老熟妇一区二区播放,国产无码高清在线观看

臍橙皮精油漱口水的制備及抑菌作用研究

嘉峪檢測網(wǎng) 2025-03-08 13:55

摘要

目的：對臍橙皮精油漱口水的制備及抑菌作用進行研究。方法：基于有效成分、潤濕劑、保濕劑、增溶劑和調(diào)味劑的組成與用量不同，配制出12 個配方，并以外觀性狀、穩(wěn)定性、pH、細菌菌落總數(shù)、氟含量及抑菌性能為指標，通過實驗對其進行評價。結果：3 個合格配方澄清透明，耐熱耐寒穩(wěn)定性好，pH 值為6.64 ~6.83，游離氟含量和可溶氟含量不高于11.32mg / 100ml、12.28mg/100ml，每毫升菌落總數(shù)均為0，符合行業(yè)標準產(chǎn)品質(zhì)量要求；對金黃色葡萄球菌具有抑制作用。篩選出的最優(yōu)配方為：按100ml計，橙皮精油0.25%、水楊酸甲酯0.25%、桉葉油醇0.5%、麝香草酚0.1%、薄荷腦0.2%、氟化鈉0.02%、山梨醇0.5%、丙二醇20%、泊洛沙姆407 1%、糖精鈉0.2%和苯甲酸鈉0.1%。結論：橙皮精油可用于制作漱口水，其口感較好，澄明度、pH、黏度、氟離子含量等符合行業(yè)標準要求，且具有一定程度的抑制金黃色葡萄球菌作用。

Objective:This study explores the formulation and antibacterial properties of mouthwash prepared with navel orange peel essential oil. Methods Based on different compositions and dosages of active ingredients wetting agents moisturizing agents solubilizers and seasonings twelve formulations were prepared and their appearance stability pH value total bacterial count fluoride content and antibacterial efficacy were tested. Results Three optimal formulas were clear and transparent stable under heat and cold with pH values of 6. 64 ~6. 83. Free and soluble fluorine content were not higher than 11. 32mg / 100ml and 12. 28mg / 100ml respectively. The total number of bacteria per milliliter was 0 which meets the industry standard product quality requirements. All formulas demonstrated inhibitory activity against Staphylococcus aureus. The best formula contained per 100ml orange peel essential oil 0. 25% methyl salicylate 0. 25% eucalyptus oil 0. 5% thymol 0. 1% menthol 0. 2% sodium fluoride 0. 02% sorbitol 0. 5% propylene glycol 20% poloxamer 407 1% and flavoring agents sodium saccharin 0. 2% sodium benzoate 0. 1% . Conclusion Navel orange peel essential oil can be used in mouthwash with favorable taste clarity pH viscosity fluoride content that meet industry standards and has a certain degree of inhibitory effect on Staphylococcus aureus.

關鍵詞

臍橙皮精油；漱口水；制備；氟含量；抑菌作用；金黃色葡萄球菌

navel orange peel essential oil ；mouthwash ；preparation process；fluoride content ；antibacterial effect ；Staphylococcus aureus

臍橙Citrus sinensis (L.) Osbeck 為蕓香科柑橘屬植物甜橙的果實[1] ，別名橙子、香橙，盛產(chǎn)于我國南方，尤其是贛州。臍橙含豐富的營養(yǎng)成分如維生素C、類胡蘿卜素等，同時具有清新的果香味[2] ，其主要加工產(chǎn)品橙汁在國內(nèi)外市場上深受消費者喜愛。據(jù)調(diào)查，在臍橙相關產(chǎn)品加工制作過程中，大量的橙皮未能得到開發(fā)利用、而是直接被丟棄或干燥后焚燒，這既是對資源的浪費也是對環(huán)境的污染[3] 。臍橙皮中含有大量揮發(fā)性成分，如橙皮精油[4] 。橙皮精油具有橙子的香味，可作為天然的香味劑，添加在糖果、餅干和飲料等食品中, 在牙膏、洗發(fā)水和洗潔精等日用品領域也有廣泛的應用[5 -6] 。此外，橙皮精油還具有一定程度的抑菌作用[7] ，有研究通過水蒸氣蒸餾法提取橙皮精油并開展抗菌測試，發(fā)現(xiàn)橙皮精油能抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的生長[8-9] 。

隨著生活水平的提高, 大眾口腔健康意識的不斷提升，一些口腔清潔護理用品也展現(xiàn)出巨大的市場潛力，比如漱口水、牙線和齒間刷等[10-11] 。據(jù)統(tǒng)計，平均每年漱口水使用率增長約30%以上, 其他清潔護理口腔用品也將有一定程度增長[12] 。漱口水使用方便，越來越受到年輕人的喜愛，未來具有很大的前景[13] 。為了預防齲齒、牙周炎等口腔疾病，堅持使用漱口水，可以有效減少牙菌斑, 保持口腔健康[14] 。目前，為減少化學添加劑的用量，國內(nèi)部分漱口水引入中藥活性成分[15] ，但具有抑菌作用的漱口水較為少見，且大部分添加中藥的漱口水都存在口感不佳的問題[16] 。因此，本研究旨在“ 變廢為寶”，利用提取的天然橙皮精油, 探索橙味漱口水的配方，使漱口水既能抑菌，又能改善香味與口感。

1. 實驗準備

1.1 材料和試劑

鮮臍橙果, 購自于江西省贛州市水果市場，經(jīng)贛南醫(yī)科大學藥學院生藥教研室胡海波老師鑒定為蕓香科柑橘屬植物Citrus sinensis (L.) Osbeck 的果實。阿莫西林粉針劑( 贛州華醫(yī)藥業(yè)有限公司，批號20180501)；進口品牌商品A 為高露潔貝齒漱口水(高露潔三笑有限公司，批號20180115)；進口品牌商品B 為李施德林精油漱口水[強生(中國) 有限公司，批號20171201]；麝香草酚(國藥集團化學試劑有限公司，批號20180501)；水楊酸甲酯(國藥集團化學試劑有限公司，批號20180501)；薄荷腦(贛州華醫(yī)藥業(yè)有限公司，批號20180320)；氟化鈉(國藥集團化學試劑有限公司，批號20180320)；桉葉油醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號20180320)；枸櫞酸鹽緩沖液( 國藥集團化學試劑有限公司，批號20180501)；無水乙醇( 國藥集團化學試劑有限公司，批號20180501)；甘油(國藥集團化學試劑有限公司，批號20180320)；丙二醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號20180320)；泊洛沙姆 407 (國藥集團化學試劑有限公司，批號20180409)；山梨醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號20180409)；糖精鈉(國藥集團化學試劑有限公司，批號20180315)；苯甲酸鈉( 國藥集團化學試劑有限公司，批號20180315)；無水硫酸鈉( 國藥集團化學試劑有限公司，批號20180315)；鹽酸( 國藥集團化學試劑有限公司，批號20180315)；氫氧化鈉( 國藥集團化學試劑有限公司，批號20171215)；MH ( A) 瓊脂培養(yǎng)基(北京澳博星生物技術有限責任公司，批號20180205)；MH (B) 營養(yǎng)肉湯粉末(北京澳博星生物技術有限責任公司，批號20180205)；金黃色葡萄球菌標準菌株( 廣東微生物菌種保藏中心，批號ATCC25923)。

1.2 實驗儀器

232-01 甘汞參比電極(上海儀電科學儀器股份有限公司)；PF-2-01 氟離子選擇電極(上海儀電科學儀器股份有限公司)；Exceed-Ad-16 艾柯實驗室超純水機(成都唐氏康寧科技發(fā)展有限公司)；HPX-9272MBE 電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)；JP -100 潔盟牌超聲波清洗機( 深圳市潔盟清洗設備有限公司)；1510 酶標儀[ 賽默飛(上海) 儀器有限公司]。

2. 實驗方法和過程

2.1 橙皮精油的提取

取新鮮臍橙，洗凈取皮，去除果皮內(nèi)部橘絡，得臍橙皮400g，用刀片切成約0.5cm2 的小塊置于圓底燒瓶中，加入1000ml 蒸餾水(料液比=1 ∶2.5)，按《中國藥典》(2020 年版) 附錄方法提取揮發(fā)油類成分。提取5h 以上直至揮發(fā)油量不再增加，停止加熱，靜置30min 后，打開閥門，將水層緩緩放出，再向揮發(fā)油提取器中加入2ml 乙醚( 使提取過程中油水分界明顯, 增加橙皮精油的提取效率)，搖勻后放出油層，待乙醚揮發(fā)后，即得揮發(fā)油粗提物，加入無水硫酸鈉除盡水分，吸出油層置于棕色瓶中，稱量，封口后于4℃保存。

2.2 漱口水的配方優(yōu)化

取潤濕劑( 丙二醇或乙醇) 于150ml 燒杯中，分別稱取麝香草酚、薄荷腦于潤濕劑中溶解，再滴加桉葉油醇和水楊酸甲酯，選擇性加入橙皮精油，于燒杯中攪拌均勻，邊攪拌邊緩緩加入純水60ml 以上，溶液變渾濁，再取保濕劑及增溶劑[ 泊洛沙姆407 或( 和) 山梨醇]，分批加入，直至溶液變澄清，再選擇性加入防齲齒劑氟化鈉，并加入矯味劑糖精鈉或(和) 甜橙香精，選擇性加入防腐劑苯甲酸鈉至燒杯中溶解，加水定容至100ml，即得。具體配方設計詳見表1 ( 表中列出了除水之外的其他物質(zhì)的用量)。

2.3 漱口水的質(zhì)量檢測

2.3.1 外觀性狀觀察

將漱口水樣品分別置于比色管內(nèi)，在自然光線下，距樣品30cm處目視觀察澄清度，體驗氣味與口感并紀錄。

2.3.2 穩(wěn)定性與pH檢測

將漱口水樣品分別置于具塞比色管內(nèi)，40℃放置24h，待恢復至室溫后觀察耐熱穩(wěn)定性。將樣品分別置于具塞比色管內(nèi)，4℃放置24h，待恢復至室溫后觀察耐寒穩(wěn)定性。

將漱口水樣品分別置于燒杯中，在25℃下用pH 計測定其pH 值。

2.3.3 細菌菌落總數(shù)的檢測

在超凈臺中分別取100μl 制得的12 種不同配方的漱口水樣品于已裝入900μl 超純水的離心管中，制成1 ∶10 的均勻稀釋液，混勻后涂布在瓊脂平皿中，倒置平皿，置37℃培養(yǎng)48h，計算平板上的菌落數(shù)。

2.3.4 氟含量的測定

精密吸取氟離子標準溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml，分別加入盛有5ml枸櫞酸鹽緩沖液的50ml 容量瓶中，另取5ml 枸櫞酸鹽緩沖液加入50ml 容量瓶中作為空白對照，6份溶液均用超純水稀釋至刻度，搖勻后倒入燒杯中，測量電位值E，作E-logc (c 為濃度) 標準曲線方程。

分別精密吸取20ml 漱口水樣品溶液于100ml 容量瓶中，加10ml 枸櫞酸鹽緩沖液，用超純水稀釋至刻度, 搖勻后倒入燒杯中，測量電位值，平行測定3次，通過標準曲線計算相應的氟含量，從而得到游離氟的濃度。

分別取漱口水樣品溶液0.5ml 于2ml 離心管中，加4mol/L 的鹽酸0.7ml，50℃ 水浴10min，移至50ml 容量瓶中，加4mol/L 的氫氧化鈉溶液0.7ml，再加枸櫞酸鹽緩沖液5ml，用超純水稀釋至刻度, 搖勻后倒入燒杯中，測量電位值，平行測定3 次，通過標準曲線計算相應的氟含量，從而得到可溶氟的濃度。

2.4 漱口水的抑菌性能評價

2.4.1 紙片擴散抑菌圈法

在超凈臺中用無菌涂布棒將菌液均勻涂布于瓊脂培養(yǎng)基表面, 再將滅菌并烘干的5mm 濾紙片放在已接種菌液的瓊脂培養(yǎng)基上，然后將6μl 各樣品滴于濾紙片中心，37℃培養(yǎng)12h。觀察抑菌圈大小，從而判斷抑菌活性。

2.4.2 最小抑菌濃度(MIC) 的測定

在96 孔板中，每孔先加入50μl PBS，取各樣品50μl 加入A 行孔中，逐級對半稀釋至G 行，共稀釋七個層級。每孔加入金黃色葡萄球菌菌懸液50μl，混合均勻， 37℃培養(yǎng)6~8h，測量610nm 處的吸光度，計算各樣品抑菌率。若抑菌率大于50%，則證明有抑菌效果。

3. 實驗結果

3.1 外觀及感觀

漱口水的外觀性狀基本要求：在外觀方面，漱口水應為澄清透明的液體，無懸浮物、沉淀物和雜質(zhì)；在氣味方面，漱口水應具有清新、自然的香氣，無異味；在口感方面，漱口水應口感清爽，無刺激感，不含有任何苦味、澀味或異味。對漱口水的氣味、口感及澄清度等外觀性狀的觀測，詳見表2。由此可知，配方A、配方F~J 及配方L~M 均符合要求。

3.2 穩(wěn)定性、pH 和菌落數(shù)

漱口水要求在耐熱穩(wěn)定性測試中無凝聚物且不混濁，在耐寒穩(wěn)定性測試中不凍結且色澤穩(wěn)定，據(jù)此篩選出在耐熱耐寒穩(wěn)定性測試中均不渾濁的漱口水配方A、F、G、H、J、L、M 進行pH 及抑菌效果的檢測，詳見表3 (漱口水的pH 應處于3.0 ~10.5之間)。待測漱口水樣品于37℃恒溫培養(yǎng)48h 后，取出目測并計算菌落數(shù)，每毫升菌落總數(shù)≤500 個為合格，見圖1。由此可知，配方F、G、H、J、L、M均符合要求。綜合口感后，選定配方F、L、M 進行下一步研究。

3.3 氟含量測定

建立了氟含量測定的標準曲線，Y= -63.29X +247.51, R2=0.9995，其符合方法學要求，見圖2。漱口水中氟離子含量宜≤25mg/100ml。通過檢測，發(fā)現(xiàn)配方F、L、M 中氟含量均小于25mg / 100ml, 均符合要求。為保證總含氟量不超標，優(yōu)選配方F、L進行下一步研究，詳見表4。

3.4 抑菌測試

3.4.1 抑菌圈測試結果

從左到右，從上至下，依次為進口品牌商品A、進口品牌商品B、自制漱口水1 ( 配方F)、自制漱口水2 (配方L)、空白、陽性藥，見圖3。其中商品A、商品B、自制漱口水1和2以及陽性藥對金黃色葡萄球菌都有明顯的抑制作用。商品B 和陽性藥抑菌圈最大，而自制漱口水1和2也顯示了一定的抑菌作用。

3.4.2 MIC 測定結果與最優(yōu)配方的確定

配制各漱口水的起始濃度都為184μg / ml，逐級稀釋，當其抑菌率大于50%時即為MIC[17] 。自制漱口水1 (配方F) 的MIC 為46μg/ml，自制漱口水2(配方L) 的MIC 為92μg/ml，而兩種進口品牌的漱口水MIC 都是46μg/ml，詳見表5。結果表明，兩種自制漱口水均具有一定的抑菌能力，且配方F的抑菌能力略強于配方L?；诠πХ矫婵紤]，最終選定配方F 作為最優(yōu)配方，詳見表6。

4. 討論與結論

綜合考慮有效性、適口性及經(jīng)濟性, 漱口水的配伍及制備極為復雜與困難。其中，有效成分、潤濕劑、保濕劑、增溶劑和矯味劑的選擇對漱口水質(zhì)量具有重要影響[18-19] 。漱口水久置后香味變淡、口感變差，且起抑菌作用的精油也可能會揮發(fā)，因此在配方制備工藝的最后一步都會加入一定量的保濕劑山梨醇，使各種揮發(fā)性有效成分作用時間更持久[20-21] 。潤濕劑能改善漱口水在口腔中的潤濕作用,常用的潤濕劑有乙醇、丙二醇、甘油、山梨醇等，其中丙二醇、甘油和山梨醇還具有保濕作用，而乙醇無保濕作用[22] 。此外，采用20%的丙二醇替代了乙醇+甘油的組合作為潤濕劑，其口感上的辛辣刺激性更小。泊洛沙姆407 是漱口水產(chǎn)品中常見的增溶劑，其用量一般根據(jù)漱口水活性成分的含量而定,比較了0.7%~3%用量范圍，最終確定1%用量的泊洛沙姆407 具有較好的增溶作用。常見的甜味劑為蔗糖、糖精鈉和三氯蔗糖[23] ，蔗糖甜度低用量大，不宜作為漱口水的甜味劑；糖精鈉的甜度是蔗糖的300~500 倍，三氯蔗糖的甜度可達蔗糖600倍[24-25] ，但由于三氯蔗糖的成本遠高于糖精鈉[26]，且將糖精鈉的含量控制在安全范圍之內(nèi)，就能大大降低其帶來的負面影響[27] ，因此選用糖精鈉。防腐劑苯甲酸鈉pH 值在6.5 左右，其抑菌濃度一般大于0.5%[28-29] ，但在有效成份的配合下，其用量降為0.1%。

在制得漱口水外觀性狀、穩(wěn)定性、pH 及含氟量合格之后，進一步對抑菌活性進行了評價，測試了較優(yōu)配方F 和L 以及市售主流產(chǎn)品抑制金黃色葡萄球菌生長的活性。對金黃色葡萄球菌的抑菌測試結果表明，配方F、L 及進口品牌漱口水均具有抑菌作用，配方F、L 的抑菌作用略低于進口品牌漱口水。但抑菌活性成分為天然植物中提取的精油，并未添加任何化學抑菌劑, 有一定優(yōu)勢。對游離氟和可溶氟檢測結果表明，通過合理組方，在取得相當抑菌效果時，可適當減少氟用量。然而，建立氟含量測定標準曲線時，由于本實驗將原點計入實驗點，導致實際測試濃度點只有4 個，在標準曲線的精確性上有一定影響。

本研究從臍橙皮中回收利用揮發(fā)精油，并將其作為天然抑菌劑與香料添到漱口水中, 最終優(yōu)選出配方F 為: 按100ml 計，橙皮精油0.25%、水楊酸甲酯0.25%、桉葉油醇0.5%、麝香草酚0.1%、薄荷腦0.2%、氟化鈉0. 02%；保濕劑為山梨醇0. 5%；潤濕劑為丙二醇20%; 增溶劑為泊洛沙姆407 1%；矯味劑為糖精鈉0.2%；防腐劑為苯甲酸鈉0.1%。所制得的漱口水口感較好，澄明度、pH、黏度、氟離子含量等符合行業(yè)標準要求，且具有一定程度的抑制金黃色葡萄球菌作用。

引用本文

邱杭，張茹男，肖瑤，鄧夏夏，劉虹玉，李林福∗ ，黃浩∗，黃柏超.臍橙皮精油漱口水的制備及抑菌作用研究[J/OL].《化妝品與皮膚科學》網(wǎng)絡專刊,2024(3):1-7[2025-03-07].https://www.cfdam-health.com/ebook/hzp/202403/index.html.

來源：中國食品藥品監(jiān)管雜志

臍橙皮精油漱口水的制備及抑菌作用研究

相關新聞：