子本身有物理改變，很可能對WB實驗結(jié)果有所影響。由于翻譯后修飾形式多種多樣，對條帶影響的具體表現(xiàn)包括但不限于以下所舉例子：

1.  分子量變化：磷酸化、糖基化、泛素化、泛素化等眾多翻譯后修飾形式會改變目標蛋白的分子量，可能導致靶標蛋白實際檢測分子量大小出現(xiàn)偏差，蛋白樣品在凝膠上的遷移位置與未修飾蛋白相比發(fā)生偏移，出現(xiàn)更高或更低的分子量帶。

2.  構(gòu)象變化：由于其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生一定改變，將可能影響抗體與表位的結(jié)合，從而減少信號或引起非特異性結(jié)合。

3.  電荷變化：如乙?；?、磷酸化等修飾可以改變蛋白的整體電荷，可能影響電泳過程中的蛋白遷移速率等方面。

4.  溶解性和穩(wěn)定性：翻譯后修飾可能影響蛋白的溶解性和穩(wěn)定性，可能會影響蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上的效率或者影響蛋白在膜上的保留?？梢栽谙卤碇幸桓Q潛在影響：

表1：各種翻譯后修飾對蛋白溶解性與穩(wěn)定性的影響及其機理

● 以下我們將結(jié)合具體蛋白舉一些實例：

1.  ENOS蛋白經(jīng)過肉豆蔻?；⒆貦磅；蛄姿峄刃揎椇?，實際檢測分子量增大，會出現(xiàn)條帶大小增大和多帶現(xiàn)象。

2.  Nrf2蛋白存在多種翻譯后修飾（如乙?；⑻腔?、磷酸化和泛素化），導致實際檢測分子量大小在100kD左右，遠大于其預測大小68kD。此外，由于該蛋白易被降解，樣本處理時加入抑制蛋白酶體的藥物如MG132可以獲得更多信號。同時，其檢測結(jié)果可能出現(xiàn)多帶現(xiàn)象，主要由多種修飾形式和降解產(chǎn)物造成。

3.  CD31蛋白因其存在多個糖基化修飾位點和磷酸化修飾，導致實際檢測時條帶大小可達125kD，比預測大小大四十多個kD。因此，在檢測這類蛋白時要避免膜的移動，保留全部膜，完整觀察膜上的所有條帶，以準確確定蛋白定位；還應另外設置陽性對照組。

4.  Mannose receptor蛋白由于糖基化修飾導致實際檢測分子量大小變?yōu)?00kD左右，而非預測的166kD，反映其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的復雜性；且作為多次跨膜蛋白，樣品制備時不應煮樣，避免蛋白聚集，產(chǎn)生影響蛋白遷移的非特異性結(jié)合或聚合物，進而導致檢測困難或信號弱。

5.  如COX 2蛋白的相關(guān)實驗表明，糖基化修飾也可能造成條帶模糊不清的現(xiàn)象；CD63蛋白具有多糖基化修飾的特點，導致實際檢測到的條帶大小范圍極其廣泛，很可能檢測到的條帶全都出現(xiàn)彌散現(xiàn)象；PD-L1等存在糖基化修飾的腫瘤相關(guān)蛋白，在檢測時也可能出現(xiàn)條帶彌散的現(xiàn)象；這一現(xiàn)象究其根本原因，在于多重糖基化修飾位點的活動不會完全一致，因此帶來多種不同的修飾后蛋白，導致其實際分子量形成一個連貫譜系，表現(xiàn)在條帶上則是廣泛彌散的條帶。

6.  大量的翻譯后修飾導致蛋白存在多種形式，表現(xiàn)在電泳結(jié)果中即是多個條帶。如骨橋蛋白Osteopontin由于存在糖基化、磷酸化等多種翻譯后修飾，在實際實驗中可能檢測到多條蛋白條帶，且大小與預測值32kD嚴重不符；內(nèi)源性c-Myc蛋白在發(fā)育后可能經(jīng)歷修飾，導致其出現(xiàn)多帶條帶，甚至可能有時實驗結(jié)果無信號。

7.  多次跨膜蛋白在高溫下易發(fā)生聚集，如果在制備樣品時煮樣，可能導致后期檢測無信號；抗體的免疫原序列為CXCRF的C端序列如同時存在磷酸化形式，也可能會干擾抗體與蛋白的結(jié)合，導致無信號現(xiàn)象；還有可能是由于蛋白的后修飾導致其分子量變大，實際檢測的條帶位于55或60kD以上，但所使用的抗體識別的范圍卻只覆蓋到50kD以下，因此出現(xiàn)無信號的結(jié)果。