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紫外分光光度法是利用物質(zhì)對(duì)紫外光譜區(qū)域內(nèi)的光具有選擇性吸收的現(xiàn)象，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。

 

用于測(cè)量和記錄待測(cè)物質(zhì)分子對(duì)紫外光的吸光度及紫外吸收光譜，并進(jìn)行定性定量以及結(jié)構(gòu)分析的儀器，稱為紫外吸收光譜儀或紫外分光光度計(jì)。

 

本次以TU-1810系列這個(gè)型號(hào)為例，向大家講解紫外可見分光光度計(jì)的性能和操作步驟。

 

 

 

技術(shù)性能

 

1、波長范圍：190nm-1100nm

 

2、波長準(zhǔn)確度：±0.3nm

 

3、波長重復(fù)性：≤0.2nm

 

4、光度準(zhǔn)確度：±0.002Abs（0-0.5A），±0.004 Abs（0.5-1A），±0.3%T(0-100%T)

 

5、測(cè)光范圍：吸光度-0.3-3Ab

 

 

①數(shù)字鍵

 

用來輸入波長，濃度，日期等數(shù)據(jù)的輸入。

 

②編輯鍵

 

<ZERO>:校空白鍵，用于調(diào)0.000 Abs 和 100.0%T

 

<GOTO>:波長設(shè)定鍵

 

<▲>:上鍵，光標(biāo)向上移動(dòng)   <▼>:下鍵，光標(biāo)向下移動(dòng)

 

<START/STOP>:開始/停止鍵

 

<CLEAR>:清除/刪除鍵

 

<RETURN>:返回鍵，用于返回上級(jí)菜單

 

<ENTER>:確認(rèn)鍵，用于數(shù)據(jù)和菜單的確認(rèn)

 

操作步驟

 

1、開機(jī)

打開樣品室蓋，檢查樣品室中是否放置遮光物，若有取出。打開電源開關(guān)預(yù)熱30min。

 

2、選擇光源

電源開關(guān)打開后，鎢燈即亮；若儀器需要在紫外光區(qū)（200nm～290nm）工作，則需將光源切換至氘燈；若儀器需要在紫外光區(qū)（290nm～360nm）工作，則要同時(shí)點(diǎn)亮氘燈和鎢燈。

3、選擇波長

按數(shù)字鍵1輸入實(shí)驗(yàn)所需的波長，選擇須用的單色光波長。

4、校準(zhǔn)

目前型號(hào)較新的分光光度計(jì)具有開機(jī)自動(dòng)校準(zhǔn)功能，無自動(dòng)校準(zhǔn)功能的設(shè)備使用前需參照使用說明書手動(dòng)校準(zhǔn)。

5、測(cè)量

按START即可開始測(cè)量

如試驗(yàn)方法中無特別規(guī)定，通常使用裝有蒸餾水的吸收池調(diào)零后放入樣品和參比樣進(jìn)行測(cè)試，并記錄測(cè)試結(jié)果。

用于分光光度計(jì)測(cè)定樣品物質(zhì)含量的基本原理是，樣品在一定波長下光吸收值的大小與樣品中該物質(zhì)濃度成正比。而最好的線性關(guān)系是在光吸收值為 0.3 ～ 0.7 時(shí)。

因此，測(cè)定前要經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適的樣品濃度，讓反應(yīng)后的待測(cè)溶液的光吸收 值位于這個(gè)范圍內(nèi)。否則，待測(cè)數(shù)據(jù)不能正確反映實(shí)際變化。

如果不同樣品之間濃度差異較大，則在測(cè)定時(shí)應(yīng)先測(cè)定低濃度( 淺色) ，再定測(cè)高濃度( 深色)

6、數(shù)據(jù)處理

定量測(cè)試時(shí)通常需要先測(cè)定若干個(gè)已知濃度的待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)樣品，根據(jù)其吸光值與濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。目前新型號(hào)的紫外分光光度計(jì)本身都有制作和計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的功能，具體操作方式可參照設(shè)備使用說明。不具備標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制功能的設(shè)備，可利用Excel軟件或坐標(biāo)紙輔助繪制。

7、關(guān)機(jī)

測(cè)量完畢，取出吸收池，清洗并晾干后入盒保存。關(guān)閉電源，拔下電源插頭，在樣品室內(nèi)放入干燥劑，蓋上樣品室蓋，罩上防塵罩。

 

注意事項(xiàng)

 

1、使用的吸收池必須潔凈，并注意配對(duì)使用。量瓶、移液吸管均應(yīng)校正、洗凈后使用。

2、取吸收池時(shí)，手指應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè)，裝盛樣品以池體的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無溶劑殘留。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。

3、提供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。

4、測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰±2nm以內(nèi)，測(cè)幾個(gè)點(diǎn)的吸收度或由儀器在規(guī)定的波長附近自動(dòng)掃描測(cè)定，以核對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確。并以吸收度最大的波長作為測(cè)定波長，除另有規(guī)定外吸收度最大波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的測(cè)定波長±2nm以內(nèi)。

5、供試品應(yīng)取2份，如為對(duì)照品比較法，對(duì)照品一般也應(yīng)取2份。并進(jìn)行平行操作，每份結(jié)果與平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。

6、選用儀器的狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度值會(huì)偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，對(duì)于大部分被測(cè)品種，可以使用2nm縫寬。

 

日常維護(hù)及保養(yǎng)

 

1、若實(shí)驗(yàn)中需大幅度改變測(cè)試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。

2、指針式儀器在未接通電源時(shí)，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。

3、比色皿使用完畢后，請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。

4、操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。

5、分光光度計(jì)由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測(cè)微弱光 電信號(hào)，而不能用來檢測(cè)強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移，靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn)，在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長時(shí)間暴露于光下，因此在 預(yù)熱時(shí)，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。

6、放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。

7、比色杯必須配套使用，否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。具體方法如下：

分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處。將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至100%，測(cè)量其它各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。

 

參考資料：

https://jascoinc.com/learning-center/theory/spectroscopy/uv-vis-spectroscopy/instrumentation/