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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2025-02-24 09:05
引言
2024.11.25，NMPA發(fā)布《中藥生產(chǎn)監(jiān)督管理專(zhuān)門(mén)規(guī)定（征求意見(jiàn)稿）》，第十八條指出：鼓勵(lì)持有人或者生產(chǎn)企業(yè)研究和應(yīng)用特征圖譜、指紋圖譜、多組分含量測(cè)定等技術(shù)，主動(dòng)參與提高藥品法定標(biāo)準(zhǔn)，不斷提升中藥質(zhì)量控制水平【1】。
中藥特征圖譜/指紋圖譜系指中藥經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析方法得到的能夠體現(xiàn)中藥整體特性的圖譜【2,3】?！吨袊?guó)藥典》2010年版開(kāi)始將中藥特征圖譜/指紋圖譜用于中藥的質(zhì)量控制，隨著藥典的版本升級(jí)，中藥特征圖譜/指紋圖譜得到更加廣泛的運(yùn)用。
本文圍繞“中藥特征圖譜/指紋圖譜的建立”展開(kāi)，梳理了中藥特征圖譜/指紋圖譜的分析方法建立及方法學(xué)驗(yàn)證的流程。
1.分析方法建立
Step1：選擇合適的檢測(cè)手段
檢測(cè)方法的選擇，應(yīng)以反映制劑所含成份信息最大化為原則，通常采用色譜法，如HPLC/UPLC法、HPTLC法、GC法等。對(duì)于成分復(fù)雜的樣品，必要時(shí)可采用多種測(cè)定方法，建立多張對(duì)照指紋圖譜，以分別反映不同類(lèi)型成份的信息。
Step2：確立供試品溶液制備方法
應(yīng)根據(jù)所含主要成份的性質(zhì)，建立合適的供試品制備方法。通常需要對(duì)提取方法和純化方法進(jìn)行考察，包括溶劑、操作次數(shù)、時(shí)間和溫度等。
對(duì)于成分類(lèi)別相差較大的樣品，可根據(jù)類(lèi)別成分的性質(zhì)，分別制備供試品溶液，以用于多張指紋圖譜的建立。
Step3：確立參照物及參照物溶液的制備方法
值得注意的是，參照物并非用于對(duì)照特征圖譜/指紋圖譜的建立，其作用為：特征峰的定位或定量，輔助特征峰的指認(rèn)、歸屬和判定。
參照物通常應(yīng)包含容易獲取的一個(gè)或多個(gè)主要活性成份或指標(biāo)成份。應(yīng)根據(jù)所含主要成份的性質(zhì)，選擇適宜的對(duì)照品作為參照物，參照物應(yīng)說(shuō)明名稱(chēng)、來(lái)源和純度。如果沒(méi)有適宜的對(duì)照品，可選擇適宜的內(nèi)標(biāo)物作為參照物【2】。
參照物溶液的制備方法應(yīng)結(jié)合參照物的特性建立，對(duì)其配制溶劑、濃度等進(jìn)行考察，可不必與供試品溶液制備方法完全一致。
Step4：建立對(duì)照特征圖譜/指紋圖譜
對(duì)照特征圖譜/指紋圖譜的建立，是基于多批次樣品的測(cè)定結(jié)果，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)或軟件輔助方式獲得。建立對(duì)照特征圖譜/指紋圖的樣品批次、建立方式略有差異，具體如下表【2】：
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區(qū)別 |
對(duì)照指紋圖譜 |
對(duì)照特征圖譜 |
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樣品批次 |
20批以上 |
15批以上 |
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建立方式 |
方式1：采用指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件獲取共有模式作為對(duì)照指紋圖譜； |
選擇各批樣品均具有的主要色譜峰（優(yōu)選活性成份，若活性成份不明確，選擇各批穩(wěn)定出現(xiàn)的色譜峰）作為特征峰，特征峰的峰面積一般應(yīng)當(dāng)不小于參照峰的5%。 |
Step5：建立供試品特征圖譜/指紋圖譜評(píng)價(jià)方法
供試品特征圖譜/指紋圖的評(píng)價(jià)方式、可接受標(biāo)準(zhǔn)略有差異，具體如下表【2,3,4】：
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區(qū)別 |
指紋圖譜 |
特征圖譜 |
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評(píng)價(jià)方式 |
供試品指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度 |
供試品特征圖譜與對(duì)照特征圖譜中，特征峰相對(duì)保留時(shí)間范圍 |
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可接受標(biāo)準(zhǔn) |
依據(jù)多批次供試品與對(duì)照指紋圖譜的相似度結(jié)果擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般不得低于0.90 |
一般不得過(guò)±10% |
2.方法學(xué)驗(yàn)證
特征圖譜/指紋圖譜分析方法學(xué)驗(yàn)證包括精密度、耐用性、穩(wěn)定性等，可參考現(xiàn)行藥典和國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)進(jìn)行。為方便讀者學(xué)習(xí)，整理下表供參考：
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驗(yàn)證指標(biāo) |
指紋圖譜 |
特征圖譜 |
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精密度 |
重復(fù)性：平行配制6份供試品溶液，其相似度不得低于0.95。 |
重復(fù)性：平行配制6份供試品溶液，特征峰相對(duì)保留時(shí)間RSD一般不得過(guò)3%。 |
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耐用性 |
改變實(shí)驗(yàn)條件（如色譜柱、儀器、試劑等），與正常條件比較，相似度不得低于0.90。 |
改變實(shí)驗(yàn)條件（如色譜柱、儀器、試劑等），與正常條件比較，特征峰相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在±10%以?xún)?nèi)。 |
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穩(wěn)定性性 |
取同一個(gè)供試品溶液，在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣檢測(cè)，相似度不得低于0.95。 |
取同一個(gè)供試品溶液，在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣檢測(cè)，特征峰相對(duì)保留時(shí)間RSD一般不得過(guò)3%。 |
3.“指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件”的領(lǐng)取方式
中藥指紋圖譜相似度軟件為國(guó)家藥典委員會(huì)官方發(fā)布，登錄官網(wǎng)https://www.chp.org.cn/#/index，點(diǎn)擊“公眾服務(wù)”→“指紋圖譜”，彈出登錄界面（注：未注冊(cè)用戶需注冊(cè)后方能使用該功能），會(huì)員可下載軟件系統(tǒng)。
參考文獻(xiàn)
【1】《中藥生產(chǎn)監(jiān)督管理專(zhuān)門(mén)規(guī)定（征求意見(jiàn)稿）》
【2】國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)
【3】中藥制劑特征圖譜研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）
【4】中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）
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