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透明質(zhì)酸又稱玻尿酸(英文縮寫為HA),是一種以葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖胺為雙糖單位交替連接而成的黏多糖。作為皮膚水嫩的重要基礎(chǔ)物質(zhì),它本身也是人體的成分之一,它具有特殊的保水功能,吸水量可達其本身重量的100倍,是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中保濕性最好的物質(zhì),被稱為理想的天然保濕因子。能改善肌膚營養(yǎng)代謝,使肌膚柔嫩光滑,去皺,增加彈性,防止衰老,在保濕的同時又是一種很好的透皮吸收促進劑。以下小編將針對透明質(zhì)酸的純化方法做一介紹。

1.季銨鹽純化法

原理：HA在低鹽濃度下與季銨鹽結(jié)合形成不溶絡(luò)合物，在高鹽濃度下該絡(luò)合物解離，釋放出透明質(zhì)酸，從而實現(xiàn)從發(fā)酵液中粗提HA。

案例及效果：甘肅省科學(xué)院生物研究所的方法包括透明質(zhì)酸粗提、氯代十六烷基吡啶絡(luò)合、透明質(zhì)酸精提，最終發(fā)酵液廢液中未檢出透明質(zhì)酸，回收率高達98%。上海佰加壹醫(yī)藥有限公司在絡(luò)合沉淀階段，讓透明質(zhì)酸鈉與CPC、CTAB或CTAC充分絡(luò)合，棄去上清液后，加水?dāng)嚢柘礈旖j(luò)合沉淀，重復(fù)洗滌1 - 5次再收集。其中使用CTAC絡(luò)合沉淀，使透明質(zhì)酸鈉中雜質(zhì)核酸的吸收度（A257nm）平均降低59.82%，蛋白質(zhì)的吸收度（A280nm）平均降低54.25%，蛋白質(zhì)含量平均降低75.52%。

2. 乙醇沉淀法

特點及應(yīng)用方式：是從溶液中定量回收透明質(zhì)酸的簡單方法，但對工藝條件控制要求嚴格，常配合其他方法使用。

案例及效果：菲地亞有限公司用乙醇沉淀配合分子過濾純化從公雞冠中提取的HA，形成MW級分50 - 100kDa和MW級分500 - 730kDa的透明質(zhì)酸，產(chǎn)物均不含炎性級分。費迪亞醫(yī)藥股份公司針對從公雞冠獲得的HA鈉鹽，先使其在乙醇中沉淀，隨后進行加NaOH水溶液、HCl中和、過濾、沉淀洗滌、干燥等步驟，純化得到的產(chǎn)物滿足HA鈉鹽注射給藥的所有要求，熱原體內(nèi)溫度升高低于1.15℃，體外毒素低于0.05EU/mg，總蛋白含量低于0.1% ，易于后續(xù)制備注射產(chǎn)品。

3.過濾純化法

原理及優(yōu)勢：通過過濾去除菌體和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，具有除雜方便、易于產(chǎn)業(yè)化的特點。

不同案例及操作：上海佰加壹醫(yī)藥有限公司用第一乙醇稀釋透明質(zhì)酸發(fā)酵液，經(jīng)硅藻土和珍珠巖預(yù)涂的板框過濾得到濾液；濾液加第二乙醇沉淀，后續(xù)經(jīng)絡(luò)合、解離、第三乙醇沉淀、脫水干燥得透明質(zhì)酸，該法使濾液濁度、蛋白等雜質(zhì)含量大幅下降。其另一方法是先將硅藻土預(yù)鋪于鈦棒過濾器形成濾層，洗滌后，加入含透明質(zhì)酸的酶解液或發(fā)酵液，經(jīng)活性炭吸附后過濾，再醇沉、除菌過濾、真空干燥得樣品，可增加助濾和吸附效果，降低細菌內(nèi)毒素含量，降低成本。濱州安華生物工程有限公司采用活性炭、珍珠巖、白硅藻土、EDTA結(jié)合大板框過濾技術(shù)，將溶解后的料液多次過濾，最后通過乙醇醇沉干燥得到產(chǎn)物，雜質(zhì)含量低，蛋白質(zhì)≤0.1%，重金屬≤20ppm，碘鹽≤2ppm，產(chǎn)品純度達99.0%以上。東辰控股集團有限公司和東營佛思特生物工程有限公司通過不同助濾劑和過濾裝置進行4次過濾、脫色，透光率達標(biāo)后沉淀制粉，制得透明質(zhì)酸鈉，生產(chǎn)周期可控制在60H，產(chǎn)品主要指標(biāo)良好，收率可達95.65%。

4. 離子交換樹脂法

原理：離子交換樹脂含有能進行陽離子或陰離子交換的功能化基團，在水溶液中與透明質(zhì)酸相互作用，實現(xiàn)純化，且過程溫和，不易引起透明質(zhì)酸結(jié)構(gòu)變化。

案例及操作：廣東東陽光藥業(yè)有限公司采用強堿陰離子交換樹脂，對4% - 40%的透明質(zhì)酸鈉溶液，依次通過靜態(tài)靜置解析、攪拌靜態(tài)解析、再生，分別得到不同分子量的透明質(zhì)酸鈉解析液。丘比株式會社使用陰離子交換樹脂處理包含酸水解物的酸性溶液，為減少對樹脂損害，可先加堿提高酸性溶液pH值，處理后可除去溶液中的陰離子，減少最終產(chǎn)物中相關(guān)元素含量。