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蘇木精-伊紅染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining )，簡稱HE染色法 ，切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。

實驗步驟：

1、取樣固定

取新鮮的組織樣品，加入4 %多聚甲醛組織固定液的EP管中。取樣材料應(yīng)該小而薄，約黃豆粒大小。

2、脫水

采用梯度酒精濃度法脫水。通常選擇50%-60%-70%-90%-95%-100%的濃度梯度,各酒精濃度要求準確,95%以前各步驟脫水1h,95%和100%均分為兩步進行,分別脫水30min,實驗中常將組織在后一步的95%的酒精溶液中過夜,以便進行脫脂。

3、透明浸蠟

為了使石蠟更容易進入組織，要對脫水后的組織進行透明處理，二甲苯:無水乙醇(1:1)溶液和二甲苯透明樣品各30mi，在60℃的石蠟溶液中充分浸泡2h。

4、包埋和切片

通過包埋機，將浸泡后的組織塊使用蠟液包埋后，放到冷臺上凝固，之后使用刀片進行修整，在切片機上固定好后進行連續(xù)切片(5um)，所得的切片用銀子在42℃溫水中展開，之后固定在載玻片上，經(jīng)40°C烘干后進行HE 染色。

5、HE染色

HE染色的程序是將切片浸入二甲苯ⅠⅡ，95%酒精，90%酒精,80%酒精,70%酒工各15min.二甲苯:100%酒精(1 :1),100%酒精Ⅰ,50%酒精,蒸餾水各2 min,蘇木精染液5~10 min,水洗后分化入1%鹽酸酒精5 s,自來水10min,1%氨水藍化,自來水,50%,70%,80%,90%和95%酒精各2 min,伊紅染液5 min,95%酒精,100%酒精ⅠⅡ,100%酒精:二甲苯(1: 1),二甲苯I、各2 min。中性樹脂封片，不應(yīng)該等切片上的二甲苯干了再封固。

注：A:成纖維細胞（fibroblast);B:表皮(epidermis) C:新生毛細血管；D:毛囊；E:毛細血管；F:肌肉組織；標尺=10 mm

圖片來源：DOI:10.19763/j.cnki.2096-7403.2024.01.06

注意事項：

染色過程需要優(yōu)化，染色狀況與組織或細胞的種類有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。

①固定時要注意組織在固定液中的位置,并且隨時翻動組織,使其充分固定。

②若組織脫水不凈時,則會造成隨后的透明和浸蠟過程中二甲苯和石蠟液無法滲入組織,所以應(yīng)該保證脫水液體的濃度,并經(jīng)常更換新溶液。

③透明：一般30分鐘就可達到透明的程度，但溫度較低時可適當延長時間或置于溫箱中加熱。

④浸蠟、包埋：浸蠟和包埋要盡量在恒溫下操作，防止中間出現(xiàn)溫度差，蠟的溫度要適宜，蠟塊中不能出現(xiàn)氣泡、裂隙‚斑點‚對于碎小組織要盡可能使其處于同一平面，否則會造成切片不全與漏切。

⑤切片：在夏季切片時，為保持蠟塊硬度，可把蠟塊放于冰柜中切時取出組織蠟塊四周在切片前應(yīng)修齊大小適當。不宜過重過猛，容易造成切片厚薄不均，甚至毀壞蠟塊。

⑥染色：染色前切片脫蠟要徹底。染色時間要根據(jù)染液的新舊適當調(diào)整，必要時在染色過程中用顯微鏡觀察，染色過程中避免陽光照射。染色過程中水沖洗不宜太猛。