您當(dāng)前的位置：檢測(cè)資訊 > 科研開發(fā)
嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2025-02-13 08:24
摘 要： 建立高效液相色譜法測(cè)定異丙醇-水溶液中利血平含量。采用Eclipse Plus C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）分離，以甲醇-水溶液（體積比為8∶2）作為流動(dòng)相等度洗脫，采用波長(zhǎng)為268 nm的二極管陣列檢測(cè)器，流量為0.5 mL/min，柱溫為40 ℃。利血平的質(zhì)量濃度在0.2～10 μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，檢出限為0.05 μg/mL。利血平的加標(biāo)回收率為100.20%～100.39%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43%～0.81%（n=6）。該方法簡(jiǎn)單可靠，重復(fù)性好，適用于異丙醇-水溶液中利血平含量的測(cè)定。
關(guān)鍵詞： 利血平； 高效液相色譜法； 異丙醇-水溶液； 方法驗(yàn)證
利血平是從蘿芙木屬多種植物中提出的一種吲哚型生物堿[1]，具有降低血壓、減緩心率和抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用[2]，由于其降壓效果顯著、價(jià)格低廉而深受高血壓患者青睞。
高效液相色譜法是一種以液體作為流動(dòng)相的分離與分析方法，具有強(qiáng)選擇性、高準(zhǔn)確性、可量化和定量分析等優(yōu)點(diǎn)[3-4]，在分離、鑒別和定量目標(biāo)組分方面發(fā)揮了重要作用。
目前對(duì)利血平含量的檢測(cè)方法主要包括分光光度法[5]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6]、高效液相色譜法[7]等。其中分光光度法操作簡(jiǎn)單、成本低，但需加耦合試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)后才能進(jìn)行檢測(cè)，前處理方法復(fù)雜；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法方法快速、準(zhǔn)確，能同時(shí)進(jìn)行定性、定量分析，但對(duì)設(shè)備和操作技術(shù)要求較高，費(fèi)用大；高效液相色譜法精密度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)，方法簡(jiǎn)便、選擇性好、操作方便，是研究者的首選方法。目前對(duì)于利血平檢測(cè)方法的優(yōu)化研究?jī)H包含波長(zhǎng)、色譜柱、流動(dòng)相、柱流速和柱溫中的一項(xiàng)或幾項(xiàng)，尚未有文獻(xiàn)專門針對(duì)利血平的最優(yōu)色譜條件進(jìn)行全面的分析。
筆者采用高效液相色譜法對(duì)利血平含量的測(cè)定進(jìn)行了以上五個(gè)方面的優(yōu)化。以異丙醇-水溶液為溶劑，建立了一種簡(jiǎn)單、高效、準(zhǔn)確可行的分析方法。該方法可用于異丙醇-水溶液中利血平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性及穩(wěn)定性的檢測(cè)，確保標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值不受方法影響，同時(shí)為今后利血平的檢測(cè)提供了數(shù)據(jù)支撐和理論依據(jù)。
1、 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 主要儀器與試劑
高效液相色譜儀：1260 Infinity型，二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司。
電子天平：ME235S型，感量為0.01 mg，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司。
甲醇、乙腈：均為色譜純，德國(guó)默克公司。
異丙醇：質(zhì)譜純，德國(guó)默克公司。
利血平純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為99.3%，U=0.5%，k=2，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)為GBW (E)090901，廣東省計(jì)量科學(xué)研究院。
超純水機(jī)：Milli-Q系統(tǒng)，美國(guó)密理博公司。
異丙醇-水溶液：異丙醇與水的體積比為1∶1。
1.2 色譜條件
色譜柱：Eclipse Plus C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，美國(guó)安捷倫科技有限公司）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣體積：20 μL；流動(dòng)相：甲醇-水溶液(體積比為8∶2，下同)；洗脫方式：等度洗脫；柱流量：0.5 mL/min；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器（DAD檢測(cè)器）；檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm。
1.3 溶液配制
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：控制室溫為(20±2) ℃，準(zhǔn)確稱取10.12 mg的利血平純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，根據(jù)重量-容量法，用異丙醇-水溶液將其稀釋至100 mL，制得質(zhì)量濃度為100 µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。
利血平樣品溶液：準(zhǔn)確移取2 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于200 mL容量瓶中，用異丙醇-水溶液稀釋至標(biāo)線，制得質(zhì)量濃度為1 µg/mL的利血平樣品溶液。
空白溶液：精密移取同體積的異丙醇與超純水于容量瓶中，混合均勻。
系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，通過重量法將其逐級(jí)稀釋，制得質(zhì)量濃度分別為0.2、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法
首先根據(jù)二極管陣列檢測(cè)器的光譜掃描，選擇最佳吸收波長(zhǎng)，采用單因素實(shí)驗(yàn)進(jìn)行條件分析，通過分析色譜柱的類型、流動(dòng)相的種類及比例、柱流速及柱溫，根據(jù)樣品與雜質(zhì)的分離度、色譜峰面積的大小和出峰時(shí)間的長(zhǎng)短等，依次選擇最優(yōu)分析條件[8]。為確保優(yōu)化后的分析條件準(zhǔn)確可靠，還需對(duì)優(yōu)化后的條件進(jìn)行驗(yàn)證。通過方法學(xué)試驗(yàn)[9-11]進(jìn)行考察，驗(yàn)證優(yōu)化后的分析條件是否可行。
2、 結(jié)果與討論
2.1 分析方法優(yōu)化
2.1.1 波長(zhǎng)的選擇
選擇光譜掃描模式，在波長(zhǎng)為190～400 nm條件下，對(duì)利血平溶液進(jìn)行全掃描。利血平樣品溶液在不同波長(zhǎng)下的光譜圖如圖1所示，從圖1中可以看出，溶液在218、268、292 nm處均有強(qiáng)吸收。由于292 nm處是肩峰，溶劑在低波段218 nm處有紫外吸收，易對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，且在該波段基線噪聲和漂移相對(duì)較大，雜質(zhì)峰較多，因此218 nm和292 nm均不適合作為分析條件[12]。波長(zhǎng)為268 nm時(shí)峰形平緩，干擾相對(duì)較少，因此選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm。
圖1 利血平樣品溶液在不同波長(zhǎng)下的光譜圖
Fig. 1 Spectrogram of reserpine sample solution at different wavelengths
2.1.2 色譜柱的選擇
設(shè)置波長(zhǎng)為268 nm，考察SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Eclipse Plus C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)、Poroshell 120 EC-C18(150 mm×4.6 mm，4 μm)3種不同類型的色譜柱的分離效果，分離色譜圖如圖2所示。從圖2中可以看出，由于SB-C18的色譜柱較長(zhǎng)，利血平的出峰時(shí)間較長(zhǎng)(12.33 min)，同時(shí)相比較其他兩個(gè)色譜柱，色譜峰面積也較小，峰形較差，有拖尾。Eclipse Plus C18和Poroshell 120 EC-C18 2種色譜柱的出峰時(shí)間和峰面積相差不大，Eclipse Plus C18的出峰時(shí)間稍短，面積稍大，且峰形相對(duì)于Poroshell 120 EC-C18較好，因此最終選擇色譜柱為Eclipse Plus C18色譜柱。
圖2 不同型號(hào)色譜柱的分離色譜圖
Fig. 2 Separation chromatogram of different types of column
2.1.3 流動(dòng)相的選擇
流動(dòng)相的選擇直接影響色譜峰的分離度[13]，選擇合適的流動(dòng)相，既要將色譜峰與雜質(zhì)峰完全分離開，又要盡可能縮短檢測(cè)時(shí)間，增大峰面積。
根據(jù)文獻(xiàn)[14-16]知，利血平檢測(cè)的流動(dòng)相種類一般為甲醇-水或乙腈-水體系。考察流動(dòng)相為甲醇-水(9∶1，體積比，下同)、甲醇-水(8∶2)、乙腈-水(8∶2)、乙腈-水(7∶3)時(shí)的分離效果。結(jié)果表明，隨著甲醇或乙腈比例的降低，出峰時(shí)間逐漸增長(zhǎng)，在流動(dòng)相為甲醇-水(9∶1)和乙腈-水(8∶2)時(shí)，利血平的峰與雜質(zhì)峰未能分開，且峰型較差，峰有前伸或者拖尾；流動(dòng)相為甲醇-水(8∶2)和乙腈-水(7∶3)時(shí)，利血平色譜峰較平緩，峰型較好。其中流動(dòng)相為甲醇-水(8∶2)時(shí)，峰面積略大，出峰時(shí)間較短，因此選擇甲醇-水(8∶2)作為流動(dòng)相。
2.1.4 柱流量的選擇
柱流量的大小直接影響色譜峰的出峰時(shí)間和峰面積。其他初始條件不變，考察不同柱流量(0.25、0.50、0.75、1.00 mL/min)時(shí)的色譜分離情況。結(jié)果表明，隨著流量的減小，出峰時(shí)間逐漸增長(zhǎng)，色譜峰形漸寬，峰面積逐漸增大，峰面積的大小受流量影響顯著。柱流量為0.25 mL/min時(shí)出峰時(shí)間長(zhǎng)導(dǎo)致峰形太寬，影響分離效果。綜合考慮，最終選擇柱流量為0.50 mL/min。
2.1.5 柱溫的選擇
由于液相色譜柱的壽命一般在40 ℃下可保持最優(yōu)，考察色譜柱的柱溫為30、35、40 ℃時(shí)色譜柱的分離情況，結(jié)果表明，隨著柱溫的升高，出峰時(shí)間相差不大，峰面積逐漸增大，因此最終選擇色譜柱的柱溫為40 ℃。
2.2 專屬性試驗(yàn)
在1.2儀器工作條件下，將空白溶液、樣品溶液以及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照品進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖如圖3所示。從圖3中可以看出，空白溶液對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾，對(duì)照溶液和樣品溶液對(duì)應(yīng)峰的保留時(shí)間一致，該方法專屬性良好。
圖3 空白溶液、樣品溶液和對(duì)照品溶液色譜圖
Fig. 3 Chromatogram of blank solution，sample solution and control solution
2.3 分析方法驗(yàn)證
2.3.1 線性關(guān)系及檢出限
將系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在1.2儀器工作條件下進(jìn)行分析，以質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積積分值(y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。按信噪比為3對(duì)應(yīng)的利血平濃度確定方法檢出限，信噪比為10對(duì)應(yīng)的利血平濃度確定方法定量限。結(jié)果表明，利血平的質(zhì)量濃度在0.2～10 μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好。利血平溶液的線性方程為y=55.453x-6.906 6，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。方法檢出限為0.05 μg/mL，定量限為0.16 μg/mL。
2.3.2 加標(biāo)回收和精密度試驗(yàn)
選取異丙醇-水溶液空白樣品，分別置于容量瓶中，6份為一組，分別加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液50、250、1 000 μL，制得加標(biāo)量分別為1、5、20 μg 3個(gè)加標(biāo)水平的加標(biāo)樣品溶液，每個(gè)加標(biāo)水平平行測(cè)定6次，在1.2儀器工作條件下進(jìn)行分析。加標(biāo)回收及精密度試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知，利血平溶液的平均回收率為100.20%～100.39%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43%～0.81%(n=6)。表明該方法的精密度良好、準(zhǔn)確可靠。
表1 加標(biāo)回收和精密度試驗(yàn)結(jié)果
Tab. 1 Results of standard recoveries and precision test
2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)
在1.2儀器工作條件下，在不同的時(shí)間內(nèi)測(cè)定相同濃度的異丙醇-水溶液中利血平。每個(gè)樣品測(cè)量3次，取平均值為最終測(cè)量結(jié)果，測(cè)量時(shí)間為5天，每隔兩天測(cè)量一次，穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知，在不同的時(shí)間內(nèi)測(cè)量結(jié)果未發(fā)生明顯變化，表明該方法的穩(wěn)定性良好。
表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
Tab. 2 Results of stability test
3、 結(jié)語(yǔ)
通過色譜條件的優(yōu)化，建立了高效液相色譜法測(cè)定異丙醇-水溶液中利血平，該方法精密度高、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性強(qiáng)，可為今后利血平溶液的檢測(cè)提供科學(xué)依據(jù)和參考。
參考文獻(xiàn)：
1 王順民，楊曉丹，曾勇，等.利血平對(duì)大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞自噬的影響［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2020，17（16）：4.
WANG Shunmin，YANG Xiaodan，ZENG Yong，et al. The effect of reserpine on autophagy of rat aortic smooth muscle cells［J］. Chinese Medical Journal，2020，17（16）：4.
2 鄧映明，吳儀，張雁，等. HPLC法測(cè)定復(fù)方雙嗪利血平片含量均勻度及溶出度［J］.廣東化工，2022，49（21）：209.
DENG Yingming，WU Yi，ZHANG Yan，et al. Determination of content uniformity and dissolution of Compound Dipyrizine and Levofloxacin Tablets by HPLC ［J］. Guangdong Chemical Industry，2022，49（21）：209.
3 楊慧.高效液相色譜儀在食品檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.中國(guó)食品工業(yè)，2023（18）：82.
YANG Hui. Application of high performance liquid chromatography in food detection［J］. China Food Industry，2023 （18）：82.
4 亓秀華.高效液相色譜法在藥品成分分析中的應(yīng)用及優(yōu)化研究［J］.當(dāng)代化工研究，2024（3）：123.
QI Xiuhua. Application and optimization of high performance liquid chromatography in drug component analysis［J］. Contemporary Chemical Research，2024（3）：123.
5 龍絳雪，蔣太煜，徐文宣，等.云南蘿芙木中利血平含量測(cè)定方法的建立［J］.西部林業(yè)科學(xué)，2014，43（1）：110.
LONG Jiangxue，JIANG Taiyu，XU Wenxuan，et al. Establishment of a method for determining the content of reserpine in Yunnan Luofu wood［J］. Western Forestry Science，2014，43（1）：110.
6 樊磊磊，劉乃強(qiáng)，李振國(guó). UPLC-MS/MS定性定量檢測(cè)清腦保心康膠囊中非法添加的利血平［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（34）：10.
FAN Leilei，LIU Naiqiang，LI Zhenguo. Qualitative and quantitative detection of illegally added reserpine in Qingnao-baoxinkang Capsules by UPLC-MS/MS ［J］. Chinese Medical Guidelines，2012，10（34）：10.
7 錢敏，宋冬梅，凌霞，等. HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方利血平片中7個(gè)成分的含量［J］.藥物分析雜志，2022，42（7）：1 110.
QIAN Min，SONG Dongmei，LING Xia，et al. Simultaneous determination of seven components in compound reserpine tablets by HPLC ［J］. Journal of Drug Analysis，2022，42（7）：1 110.
8 李鋒麗，邱黛君，楊中元，等.甲醇中滅幼脲和除蟲脲溶液液相色譜儀分析方法的研究［J］.工業(yè)計(jì)量，2023，33（1）：9.
LI Fengli，QIU Daijun，YANG Zhongyuan，et al. Study on the liquid chromatography analysis method of chlorpyrifos and pyrethroid solutions in methanol［J］. Industrial Metrology，2023，33（1）：9.
9 劉貝妮，王志偉，吳晗，等.敵草快及敵草快二氯鹽中2，2'-二聯(lián)吡啶的高效液相色譜分析方法研究［J］.世界農(nóng)藥，2023，45（12）：45.
LIU Beini，WANG Zhiwei，WU Han，et al. Analysis method of 2，2'-dipyridyl in diquat dibromide and diquat dichloride by HPLC［J］. World Pesticide，2023，45（12）：45.
10 鄭楊，李巖.3%氯氟吡啶酯乳油高效液相色譜分析方法研究［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2023，44（6）：22.
ZHENG Yang，LI Yan. Study on the high performance liquid chromatography analysis method of 3% chlorofluoropyridine ester emulsion［J］. Pesticide Science and Management，2023，44（6）：22.
11 王立新，崇小萌，姚尚辰，等.阿莫西林克拉維酸鉀制劑中有關(guān)物質(zhì)超高效液相色譜分析方法的建立［J］.中國(guó)藥物評(píng)價(jià)，2021，38（4）：294.
WANG Lixin，CHONG Xiaomeng，YAO Shangchen，et al. Establishment of ultra-high performance liquid chromatography analysis method for related substances in amoxicillin and clavulanate potassium preparations［J］. China Drug Evaluation，2021，38（4）：294.
12 張慧穎，龔云麒，蔡傳濤，等.高效液相色譜法測(cè)定蘿芙木中利血平的含量［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，30（2）：7.
ZHANG Huiying，GONG Yunqi，CAI Chuantao，et al. Determination of reserpine content in Lophus chinensis by high-performance liquid chromatography［J］. Journal of Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，2007，30（2）：7.
13 蔡瑋，吳紅，趙海波.高效液相色譜儀測(cè)定萘色譜分析方法［J］.計(jì)量技術(shù)，2019（10）：28.
CAI Wei，WU Hong，ZHAO Haibo. High performance liquid chromatography for the determination of naphthalene chromato-graphic analysis method［J］. Metrological Technology，2019，（10）：28.
14 喬冰. HPLC法測(cè)定利血平注射液的含量［J］.黑龍江科技信息，2011（29）：39.
QIAO Bing. Determination of the content of reserpine injection by HPLC ［J］. Heilongjiang Science and Technology Information，2011（29）：39.
15 張玉娟，張曉明，張柏桃. HPLC同時(shí)測(cè)定復(fù)方利血平片中5個(gè)成分的溶出度［J］.華西藥學(xué)雜志，2023，38（1）：100.
ZHANG Yujuan，ZHANG Xiaoming，ZHANG Botao. Simultaneous determination of the dissolution of five components in Compound Reserpine Tablets by HPLC ［J］. Huaxi Pharmaceutical Journal，2023，38（1）：100.
16 趙成瑞，王勇，王哲焱.生物檢材中利血平的高效液相色譜/質(zhì)譜和高效液相色譜的檢測(cè)［J］.臨床醫(yī)藥實(shí)踐，2010，19（3）：90.
ZHAO Chengrui，WANG Yong，WANG Zheyan. Detection of reserpine in biological samples by high-performance liquid chromatography/mass spectrometry and high-performance liquid chromatography［J］. Clinical Medical Practice，2010，19（3）：90. 上接第78頁(yè)）
17 邱明鳴，朱育鳳，倪昌榮.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定前胡藥材中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量［J］. 中國(guó)藥業(yè)，2022，31（11）：70.
QIU Mingming，ZHU Yufeng，NI Changrong. Simultaneous determination of praeruptorin A and praeruptorin B in Peucedani Radix by HPLC ［J］. China Pharmaceuticals，2022，31（11）：70.
18 高平，牛亞靜.高效液相一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定參蘇片中葛根素，迷迭香酸，白花前胡甲素，白花前胡乙素，白花前胡E素的含量［J］.中國(guó)藥師，2020，23（2）：132.
GAO Ping，NIU Yajing. Simultaneous determination of puerarin，rosmarinic acid，Praeruptorin A，Praeruptorin B and Praeruptorin E in Shensu Tablets by HPLC-QAMS ［J］. China Pharmacist，2020，23（2）：132.
19 趙萬(wàn)晴，戚繼紅.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2016，25（21）：60.
ZHAO Wanqing，QI Jihong. Simultaneous content determination of Praeruptorin A and Praeruptorin B in Zhike Tablets by HPLC［J］. China Pharmaceuticals，2016，25（21）：60.
20 胡志軍，陳建秋. HPLC測(cè)定不同基原陳皮藥材中橙含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（10）：95.
HU Zhijun，CHEN Jianqiu. Content determination of hesperidin from different kinds of pericarpium citri reticulatae by HPLC ［J］. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2012，18（10）：95.
21 于霞，吳娟，姜雪，等. HPLC法同時(shí)測(cè)定消乳散中甘草苷、橙皮苷和甘草酸銨的含量［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，34（5）：369.
YU Xia，WU Juan，JIANG Xue，et al. Simultaneous determination of Liquiritin，Hesperidin and Ammonium Glycyrrhetate in Xiaorusan by HPLC ［J］. Journal of Shenyang Pharmaceutical University，2017，34（5）：369.
22 趙磊，孫艷濤，張晗，等.高效液相色譜法測(cè)定武力拔寒散中橙皮苷的含量［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2017，26（3）：50.
ZHAO Lei，SUN Yantao，ZHANG Han，et al. Determination of Hesperidin in Wuli Bahan Powders by high performance liquid chromatography［J］. Chemical Analysis and Meterage，2017，26（3）：50.
引用本文： 王曉冰，宋增良，郭碩 . 高效液相色譜法測(cè)定異丙醇-水溶液中利血平［J］. 化學(xué)分析計(jì)量，2024，33（11）：102. (WANG Xiaobing, SONG Zengliang, GUO Shuo. Determination of reserpine in isopropyl alcohol-aqueous solution by high performance liquid chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(11): 102.)
來源：化學(xué)分析計(jì)量
關(guān)于我們 聯(lián)系我們 營(yíng)業(yè)執(zhí)照 全國(guó)服務(wù)電話：400-818-0021 嘉峪檢測(cè)版權(quán)所有 備案號(hào)：京ICP備14047019號(hào)-2 
京公網(wǎng)安備11010802046783號(hào)
