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在雜質的研究中，除了對雜質做定性研究之外，很多時候也需要做定量方面的研究，從而能比較準確地了解雜質的真實含量，和高效液相數據的匹配度如何，為進一步把控藥物工藝路線中的中間體、終產API和藥物制劑中所含有的雜質提供更可靠的事實依據。目前，國內雜質標準品的定量研究，主要采用兩種方法：質量平衡法，包括熱重分析（Thermogravimetric Analysis，TG或TGA）技術以及水分加溶劑殘留技術；另外就是定量核磁（Quantitative Nuclear Magnetic）方法。在SINCO藥物標準品研究和銷售中，很多客戶會要求選擇上述方法之一來對要購買的藥物雜質進行定量分析。

作為一門近年來比較熱門的分析技術，如果不能很好地理解它的技術特點和要求，難免會引起認知上的困擾和檢測結果的準確性，影響與客戶的順利溝通。結合我們工作中遇到的一些問題，糅合相關信息資料，拋磚引玉，談談我們對定量核磁的一些淺顯認識。

整個定量核磁的檢測過程包括：待測樣品和標準樣品（內標物）的準備，樣品的稱量，配（氘代溶）液和轉移，進行qNMR檢測，數據處理與計算這五個步驟（圖1）。我們知道分析誤差是可以疊加的，分析過程中每一個步驟產生的誤差，會最終加合到一起，所以需要從最開始的樣品稱量就要力爭免除不必要的誤差。

圖1. qNMR檢測流程

具體來說，稱量的時候要做到如下要求：

1.使用按規(guī)范校準過的超微量天平（即十萬分之一天平）；

2.稱量前要清潔桌面；

3.稱量前要把天平的稱量臺面清潔干凈；

4.稱量時使用鑷子，而不是直接用手（手指會沾染樣品，造成樣品量損失）；

5.在第一次稱量前，先將一個空樣品瓶放在天平稱量臺面數分鐘；

6.檢查天平附近有沒有磁性物體；

7.用邊緣比較薄的樣品瓶稱量；

8.稱量前，輕輕地敲擊樣品瓶，使得粘附的樣品抖落到瓶底；

9.樣品瓶在稱量臺上的時候，不要往瓶里加樣品；

10.稱量時完全關閉天平門，杜絕氣流的影響；

11.調零前，要等天平顯示數據先穩(wěn)定下來；

12.將樣品瓶儲存在天平附近；

13.為避免誤差過大，樣品稱量的量>10 mg為宜。

1、標準樣品或內標物的選擇：

標準樣品或內標物通常結構簡單，有一組或兩組核磁出峰。具有較高的純度（≥99%），吸濕性不強，化學性質穩(wěn)定，可以長久保存，不揮發(fā)，且溶于指定的氘代溶劑中，不與待測樣品的定量峰互相干擾重疊。因為有部分內標物仍會微量吸潮，所以內標物要求置于干燥器中保存。

下面表格是幾種常用內標物的相關數據歸納，可以供研究人員參考選擇：

表1：常用定量核磁標準品

2、氘代溶液配制：

氘代溶劑一般根據內標物及待測樣品的性質來定。盡可能消除活潑質子的影響，使樣品完全溶解:

1.不含活潑質子的非極性化合物，可選用氣代氫仿“做溶劑;

2.含活潑質子的極性化合物，常用的溶劑有DMSO-d6+D20(加重水是為了消除活潑質子的影響)、D20和CD3OD等:

3.如果用DMSO-d6+D20作溶劑，一般兩者的比例為5:1。兩者比例可做適當調整保證混合樣品完全溶解;

4.既不溶于有機溶劑，也不溶于水，比如氨基酸類兩性化合物“等，可以采用DMSOd6/D20+酸/堿的方法。需要保證酸/堿不會影響待測物和內標的穩(wěn)定性;

5.對于一些特殊結構的樣品，如果其特征信號在水峰附近，很難保證基線的水平，會影響測定結果?？捎玫姆椒ㄊ羌尤隩FA移除水峰。需要保證TFA不影響待測物的穩(wěn)定

3、qNMR檢測:

進行qNMR檢測的時候，因為考慮到要對峰面積精準積分，所以檢測方法的一些數據設定也有要求(核磁檢測軟件中進行設置，此處不做介紹)。一般要求D1>5T1;S/N>150(即信噪比)。T1(即弛豫時間)一般為1s，D1(即延遲時間)一般選510s。延遲時間(D1)直接影響激發(fā)核能否恢復至平衡基態(tài)，而能否恢復基態(tài)影響核磁的響應信號。因此合適的D1對qNMR定量結果影響較大。但過長的D1又會增加單次掃描所需的時間。

在實際操作中，如需縮短延遲時間，可以通過加入順磁物質。而如果D1過短，可以引入校正因子f校正D1時間不足導致的定量偏差。就掃描時間而言，相同操作條件下，靈敏度與掃描次數呈正比。如果掃描次數太少，數據重現性會較差。但如果掃描次數過多則會造成試驗效率低下。因此qNMR定量需優(yōu)化掃描次數，是掃描時間和靈敏度達到最佳平衡。

4、數據處理與計算：

牽扯到數據分析的時候，因為待測樣品往往出峰復雜，所以選擇哪個或哪幾個核磁峰為定量峰也有講究。一般盡可能保證信號峰間的基線分離;定量峰峰形盡可能類似;定量峰盡可能靠近(如果標準樣品峰與定量峰相隔太遠，對基線校正的要求極高，誤差大);二者峰面積盡可能接近;衛(wèi)星峰盡可能不干擾測定結果等。另外標準樣品和待測樣品的摩爾量(有效)要接近，不然誤差也是比較大的。這些對于含量比較高的API或其工作對照品，影響會比較明顯。

對于待測樣品和標準樣品，其中一個或兩者均有一個以上可用定量峰的情況下，需做合理選擇。如果同一成分的可用定量峰的積分值接近，可取其平均值;如果其積分值有一定差距，建議采用積分值小的那個，一般結果比較合理。

以上是SINCO藥物標準品相關分析研究人員在定量核磁的檢測和分析中，綜合有關文信息，加上自身經驗的總結，得到的一些淺薄認知，希望能和國內的眾多標準品研究人員相互學習，共同進步。