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摘要

 

元素雜質(zhì)的研究和控制對于保障藥物的質(zhì)量和安全性具有重要意義,國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會(ICH)已發(fā)布實(shí)施ICH Q3D指南作為藥物中元素雜質(zhì)研究和控制的全球協(xié)調(diào)統(tǒng)一的指南。基于 ICH Q3D 指南對元素雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)評估和控制的要求,元素雜質(zhì)檢測方法的開發(fā)和驗(yàn)證是分析工作者的關(guān)注重點(diǎn)。該文主要綜述電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)和電感耦合等離子體,質(zhì)譜法(ICP-MS)方法開發(fā)的要點(diǎn),包括確定待測元素種類和限度、前處理方法選擇、干擾和校正:具體分析ICH Q2(R2)與各國藥典通則關(guān)于元素雜質(zhì)測定方法的驗(yàn)證要求,并詳細(xì)對比說明各項(xiàng)驗(yàn)證試驗(yàn)的評價(jià)方式,為元素雜質(zhì)檢測方法的開發(fā)和驗(yàn)證提供參考,同時(shí)也為相關(guān)研究工作者提供研究思路。

 

【關(guān)鍵詞】元素雜質(zhì)；ICH Q3D；電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法；電感耦合等離子體-質(zhì)譜法

 

藥物的雜質(zhì)分為有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)和殘留溶劑，無機(jī)雜質(zhì)中一個(gè)重要的類別為元素雜質(zhì)。一般情況下元素雜質(zhì)不能為患者提供任何治療作用，而且由于某些元素雜質(zhì)具有毒性,積累到一定量后可能引起健康風(fēng)險(xiǎn)，另有些元素可能影響藥品的穩(wěn)定性,對藥品的有效期產(chǎn)生不利影響。為了保證患者用藥安全，以及藥品的質(zhì)量可控性,需對元素雜質(zhì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估與控制.

 

國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會(The Intemmationa Councilfor Harmonisation of Technical Requirements forPharmaceuticals for Human Use，ICH)于2014年11月正式發(fā)布實(shí)施《Q3D:元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則》,并于 2022年4月更新至 Q3D(R2)[1]。ICH Q3D 指導(dǎo)原則依據(jù)元素的毒性及在藥物中出現(xiàn)的可能性對元素雜質(zhì)進(jìn)行了分類,提供不同給藥途徑(口服、注射、吸人、皮膚)下元素雜質(zhì)的安全性評估原則，并介紹基于風(fēng)險(xiǎn)評估原則的藥物中元素雜質(zhì)的評估和控制方法。根據(jù)ICHQ3D 指南,元素雜質(zhì)檢測方法可用于元素雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)評估和質(zhì)量控制。早期采用的重金屬檢測法因?qū)傩院挽`敏度均較差、不能對單個(gè)元素雜質(zhì)進(jìn)行定量分析等缺點(diǎn)[2]，已不能滿足 ICH 指南對元素雜質(zhì)控制的要求。隨著分析技術(shù)的發(fā)展，已有多種現(xiàn)代儀器方法被用于元素雜質(zhì)檢測，如原子吸收光譜法(atomicabsorption spectrometry ，AAS)[4-5]、X熒光光譜法(Xray fluorescence ,XRF)[6-7]、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(inductively coupled plasma-atomic emissionspectromety，ICP-AES)[89]、電感耦合等離子體-質(zhì)譜法(inductively coupled plasma-mass spectrometry, ICPMS)[8-10] 等，其中 ICP-AES 和 ICP-MS 是美國藥典United States pharmacopoeia，USP)<233>推薦的兩種檢測方法，中國國家藥典委員會發(fā)布的《元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則》(第三次公示稿)也指出ICP-AES 和 ICP-MS是同時(shí)測定多種元素雜質(zhì)的常用方法。為了更好地開展元素雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)評估,制定適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制策略,科學(xué)合理地進(jìn)行元素雜質(zhì)檢測方法的開發(fā)及驗(yàn)證至關(guān)重要。因此，筆者在本文對 ICP-AES 和 ICP-MS 的方法開發(fā)基本思路以及方法學(xué)驗(yàn)證要求進(jìn)行了探討,以期為相關(guān)研究人員提供參考。

 

1.ICP-AES 和 ICP-MS

 

ICP 是一種通過隨時(shí)間變化的磁場電磁感應(yīng)產(chǎn)牛電流作為能量來源的等離子體源。通過ICP 源的光譜分析等離子體原子組分的方法即是ICP-AES，而當(dāng)ICP 源用作質(zhì)譜分析的離子源，分析組分的方法即是ICP-MS。ICP-AES 和 ICP-MS 的共同優(yōu)點(diǎn)是測試元素范圍廣，靈敏度高，可以同時(shí)快速分析多種元素，并且具有較寬的動態(tài)線性范圍，是各國藥典主要推薦的元素雜質(zhì)檢測方法。但由于檢測系統(tǒng)的差異，ICP-MS 與ICPAES 的靈敏度存在差距，ICP-MS 的檢測靈敏度更高最低可以達(dá)到 10-9水平，而 ICP-AES 僅能達(dá)到 10-6水平，故 ICP-MS 更適用于痕量和超痕量元素分析[2-3]。

 

盡管 ICP-AES 和 ICP-MS 有很多優(yōu)點(diǎn)，但采用ICP-AES 和 ICP-MS 測定元素雜質(zhì)會受到光譜和非光譜干擾的影響。與ICP-AES 比較，ICP-MS 受到的干擾更多。研究顯示，由于空間電荷效應(yīng)[11]，導(dǎo)致 ICP-MS中存在明顯的信號抑制現(xiàn)象，殘留碳含量高的消化劑[12-13]導(dǎo)致某些元素分析信號增強(qiáng)或抑制，以及由(Ar)和碳(C)組成的多原子離子[14]影響鉻(Cr)同位素的測定等多種類型的干擾問題。因此，采用ICP-AES 和 ICP-MS 分析元素雜質(zhì)之前應(yīng)充分了解藥品的成分，識別潛在的干擾，并選擇適宜的校正方式。

 

2.方法開發(fā)

 

2.1 確定待測元素種類

 

藥品中元素雜質(zhì)有多種來源，可依據(jù) ICH Q3D 中方法全面評估元素雜質(zhì)的潛在來源,主要包括原料藥、輔料、生產(chǎn)設(shè)備、生產(chǎn)用水、包裝材料等，每一種來源的潛在貢獻(xiàn)都需考慮，以確定元素雜質(zhì)對藥品的整體貢獻(xiàn)情況。在了解潛在來源的基礎(chǔ)上，需結(jié)合給藥途徑、劑型特點(diǎn)、組成成分的理化特性、生產(chǎn)工藝等信息，確認(rèn)各潛在來源中需要研究的元素雜質(zhì)種類。ICH Q3D[1]中指出，針對所有給藥途徑，對于有意添加的 1、2A、2B 和(或)3 類元素都需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估。針對非有意添加的元素，則需按不同給藥途徑的要求進(jìn)行分析評估。其中，對于口服給藥途徑，需分析評估1類和2A 類元素；對于注射給藥途徑，需分析評估 1類和 2A 類元素,以及3 類元素中的鋰(Li)、銻(Sb)、銅(Cu)；對于吸入給藥途徑，需分析評估1類、2A 類元素，以及全部3類元素。此外，對于液體和半固體制劑，元素雜質(zhì)從包裝系統(tǒng)中浸出的可能性高，通常需對此來源的元素雜質(zhì)進(jìn)行評估。

 

2.2 確定各元素的限度

 

ICH Q3D 中提供 24 種元素雜質(zhì)在不同給藥途徑下的每日允許暴露量(pemmmitteddaily exposure,PDE)，并且為了更便于進(jìn)行藥品或其組分中元素雜質(zhì)含量的評估，提供4種將 PDE 值轉(zhuǎn)換為濃度限度的計(jì)算方式，在所獲得的濃度限度能夠確保藥品不超過 PDE 值的前提下，研究者可選擇任意方法。對于 ICH Q3D 中未列出 PDE 值的元素，可以按照 ICH Q3D 附錄1中提供的方法，利用動物研究結(jié)果建立暴露限度。此外，也可以參考官方發(fā)布的其他指南確定限度，如歐洲藥品評價(jià)局(European Agency for Evalution of Medical Prducts，EMEA)發(fā)布的金屬催化劑或金屬試劑殘留限度指南(EMEA/CHMP/SWP/4446/2000)[15] 中列出鐵、錳、鋅的 PDE 值;美國食品藥品管理局( Food and Drug Administration,FDA)發(fā)布的21 CFR 73.1200(c)[16]規(guī)定藥品中鐵的 PDE 值21CFR 201.323[17]規(guī)定全靜脈營養(yǎng)液中鋁的限度值。

 

2.3 前處理方法選擇

 

大多數(shù)情況下，元素雜質(zhì)在藥品中通常以痕量或微量的濃度存在，且存在于相當(dāng)復(fù)雜的基質(zhì)中。因此，ICP-AES 和 ICP-MS 檢測需要開發(fā)適宜的樣品制備程序，以降低樣品制備過程中的元素?fù)p失和二次污染風(fēng)險(xiǎn)。USP<233>規(guī)定了4種優(yōu)選的前處理方法，包括直接測定法、直接溶解法(水溶液)直接溶解法(有機(jī)溶液)、間接溶解法，其中直接溶解法和間接溶解法應(yīng)用最為廣泛，但由于需要分析的藥物種類繁多，該通則并未給出詳細(xì)的樣品制備方法。一般而言，分析人員應(yīng)根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇合適的樣品制備方法并對方法進(jìn)行確認(rèn)，而不應(yīng)簡單地以樣品溶液是否澄清為依據(jù)。此外，在選擇適當(dāng)?shù)南♂寗?溶劑來溶解樣品成分或用于消解樣品的試劑時(shí)，需考慮樣品的化學(xué)穩(wěn)定性和揮發(fā)性，以及待測元素的穩(wěn)定性，避免引起目標(biāo)元素的損失。表1匯總近年來一些文獻(xiàn)報(bào)道的不同結(jié)構(gòu)特征原料藥以及不同類型藥物制劑采用ICP-AES 和(或)ICP-MS 檢測元素雜質(zhì)的樣品制備方法。

 

 

2.3.1 直接溶解法

 

直接溶解樣品的方法簡單、操作步驟少，且元素雜質(zhì)損失較少，是首選的樣品制備方法，尤其是對于可溶于水的樣品。水溶性樣品如無機(jī)鹽，可采用稀硝酸直接溶解，或用濃硝酸溶解后再加水稀釋以降低酸的濃度，硝酸濃度通常在 1%~10%。在一些情況下，可以加人較低濃度(0.1%~1%)的鹽酸比如在檢測汞( Hg)(Ⅱ)[40]、鈀(Pd)(Ⅱ)[41]或鉑(Pt)(W)[42]的離子時(shí)，鹽酸可作為一種絡(luò)合劑穩(wěn)定上述離子，避免在樣品引人系統(tǒng)的延遲及任何記憶效應(yīng)，或者在鋨(0s)檢測中加人鹽酸保持其穩(wěn)定性!。汞元素的檢測中，金(Au)(Ⅲ)離子也可以起到類似鹽酸的作用,使汞元素在樣品中保持穩(wěn)定,并降低測量過程中的記憶效應(yīng)[43]。

 

對于不溶于水的樣品，可用有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解，其檢測儀器需要采用膜去溶劑化裝置或者霧化器通入氧氣[8] 。常用的有機(jī)溶劑包括 N,N-二甲基甲酰胺[44]二乙二醇單乙醚[45] 、2-丁氧基乙醇[46]、乙醇[47]等，但是對于 ICP-AES 和 ICP-MS 而言，過多有機(jī)物進(jìn)人系統(tǒng)內(nèi)易導(dǎo)致霧化器和等離子矩管積碳、積鹽，進(jìn)而影響儀器靈敏度，因此需加人水盡可能地降低有機(jī)溶劑的濃度。

 

2.3.2 間接溶解法

 

不能直接溶于水或有機(jī)溶劑的樣品，尤其對于以不同成分(原料藥、包衣、填充劑、粘合劑)以及不同劑型(片劑、膠劑、凝膠劑、軟音劑)存在的藥物制劑，通常需采用消解方法消解樣品，從而使其完全溶解，同時(shí)需注意最終樣品溶液中的殘?zhí)剂恳鄬^低，以降低測量過程中出現(xiàn)干擾的可能性[48]。間接溶解法包括敞開式消解法和密閉消解法，敞開式消解法易導(dǎo)致?lián)]發(fā)性元素的損失，同時(shí)可能引入外部環(huán)境的污染，因此一般推薦采用密閉消解法制備樣品，可最大限度降低揮發(fā)性元素的損失。

 

酸的選擇應(yīng)基于樣品的基質(zhì)，優(yōu)先選擇硝酸消解，也可以采用鹽酸、硫酸、氫氟酸，或硝酸與其他酸的混合酸(如王水[鹽酸:硝酸=3:1])。當(dāng)樣品中含有氧化硅、二氧化鈦或滑石粉時(shí)，可以加入氫氟酸將其完全溶解[49]，不過需確認(rèn)儀器是否適用于氫氟酸進(jìn)樣，對于一些易揮發(fā)性元素，可添加穩(wěn)定劑保證結(jié)果準(zhǔn)確，如汞(Hg)元素的檢測中加人0.5%~5%鹽酸或 Au3+離子[50]，鋨(0s)元素檢測中加人含有 0.01 mol·L-1硫脲及0.1g·L-1維生℃的 0.5% 乙酸[51]、含有0.009 mmol·L-1KBr0;的 1% 鹽酸溶液]或0.01 mol·L-1硫脲[40]。在加壓密閉容器中進(jìn)行微波輔助濕法消解也可以減少元素的損失，同時(shí)還可以提高方法的準(zhǔn)確度和重復(fù)性[36]，目前已成為難溶性藥物的常見樣品制備方法[21-24,26-28,30,32,36-37,39]。此外，需要注意的是，若消解后供試品溶液酸度較大，則需要趕酸以保證供試品溶液酸度與標(biāo)準(zhǔn)溶液一致，同時(shí)消解后趕酸也可以起到保護(hù)儀器的作用。

 

2.4 千擾和校正

 

ICP-AES 在測量過程中可能會由于分析譜線的重疊而產(chǎn)生光譜干擾，為了追蹤這些干擾并選擇無干擾的分析譜線，可以將特定元素的測量結(jié)果與使用其他替代譜線得出的結(jié)果進(jìn)行比較[50]。STOVING 等[43]在對 LU(代號)藥片 18 種元素雜質(zhì)檢測研究中，每種元素都選擇3種分析譜線進(jìn)行測定，并通過加標(biāo)回收率的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)驗(yàn)證結(jié)果以及目測評估，最終除銥(Ir)、Os、Pb、Pt 和銠(Rh)外，其他元素都選擇出發(fā)射強(qiáng)度高且無光譜干擾的分析譜線。

 

ICP-MS 同樣會受到光譜重疊的干擾，其中最常見的類型為多原子離子干擾，通常與所使用的等離子體/霧化器氣體、溶劑/樣品中的基質(zhì)成分、樣品中的其他元素或周圍空氣中夾帶的氧/氨有關(guān)[52] ?，F(xiàn)代 ICP-MS儀主要通過碰撞池和/或反應(yīng)池來消除或減少來自于等離子體和基質(zhì)的多原子離子干擾[53]，目前常見的碰撞氣體有氦(He)和氙(Xe)，反應(yīng)氣體有氧氣(02)、氨氣( NH3)、甲烷(CH4)和氫氣(H2)等。已有文獻(xiàn)報(bào)道使用 NH3的動態(tài)反應(yīng)池測定原料藥、口服片劑、腸外溶液中的元素雜質(zhì)時(shí)，避免鉻、銅、錳、釩的多原子干擾[54]；使用 He 的碰撞池測定肝素鈉中的元素雜質(zhì)時(shí)避免K、Cr、V、Fe、As 和 S的質(zhì)譜干擾[55]。另外一種消除光譜重疊的有效方法是使用基于不同質(zhì)量分析器(扇形磁場、飛行時(shí)間和離子阱等)的高分辨質(zhì)譜儀，其通過較高的分辨能力來有效解決多原子離子和同位素干擾問題，但由于操作技術(shù)的復(fù)雜性、以及儀器自身和運(yùn)行維護(hù)的成本較高，只有少數(shù)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室在使用[56]同質(zhì)異位素干擾也是 ICP-MS 中一種常見的質(zhì)譜干擾除上述解決方式外，在一些情況下也可通過選擇合適的同位素來消除此類干擾。王妮等[57]通過為 Cd、Sb、Pb選擇合適的測試同位素，成功地分析3者在氟比芬酯脂微球注射液玻璃包裝中的遷移量。此外,在等離子體中引人混合氣體(如 Ar 與 N2、02的混合氣體)[45]，以及一些新的樣品引人系統(tǒng)，如冷蒸汽發(fā)生、氫化物發(fā)生、膜脫溶，冷等離子體技術(shù)等[54,58] 也已有報(bào)道用于解決光譜干擾。

 

對于 ICP-AES 和 ICP-MS 測量中存在的非光譜基質(zhì)干擾，當(dāng)元素檢測靈敏度可以保證時(shí)，降低基質(zhì)效應(yīng)最簡單的方法就是樣品稀釋，或者也可以選擇合適的樣品引入系統(tǒng)，如使用V形槽霧化器來分析總?cè)芙怏w量含量較高的樣品溶液。標(biāo)準(zhǔn)加人法則是通過在供試品溶液中加入不同濃度的待測元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，來校正樣品的基質(zhì)效應(yīng)。謝莉等[9]采用標(biāo)準(zhǔn)加人法-ICP-MS 測定了氫化可的松注射液中的21 種元素雜質(zhì),各元素回收率均在 90%~110%，方法準(zhǔn)確度較好。引人內(nèi)標(biāo)元素也是校正基質(zhì)效應(yīng)的一種常用方法，內(nèi)標(biāo)的作用是補(bǔ)償不同樣品之間基質(zhì)成分的差異，校正與樣品溶液氣動霧化有關(guān)的物理干擾以及可能受基質(zhì)成分影響的傳輸過程。在使用 ICP-AES 時(shí)，通常對所有測量元素使用一種內(nèi)標(biāo)，如鈧(Se)或釔(Y)。但對于ICP-MS，由于所測定元素信號的抑制或增強(qiáng)幅度與質(zhì)量有關(guān)，一般需要多個(gè)內(nèi)標(biāo)才能覆蓋整個(gè)質(zhì)量標(biāo)樣，因此通常為低、中、高質(zhì)量數(shù)元素選擇內(nèi)標(biāo) 3 或4個(gè)[50]劉宇澄等[28]采用 ICP-MS 分析蘭索拉唑原料藥中元素雜質(zhì)，測定 Li、Co、V、Ni 時(shí)以45Se 為內(nèi)標(biāo)，測定 Cd、Sh時(shí)以103Rh 為內(nèi)標(biāo)，測定 Pb、Hg 以193Ir 為內(nèi)標(biāo)。需注意的是樣品中應(yīng)不含有內(nèi)標(biāo)元素，且內(nèi)標(biāo)元素與待測元素的質(zhì)量數(shù)應(yīng)相接近。另外，通過調(diào)節(jié)儀器參數(shù)(如樣品提升速率、霧化氣流速、射頻功率、采樣深度和離子透鏡電壓等)雖然不能消除基質(zhì)效應(yīng)，但是在一定程度上可以降低基質(zhì)效應(yīng)的影響程度。

 

3.分析方法驗(yàn)證

 

藥物分析方法驗(yàn)證實(shí)施通常主要參考ICH Q2、USP <1225>以及《中國藥典》通則 9101。2023年 11月發(fā)布的 ICH 02(R2)擴(kuò)大適用的檢測方法類型，并且為了適應(yīng)更多類型的方法，對于方法學(xué)驗(yàn)證的要求也進(jìn)行了較大的修訂。ICH Q2(R2)現(xiàn)已適用于ICP-AES和 ICP-MS 方法，同時(shí)為了更好地指導(dǎo)分析人員運(yùn)用該指南理念進(jìn)行方法驗(yàn)證，在指南附件2中也提供ICP-AES 或 ICP-MS 測定元素雜質(zhì)的驗(yàn)證方式示例，但需說明的是該示例并非強(qiáng)制性要求。除 ICH Q2(R2)之外各國藥典通則,包括 USP <233>、USP <730 >、歐洲藥典(European phammacopoeia,EP)2.4.20 EP 2.2.58.和《中國藥典》通則 0412 也都有方法學(xué)驗(yàn)證的相關(guān)內(nèi)容。此外，我國藥典委員會發(fā)布的《元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則》(第三次公示稿)(下文統(tǒng)稱藥典委員會公示稿)中也介紹元素雜質(zhì)方法學(xué)驗(yàn)證的一般要求。表2匯總對比上述指南中關(guān)于元素雜質(zhì)測定方法的方法學(xué)驗(yàn)證要求。

 

 

 

 

3.1 專屬性

 

采用ICP-AES 和(或)ICP-MS 法進(jìn)行元素雜質(zhì)檢測時(shí)，可能存在不同來源的干擾，需對方法的專屬性予以驗(yàn)證。USP 和EP 相關(guān)通則中均明確要求在其他成分(如其他元素雜質(zhì)、基質(zhì)成分、其他干擾源)存在的情況下，分析方法應(yīng)當(dāng)能夠準(zhǔn)確檢測每種目標(biāo)元素。ICH Q2(R2)和藥典委員會公示稿的示例中提供需要考察的干擾源包括空白試劑、供試品基質(zhì)、載氣、其他元素和雜質(zhì)，藥典委員會公示稿更進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)若基質(zhì)存在干擾，應(yīng)采取有效措施消除干擾或使干擾降至忽略不計(jì)。

 

3.2 范圍 

 

ICH Q2(R2)版中，將線性、范圍下限(定量限、檢測限)統(tǒng)一并人范圍項(xiàng)下，強(qiáng)化了范圍的重要性，對于 ICP -AES 和 ICP-MS 方法，被測元素濃度與響應(yīng)之間呈線性關(guān)系，ICH Q2(R2)示例中要求線性驗(yàn)證至少5個(gè)濃度，這與藥典委員會公示稿要求相一致，并且ICH Q2(R2)正文規(guī)定對于線性響應(yīng)需提供數(shù)據(jù)圖、相關(guān)系數(shù)或決定系數(shù)、Y 軸截距和回歸線的斜率。但是，ICH Q2(R2)正文及示例部分、藥典委員會公示稿均未對相關(guān)系數(shù)做出規(guī)定，USP、EP、ChP 相關(guān)通則均明確要求相關(guān)系數(shù)不低于0.99。此外，鑒于藥品中的元素雜質(zhì)通常以較低水平存在，因此方法的靈敏度評價(jià)非常重要。各通則/指南對于范圍下限的驗(yàn)證均包括定量限、檢測限，其中 ICH Q2(R2)和藥典委員會公示稿提出的驗(yàn)證方法最為全面，包括直觀評估法、信噪比法基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法，不過藥典委員會公示稿未給出各方法的具體要求，ICH Q2(R2)正文中則明確采用信噪比法時(shí)，一般可接受的檢測限信噪比為 3:1，定量限信噪比至少為 10:1；采用基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法時(shí)，檢測限為3.3σ/S定量限為 10σ/S(σ =響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；S=標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率)。對于范圍下限與元素限度值(PDE)之間的關(guān)系，ICH Q2(R2)未予以規(guī)定，僅明確對于雜質(zhì)檢查，分析方法的定量限應(yīng)等于或低于報(bào)告閾值，而EP24.20 明確規(guī)定檢測限不得過限度值的0.5倍，定量限應(yīng)低于限度值：USP<730>對定量限的要求則更為嚴(yán)格需至少達(dá)到50%限度值。另外需要提醒的是，ICH Q3D中規(guī)定元素 PDE 的 30%為控制閾值，其作為是否需對藥品元素雜質(zhì)進(jìn)行額外控制的判斷指標(biāo)，從這個(gè)角度而言，如需使用控制閾值時(shí)，元素雜質(zhì)分析方法的定量限則不能超過 PDE 的 30%。

 

3.3 準(zhǔn)確度

 

ICH Q2(R2)版示例對于方法的準(zhǔn)確度驗(yàn)證僅簡單說明了采用雜質(zhì)的加標(biāo)研究或與正交方法對比雜質(zhì)譜，但在其正文中舉例可以在3個(gè)濃度各重復(fù)測定3次進(jìn)行驗(yàn)證，并且說明在某些情況下，如果精密度、范圍內(nèi)響應(yīng)和專屬性已經(jīng)確證，方法準(zhǔn)確度可以通過推論得出。USP、EP 及藥典委員會公示稿對于確度的驗(yàn)證要求則相對具體很多且基本一致，即供試品加標(biāo)溶液配制3個(gè)不同濃度，添加水平通常在50%~150%限度濃度范圍內(nèi)，各元素每個(gè)濃度的平均回收率應(yīng)在 70%~150%范圍內(nèi)。在上述要求基礎(chǔ)上，藥典委員會公示稿對于加標(biāo)濃度還予以更為細(xì)致的說明，包括加標(biāo)溶液為高、中、低3個(gè)濃度水平且每個(gè)濃度至少制備3份樣品，并且指出當(dāng)供試品中元素雜質(zhì)含量較低時(shí)，可設(shè)計(jì)更低的濃度點(diǎn)如報(bào)告閾值水平。

 

3.4 精密度

 

方法精密度驗(yàn)證包括重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性3個(gè)方面。①重復(fù)性:ICH Q2(R2)示例提供兩種驗(yàn)證方式,一種方式是在可報(bào)告范圍內(nèi)取3水平各重復(fù)測定3次，另一種方式是 100%試驗(yàn)濃度測定6 次。對于第一種方式，可以引用準(zhǔn)確度的驗(yàn)證結(jié)果這也符合 ICH Q2(R2)正文中對于準(zhǔn)確度和精密度可以合并評價(jià)的建議。EP 2.4.20、藥典委員會公示稿同樣提出了上述兩種驗(yàn)證方式，并進(jìn)一步要求每個(gè)元素茶質(zhì)測定結(jié)果的 RSD≤20%。②中間精密度：USP、EP通則及藥典委員會公示稿對于中間精密度的要求基本一致，變動因素均包括不同時(shí)間、不同分析人員、不同儀器，ICH Q2(R2)版則在上述因素基礎(chǔ)上增加了不同環(huán)境條件的要求。中間精密度的具體可接受標(biāo)準(zhǔn)在ICH Q2(R2)正文及示例中均未給出具體規(guī)定，但USP、EP 和藥典委員會公示稿均明確要求測定結(jié)果的RSD≤25%。③重現(xiàn)性:重現(xiàn)性在 USP、EP 通則中均末提及，但藥典委員會公示稿說明在方法轉(zhuǎn)移或方法復(fù)核時(shí)，應(yīng)考察方法的重現(xiàn)性。ICH Q2(R2)則是在正文中說明遞交申請時(shí)通常不需要考察重現(xiàn)性嗎，但當(dāng)分析方法需要收載到藥典中以及在多個(gè)場地使用時(shí)，則應(yīng)考慮予以研究。

 

3.5 耐用性

 

對于方法耐用性驗(yàn)證,藥典委員會公示稿和 ICH Q2(R2)示例中給出了一些可微調(diào)的參數(shù)，包括樣品消解程序、樣品制備中所用關(guān)鍵試劑( 如酸、堿)的量或濃度、霧化器和鞘流設(shè)置、等離子體設(shè)置。藥典委員會公示稿在耐用性項(xiàng)下還提出了供試品溶液的穩(wěn)定性驗(yàn)證。

 

總之，在良好方法開發(fā)的基礎(chǔ)上，ICP-AES 和 ICPMS 用于藥物元素雜質(zhì)檢測還需通過全面的方法學(xué)驗(yàn)證，分析人員可以依據(jù) ICH Q2(R2)及各國藥典相關(guān)通則證實(shí)方法的科學(xué)性及適用性。

 

4.結(jié)論與展望

 

自 2014 年 ICH Q3D 發(fā)布,經(jīng)過 10 年的發(fā)展，基于風(fēng)險(xiǎn)評估對元素雜質(zhì)控制的理念，有效促進(jìn)了藥品整體質(zhì)量水平的提高。ICP-AES 及 ICP-MS 方法以靈敏度高和專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，如今已廣泛用于藥物中元素雜質(zhì)的檢測并進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估和質(zhì)量控制。本文綜述了這兩種方法在元素雜質(zhì)檢測方面的方法開發(fā)要點(diǎn)和具體的方法學(xué)驗(yàn)證原則，可提高分析方法開發(fā)的效率，有助于保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。值得重點(diǎn)關(guān)注的是，目前藥品前處理方法還是需要具體問題具體分析，由于藥品的基體具有類似性，因此對前處理方法規(guī)律進(jìn)行歸納總結(jié)，將會對方法開發(fā)具有指導(dǎo)意義：另外，目前 ICP-AES 和 ICP-MS 前處理較為復(fù)雜且耗時(shí)對于難溶性原料藥、藥用輔料和固體制劑通常需加入濃酸或有機(jī)溶劑，因此發(fā)展靈敏度高、快速無損、綠色環(huán)保的分析技術(shù)(如x射線熒光光譜法、激光燒蝕-ICP-MS 等)將會是一大重點(diǎn)研究方向，同時(shí)有助于實(shí)現(xiàn)藥物元素雜質(zhì)的過程控制和/或現(xiàn)場檢測。