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摘要

 

目的

 

為國(guó)內(nèi)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)、研究和藥物警戒工作提供參考。

 

方法

 

參考《美國(guó)藥典》1085 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則和《中國(guó)藥典》 9251 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則，對(duì)中國(guó)與美國(guó)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理、質(zhì)量管理的異同及指導(dǎo)原則中容易誤讀的要點(diǎn)等相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行介紹和解讀。

 

結(jié)果

 

中國(guó)與美國(guó)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則均在2020 年被首次收載，在背景、檢測(cè)、工作標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定、質(zhì)量管理、限度計(jì)算、替代方法等方面給予了詳細(xì)指導(dǎo)和論述。

 

結(jié)論

 

中國(guó)與美國(guó)內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則作為細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)領(lǐng)域的權(quán)威指導(dǎo)原則，為內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員及《中國(guó)藥典》修訂提供幫助與啟示，并將在實(shí)踐中不斷調(diào)整和完善。

 

關(guān)鍵詞

 

細(xì)菌內(nèi)毒素；中國(guó)藥典；美國(guó)藥典；解讀

 

《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）（簡(jiǎn)稱“《中國(guó)藥典》”）收載了 9251 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則。同年，《美國(guó)藥典》（47 版）（簡(jiǎn)稱“《美國(guó)藥典》”）也收載了1085 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則。表明細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法在世界范圍內(nèi)經(jīng)過(guò)多年發(fā)展，為了應(yīng)對(duì)新的情況，均需要進(jìn)行新的官方解讀和指導(dǎo)。中國(guó)與美國(guó)藥典中的內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則具有多項(xiàng)不同，本研究參考《美國(guó)藥典》1085 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則和《中國(guó)藥典》9251 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則，對(duì)中國(guó)與美國(guó)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理、質(zhì)量管理的異同，指導(dǎo)原則中易誤讀的要點(diǎn)解讀等相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行介紹和探討，解讀異同產(chǎn)生的背景和原因，為內(nèi)毒素檢測(cè)從業(yè)者提供參考。

 

1、中國(guó)與美國(guó)藥典內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則主要內(nèi)容差異

 

《美國(guó)藥典》1085 分為背景、預(yù)備性試驗(yàn)、方法適用性、日常檢測(cè)、替代方法、詞匯表、參考文獻(xiàn)7 個(gè)項(xiàng)目來(lái)進(jìn)行介紹 ，與《中國(guó)藥典》9251 中的內(nèi)容部分重疊（表 1）。

 

 

2、中國(guó)與美國(guó)藥典指導(dǎo)原則的解讀

 

中國(guó)與美國(guó)內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則體例不同，因《美國(guó)藥典》相較《中國(guó)藥典》對(duì)應(yīng)條目更多，因此本文按照《美國(guó)藥典》的體例逐一展開(kāi)，先介紹《美國(guó)藥典》的內(nèi)容，涉及到《中國(guó)藥典》內(nèi)容時(shí)，在本條目中對(duì)比中國(guó)與美國(guó)藥典進(jìn)行介紹。

 

2.1 背景知識(shí)

 

含有熱原的藥物或醫(yī)療器械進(jìn)入哺乳動(dòng)物的血液或腦脊液后，會(huì)引起發(fā)燒等熱原反應(yīng)。進(jìn)入體內(nèi)的方式包括注射、輸液，植入等形式。盡管某些生物制劑、疫苗以及細(xì)胞和基因療法自身的藥理活性可能會(huì)引起患者發(fā)熱，但注射劑和醫(yī)療器械生產(chǎn)中最主要和最易致熱的污染物是細(xì)菌內(nèi)毒素，其為革蘭陰性細(xì)菌（gram-negative bacteria, GNB）細(xì)胞壁的組成部分。

 

術(shù)語(yǔ)“細(xì)菌內(nèi)毒素”或“內(nèi)毒素”是指GNB外細(xì)胞膜的復(fù)雜成分。具有生物活性的脂多糖（lipopolysaccharide, LPS），包括各種蛋白質(zhì)、磷脂和脂蛋白。LPS分子的疏水脂質(zhì)A部分嵌入膜中，親水多糖部分暴露于細(xì)胞周圍的外部環(huán)境。內(nèi)毒素可能會(huì)在GNB 死亡后在細(xì)胞壁片段中保持活性，因此供試品可能是無(wú)菌的，但仍可能檢測(cè)出內(nèi)毒素。注射劑（包括生物產(chǎn)品）或醫(yī)療設(shè)備中存在細(xì)菌內(nèi)毒素時(shí)，表明GNB的生長(zhǎng)發(fā)生在產(chǎn)品制造過(guò)程中的某個(gè)時(shí)間點(diǎn)。藥品生產(chǎn)過(guò)程中，污染內(nèi)毒素的方式有多種，可能源自藥物成分（包括水，原料，賦形劑，包裝材料，清潔或存儲(chǔ)的制造設(shè)備），也可能由于控制措施失效 。

 

當(dāng)前的中國(guó)和美國(guó)的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分為參考標(biāo)準(zhǔn)品（endotoxin reference standard, RSE，中國(guó)稱為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品）和商業(yè)制備的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（Control standard Endotoxin, CSE，中國(guó)稱為“工作標(biāo)準(zhǔn)品”），通常是通過(guò)Westphal熱酚法從 GNB 細(xì)胞膜中提取出來(lái)，并進(jìn)行純化以去除其他的細(xì)胞膜成分 。此外，這些純化的制劑通常還與穩(wěn)定劑 一起配制。但污染藥品的是自然內(nèi)毒素，不會(huì)是使用 Westphal 或其他提取方法制備的純品 LPS。因?yàn)樽匀粌?nèi)毒素本質(zhì)上不以這種純品形式存在。由于內(nèi)毒素來(lái)源和制備方式的差異，內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品可能與天然來(lái)源的內(nèi)毒素有不同的反應(yīng)。即在一些情況下，標(biāo)準(zhǔn)品中的內(nèi)毒素和自然內(nèi)毒素的活性不完全相同 。這些標(biāo)準(zhǔn)品在某些樣品（藥物，生物制品或醫(yī)療器械）回收率實(shí)驗(yàn)中可能無(wú)法代表天然內(nèi)毒素。

 

盡管細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法是通則方法，但仍然需要驗(yàn)證相關(guān)內(nèi)容：計(jì)算或指定被測(cè)物質(zhì)的內(nèi)毒素指標(biāo)或限值，以及計(jì)算最大有效稀釋倍數(shù)（maximum valid dilution, MVD）；然后試驗(yàn)證明可以在不超過(guò)MVD的稀釋下供試品陽(yáng)性對(duì)照（positive product control, PPC）成立。一旦證明了檢測(cè)的適用性，實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)適用性研究中所述的計(jì)算和樣品制備條件進(jìn)行常規(guī)測(cè)試。對(duì)條件的更改（如鱟試劑和/或內(nèi)毒素的來(lái)源、配方或生成工藝的更改等）必須進(jìn)行更改控制，并可能需要重復(fù)進(jìn)行適用性研究 。

 

2.2 預(yù)備性試驗(yàn)

 

《美國(guó)藥典》在預(yù)備性試驗(yàn)中主要包括2 部分內(nèi)容：第一部分，有關(guān)工作標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)定，分為使用RSE 對(duì)CSE的校準(zhǔn)、使用凝膠法確定 CSE效價(jià)、使用定量的動(dòng)態(tài)法和終點(diǎn)法確定 CSE效價(jià)、液體CSE的活性測(cè)定4個(gè)部分內(nèi)容；第二部分，關(guān)于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的質(zhì)量管理，分為試驗(yàn)人員資質(zhì)、設(shè)備和儀器的校準(zhǔn)與檢定、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件 3 項(xiàng)內(nèi)容。

 

《中國(guó)藥典》中目前沒(méi)有收載有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定內(nèi)容。原因在于，我國(guó)與美國(guó)對(duì)內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的管理和使用有較大差別。RSE由美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（US Food and Drug Administration, FDA）生產(chǎn)并組織協(xié)作標(biāo)定給賦值，CSE 由鱟試劑生產(chǎn)廠家生產(chǎn)并根據(jù) RSE 來(lái)標(biāo)定 CSE。我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和工作標(biāo)準(zhǔn)品由國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門依法設(shè)立的藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)生產(chǎn)并組織協(xié)作標(biāo)定賦值。一般藥品質(zhì)量控制者在使用鱟試劑時(shí)，如果使用的是我國(guó)的鱟試劑，則應(yīng)選擇使用中國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。如果使用的是進(jìn)口鱟試劑，則應(yīng)按其要求使用對(duì)應(yīng)的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，不應(yīng)交叉使用。

 

關(guān)于內(nèi)毒素檢測(cè)方面的質(zhì)量管理內(nèi)容，在我國(guó)符合實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的相關(guān)規(guī)定即可。本實(shí)驗(yàn)室的研究人員對(duì)內(nèi)毒素檢測(cè)的質(zhì)量管理內(nèi)容已進(jìn)行過(guò)較為詳細(xì)的介紹，可供相關(guān)檢測(cè)人員參考。

 

2.3 方法適用性

 

《美國(guó)藥典》在本部分共有 3 部分內(nèi)容，包括細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定、MVD 和干擾的排除。在限度的確定方面，《美國(guó)藥典》基本囊括了所有內(nèi)容，包括注射用藥品、眼部用產(chǎn)品、復(fù)合無(wú)菌制劑、活性底物和賦形劑、藥械組合產(chǎn)品以及醫(yī)療器械等。《中國(guó)藥典》只對(duì)注射用藥品的限值確定做了相關(guān)要求，但對(duì)于多種規(guī)格的注射劑以及原料藥制定內(nèi)毒素限值的制定方面給予了明確指導(dǎo)?！睹绹?guó)藥典》在MVD 的介紹方面提出，當(dāng)產(chǎn)品在 MVD 顯示陽(yáng)性時(shí)，表明其不符合內(nèi)毒素限量要求，在這種情況下，可以使用超過(guò) MVD 的稀釋倍數(shù)來(lái)進(jìn)行檢驗(yàn)。并建議實(shí)驗(yàn)室可通過(guò)稀釋至陰性（凝膠法）或到達(dá)標(biāo)準(zhǔn)曲線上的有效讀數(shù)（定量法）的方式來(lái)確定產(chǎn)品中細(xì)菌內(nèi)毒素的總含量。在有關(guān)干擾因素方面，《美國(guó)藥典》比較詳細(xì)地介紹了一些常見(jiàn)的干擾因素產(chǎn)生的原因和排除的方法。

 

《中國(guó)藥典》在“供試品的前處理方法”中重點(diǎn)介紹了目前細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的一些難題，如微球脂質(zhì)體等采用包合技術(shù)制備的特殊樣品，及難溶性的注射用原料藥和輔料，應(yīng)采取特殊的前處理將微球和脂質(zhì)體以及難溶性樣品被包裹的內(nèi)毒素釋放出來(lái)，再進(jìn)行檢測(cè)，并且針對(duì)不同類型的樣品給予了不同的建議 。這部分內(nèi)容是國(guó)內(nèi)針對(duì)各類情況進(jìn)行總結(jié)概括提出的指導(dǎo)，具有很好的可操作性。《美國(guó)藥典》對(duì)此沒(méi)有敘述。

 

2.4 日常檢測(cè)

 

2.4.1 采樣

 

《美國(guó)藥典》對(duì)于樣品的采集要求給予了充分的介紹。包括對(duì)取樣所有材料（勺子、移液管、瓶）的質(zhì)地要求，采用必須采取的預(yù)防措施，生產(chǎn)中循環(huán)水系統(tǒng)中如何取樣，粉狀和顆粒狀固體尤其是對(duì)于高黏度材料如何取樣和應(yīng)注意的問(wèn)題等 。《中國(guó)藥典》對(duì)采樣部分沒(méi)有特別介紹。

 

2.4.2 合并

 

《美國(guó)藥典》對(duì)于樣品的檢驗(yàn)，允許進(jìn)行“合并”檢驗(yàn)。術(shù)語(yǔ)“合并”是指制備一個(gè)混合樣品制劑，其中包括來(lái)自相同批次或不同批次的等分試樣。對(duì)于在藥物產(chǎn)品上進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)分析的實(shí)驗(yàn)室而言，合并是可接受的選擇。但是，合并有許多缺點(diǎn)，最明顯的是，其會(huì)稀釋任何一個(gè)單位中的內(nèi)毒素，從而可能掩蓋了內(nèi)毒素含量。因此應(yīng)盡量設(shè)計(jì)科學(xué)合理的抽樣計(jì)劃。如果合并檢測(cè)，則必須調(diào)整 MVD。調(diào)整后的 MVD 是通過(guò)將原始計(jì)算出的MVD 除以合并的樣品數(shù)來(lái)計(jì)算的。例如若小劑量腸胃外藥物的 MVD 為 240，而制造商選擇合并 3 小瓶樣品進(jìn)行測(cè)試，則調(diào)整后的 MVD 為 240/3，即 80。這種 MVD 的縮小有效地降低了產(chǎn)品的內(nèi)毒素限量因子來(lái)補(bǔ)償合并。雖然合并可能會(huì)使鱟試劑的使用量減少而節(jié)省成本，但是合并時(shí)需要注意：合并可能會(huì)掩蓋各個(gè)樣品單位之間內(nèi)毒素含量的任何不均勻性，而不均一污染的信息可能在排除故障或調(diào)查中很有價(jià)值。應(yīng)當(dāng)始終使用無(wú)菌技術(shù)進(jìn)行等分試樣樣品的合并，并在取出等分試樣之前與各個(gè)單元?jiǎng)×一旌?。如果出現(xiàn)超標(biāo)（out-of-specification, OOS）測(cè)試結(jié)果，應(yīng)保留帶有剩余產(chǎn)品的原始容器以進(jìn)行調(diào)查。建議使用無(wú)熱原的注射器通過(guò)消毒的橡膠塞子取出等分試樣，以便在隨后進(jìn)行的調(diào)查測(cè)試時(shí)保持每個(gè)容器的完整性。調(diào)整后的 MVD 的概念不適用于醫(yī)療器械。藥品的任何抽樣方案都必須代表批次的開(kāi)始、中間和結(jié)束。如果懷疑在制造過(guò)程中有可能存在內(nèi)毒素的污染，則應(yīng)增加取樣。

 

如果在調(diào)整后的 MVD下產(chǎn)品的干擾不能排除，則應(yīng)單獨(dú)測(cè)試樣品。計(jì)算出 MVD 較低的產(chǎn)品，或無(wú)法保證所取等分試樣均一的懸浮液，可能不是合并的良好選擇。合并不適用于過(guò)程中的樣本，尤其是代表制造不同階段的樣本。

 

雖然合并檢測(cè)內(nèi)毒素的方法在《美國(guó)藥典》的框架下是一種可被接受的方案，但在我國(guó)的質(zhì)量控制實(shí)踐中則較少被提及。目前國(guó)內(nèi)的內(nèi)毒素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，也沒(méi)有采用多支樣品的情況。因此《中國(guó)藥典》中沒(méi)有關(guān)于合并檢測(cè)的相關(guān)內(nèi)容。

 

2.4.3 超標(biāo)結(jié)果和重新測(cè)試注意事項(xiàng)

 

應(yīng)明確無(wú)效試驗(yàn)和有效試驗(yàn)的概念。由于系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)（如陰性對(duì)照，PPC，凝膠法中的鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)或光度測(cè)定法中的標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)）的情況會(huì)影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)未按預(yù)期發(fā)揮作用的試驗(yàn)被稱為無(wú)效試驗(yàn)，應(yīng)該跟蹤調(diào)查無(wú)效試驗(yàn)并努力尋找可能需要采取糾正措施的模式和趨勢(shì)。系統(tǒng)適用性參數(shù)全部成立，并經(jīng)過(guò)全面的調(diào)查排查，不存在任何的異常情況，此時(shí)的結(jié)果則被認(rèn)為是有效的。真正的 OOS 結(jié)果僅在執(zhí)行了有效的測(cè)定并產(chǎn)生超出規(guī)格的結(jié)果時(shí)存在。無(wú)效的測(cè)試不是OOS結(jié)果?！睹绹?guó)藥典》還對(duì)OOS調(diào)查的內(nèi)容進(jìn)行了描述?！吨袊?guó)藥典》中沒(méi)有專門關(guān)于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) OOS 結(jié)果的規(guī)定。

 

本實(shí)驗(yàn)室針對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的OOS進(jìn)行了較為詳盡的研究，歸納了OOS產(chǎn)生的原因和解決方案 。

 

2.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線控制

 

在終點(diǎn)濁度法和終點(diǎn)顯色法中，通過(guò)評(píng)估濁度（色度）強(qiáng)度和標(biāo)準(zhǔn)濃度之間的直接關(guān)系，所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有正斜率，曲線的相關(guān)系數(shù)必須≥ 0.980。在動(dòng)態(tài)濁度法和動(dòng)態(tài)顯色法中，通過(guò)繪制反應(yīng)時(shí)間的對(duì)數(shù)值和標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)值的來(lái)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)的這種轉(zhuǎn)換會(huì)導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率為負(fù)，并且相關(guān)系數(shù)必須≤ -0.980。綜上，藥典對(duì)光度測(cè)定法中的線性要求是 | r | ≥ 0.980。并要求用 3 個(gè)有效數(shù)字表示，最后一個(gè)“0”很重要；在一個(gè)控制良好的實(shí)驗(yàn)室中，相關(guān)系數(shù)通常大于 0.980。所有標(biāo)準(zhǔn)曲線都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的線性方程 y = mx + b，其中 m 是標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸線的斜率，b 是 y 軸截距。由于數(shù)據(jù)進(jìn)行了對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化，因此定量分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線可能對(duì)達(dá)限時(shí)間（onset time）的微小變化非常敏感。

 

測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性取決于標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性。因此，對(duì)每個(gè)批次的鱟試劑的達(dá)限時(shí)間進(jìn)行監(jiān)控十分必要 。如分析人員可以在標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋中產(chǎn)生2倍或10倍的稀釋誤差，但仍然可以生成滿足 | r | 要求的線性標(biāo)準(zhǔn)曲線≥ 0.980。僅通過(guò)查看相關(guān)系數(shù)難以注意到稀釋誤差，應(yīng)觀察標(biāo)準(zhǔn)品的達(dá)限時(shí)間與稀釋準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)系列相比。稀釋誤差也將反映在 y 截距生成的值中。斜率的變化也會(huì)影響測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。建議在對(duì)分析人員進(jìn)行定量分析的培訓(xùn)中，強(qiáng)調(diào)可變性（CV）對(duì)測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確性的影響。

 

《中國(guó)藥典》關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線給出的操作細(xì)節(jié)方面的信息較《美國(guó)藥典》少，但要求方面與《美國(guó)藥典》一致。

 

2.5 替代方法

 

在通則細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中列出的用于檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的方法（凝膠限度法、凝膠半定量法、動(dòng)態(tài)顯色法、終點(diǎn)顯色法、動(dòng)態(tài)濁度法、終點(diǎn)濁度法）是法定方法。但實(shí)驗(yàn)室可以選擇使用內(nèi)毒素檢查法中未列出的測(cè)定方法。如果做出這樣的選擇，則必須充分驗(yàn)證用于檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的替代方法，以確保使用的替代方法等同于或優(yōu)于現(xiàn)有的內(nèi)毒素檢查法，并最終由相應(yīng)的監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)。可以在《美國(guó)藥典》1223 替代微生物方法的驗(yàn)證和《美國(guó)藥典》1225 藥典程序的驗(yàn)證中找到有關(guān)如何進(jìn)行替代方法的驗(yàn)證 。

 

《中國(guó)藥典》關(guān)于替代方法的要求與《美國(guó)藥典》類似，《中國(guó)藥典》規(guī)定如果使用 1143 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法以外的方法，應(yīng)遵循藥典凡例的要求進(jìn)行驗(yàn)證，即可作為現(xiàn)有藥典方法的補(bǔ)充方法使用。本實(shí)驗(yàn)室針對(duì)重組 C 因子和微量凝膠法為替代方法分別進(jìn)行了方法學(xué)和品種適用性研究，并針對(duì)替代方法的應(yīng)用進(jìn)行了詳細(xì)解讀 。

 

2.6 產(chǎn)品內(nèi)毒素檢查法的建立

 

《中國(guó)藥典》對(duì)產(chǎn)品的內(nèi)毒素檢查法的建立有專門的規(guī)定，此部分內(nèi)容《美國(guó)藥典》中沒(méi)有相關(guān)規(guī)定?！吨袊?guó)藥典》規(guī)定為了驗(yàn)證樣品和不同廠家鱟試劑反應(yīng)的一致性：應(yīng)使用 2 個(gè)生產(chǎn)廠家的鱟試劑對(duì)至少 3 批樣品進(jìn)行干擾試驗(yàn)。并且明確建議了不宜建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)的情況：無(wú)法排除供試品對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的干擾作用或只能使用最高靈敏度鱟試劑（凝膠法 0.03 EU·mL-1，光度法 0.001 EU·mL-1）。這2方面規(guī)定充分考慮了中國(guó)的鱟試劑管理、生產(chǎn)和使用的特點(diǎn)，具有較強(qiáng)的實(shí)際意義。

 

3、內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則的意義

 

藥典中的檢測(cè)方法眾多，專門為檢測(cè)方法的應(yīng)用建立的指導(dǎo)原則并不多見(jiàn)。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法是藥品安全性的重要檢查項(xiàng)目，中國(guó)與美國(guó)等國(guó)家藥典中專門收載細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的指導(dǎo)原則體現(xiàn)出該方法在藥品質(zhì)量控制中的重要地位。同時(shí)也說(shuō)明該方法在應(yīng)用過(guò)程中需要特殊注意的方面較多。無(wú)論是國(guó)內(nèi)外內(nèi)毒素檢測(cè)應(yīng)用方面的研究仍然是研究熱點(diǎn)。

 

4、結(jié)論

 

4.1《中國(guó)藥典》在方法的選擇、供試品的前處理方法、產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法建立給予了較多指導(dǎo)

 

隨著內(nèi)毒素檢查法在中國(guó)的發(fā)展，出現(xiàn)了以下 5個(gè)主要問(wèn)題，包括：更多種類的樣品需要制定內(nèi)毒素限度；伴隨光度法鱟試劑的國(guó)產(chǎn)化，國(guó)內(nèi)用戶在試驗(yàn)方法上可供原則也更加寬泛；新型制劑、難溶性樣品內(nèi)毒素檢測(cè)新問(wèn)題的出現(xiàn)；國(guó)內(nèi)多廠家鱟試劑差異仍然存在；替代方法的出現(xiàn)?！吨袊?guó)藥典》內(nèi)毒素檢查法針對(duì)國(guó)內(nèi)的發(fā)展階段，有針對(duì)性地對(duì)上述 5 個(gè)方面給予明確指導(dǎo)和要求。

 

4.2《美國(guó)藥典》在生產(chǎn)過(guò)程中、實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)、質(zhì)量管理給予了較多指導(dǎo)

 

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法作為一種生物檢定而非理化檢測(cè)方法，《美國(guó)藥典》為了使得更多從業(yè)者正確理解內(nèi)毒素檢查法特性，在指導(dǎo)原則中介紹了大量的內(nèi)毒素檢測(cè)相關(guān)知識(shí)和信息，從細(xì)菌內(nèi)毒素的基本性質(zhì)到實(shí)驗(yàn)中的細(xì)節(jié)信息，再到生產(chǎn)和檢驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量管理。對(duì)于新的從業(yè)人員了解，掌握細(xì)菌內(nèi)毒素十分有益。

 

4.3 中國(guó)與美國(guó)內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則各有特色

 

《美國(guó)藥典》給予的檢測(cè)相關(guān)信息較多；《中國(guó)藥典》給予的明確要求較多。在實(shí)際應(yīng)用中，對(duì)于中國(guó)的藥品從業(yè)者，了解相關(guān)知識(shí)和信息后，有利于對(duì)內(nèi)毒素檢查法加深理解，并可同時(shí)遵照《中國(guó)藥典》的要求執(zhí)行。

 

綜上所述，中國(guó)與美國(guó)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則均為收載于藥典中的指導(dǎo)原則，根據(jù)中國(guó)與美國(guó)實(shí)際情況而具有不同的側(cè)重點(diǎn)，《中國(guó)藥典》中的指導(dǎo)原則傾向于在檢驗(yàn)應(yīng)用方面；而《美國(guó)藥典》的指導(dǎo)原則傾向于生產(chǎn)過(guò)程方面。中國(guó)與美國(guó)藥典收錄內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則，為內(nèi)毒素檢測(cè)工作者提供了權(quán)威的技術(shù)指導(dǎo)原則，更加有力地保障藥品的質(zhì)量安全。