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生物指示劑是一類用于監(jiān)測消毒、滅菌等處理過程效果的特殊工具，是指將適當(dāng)載體染以一定量的特定微生物，用于指示消毒或滅菌效果的制品。它利用微生物對消毒、滅菌因子的抵抗力強(qiáng)于待處理物品上可能存在的自然微生物的特點，通過檢測生物指示劑中微生物的存活情況，來判斷消毒或滅菌過程是否達(dá)到預(yù)期效果。如果生物指示劑中的微生物被完全殺滅，那么可以認(rèn)為待處理物品上的自然微生物也已被有效殺滅，消毒或滅菌過程是可靠的。

一、如何選擇使用生物指示劑？

在醫(yī)療機(jī)構(gòu)的滅菌生物監(jiān)測中，WS310國家標(biāo)準(zhǔn)已明確規(guī)定：

1、壓力蒸汽滅菌過程為每周一次，使用壓力蒸汽滅菌生物指示劑；

2、環(huán)氧乙烷氣體滅菌為每批次都要監(jiān)測，使用環(huán)氧乙烷滅菌生物指示劑；

3、低溫等離子體滅菌為每日監(jiān)測一次，使用低溫等離子體滅菌生物指示劑。

以上三種滅菌方式，也是2012年醫(yī)療機(jī)構(gòu)的主要滅菌方式，其中，壓力蒸汽滅菌使用最為廣泛。

二、使用方法

放置：在滅菌前，將生物指示劑放置在被滅菌物品的內(nèi)部或代表性位置，確保其能充分暴露于滅菌環(huán)境中。

滅菌處理：與被滅菌物品一起進(jìn)行消毒或滅菌處理。

培養(yǎng)：滅菌處理后，將生物指示劑取出，放入適宜的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。不同的生物指示劑培養(yǎng)條件有所不同，一般細(xì)菌芽孢生物指示劑需在37℃或56℃下培養(yǎng)24小時至7天不等。

結(jié)果觀察：根據(jù)指示系統(tǒng)的變化來判斷結(jié)果。如顏色由紫色變?yōu)辄S色，通常表示有微生物生長，滅菌失?。蝗纛伾３植蛔?，則表明滅菌成功。也有些生物指示劑通過熒光等其他方式顯示結(jié)果。

三、生物指示劑使用關(guān)鍵參數(shù)：

可使用市售的標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑，也可使用有日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控中分離的耐受性最強(qiáng)的微生物制備的孢子。在生物指示劑驗證試驗中，需確定孢子在實際滅菌條件下的D值，并測定孢子的純度和數(shù)量。驗證時，生物指示劑的微生物用量應(yīng)比日常檢出的微生物污染量大，耐受性強(qiáng)，以保證滅菌程序有更大的安全性。因此，如下兩個參數(shù)相當(dāng)重要：單位重量芽孢含量及以D值。

四、執(zhí)行生物指示劑挑戰(zhàn)試驗：證明所開發(fā)的滅菌程序?qū)嶋H達(dá)到了程序設(shè)計中確定的生物殺滅時間。

濕熱滅菌生物指示劑挑戰(zhàn)試驗：

1. 選擇恰當(dāng)?shù)纳镏甘緞┫到y(tǒng)。

在過度殺滅程序的確認(rèn)中，循環(huán)結(jié)束F0>12，生物指示劑的D121℃應(yīng)大于1。常采用生物指示劑是嗜熱脂肪芽孢桿菌等。

在采用“殘存概率法”設(shè)計的滅菌程序的確認(rèn)中，生物指示劑的耐熱性應(yīng)大于產(chǎn)品的生物負(fù)荷的耐熱性。且需結(jié)合生物負(fù)荷歷史數(shù)據(jù)，留有一定的安全系數(shù)。典型的生物指示劑包括：生梭芽孢桿菌、史密氏桿菌和枯草芽孢桿菌 5230。

考慮生物指示劑是懸浮在液體還是干燥在固體支持物上，因生物指示劑在不同介質(zhì)中，其D值有很大差異。

2. 裝載在不高于下限的滅菌條件下滅菌，滅菌溫度的不高于下限，滅菌時間的不高于下限。

3. 滅菌結(jié)束后，將生物指示劑試驗系統(tǒng)收回實驗室，收回的生物指示劑應(yīng)盡快測試，如不測試，應(yīng)按要求儲存。

4. 在適宜的介質(zhì)和條件下，檢查每個生物指示劑挑戰(zhàn)試驗的殘存數(shù)。不同生物指示劑有不同的培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)溫度、時間、環(huán)境、培養(yǎng)基等。

5. 對結(jié)果進(jìn)行評價，以確保試驗中孢子的對數(shù)下降值符合預(yù)定的要求，滿足產(chǎn)品微生物存活概率 PNSU 小于10-6。

6. 生物指示劑挑戰(zhàn)試驗應(yīng)作陽性對照，并確認(rèn)接種部位生物指示劑數(shù)量足夠，有沒有其它干擾。

五、生物指示劑使用注意事項：

1：在最終滅菌法中，生物指示劑應(yīng)放在滅菌柜的不同部位。并避免指示劑直接接觸到被滅菌物品。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后取出，分別置培養(yǎng)基中培養(yǎng)，確定生物指示劑中的孢子是否被完全殺滅。

2：過度殺滅產(chǎn)品滅菌驗證一般不考慮微生物污染水平，可采用市售的生物指示劑。對滅菌手段耐受性差的產(chǎn)品，設(shè)計滅菌程序時，根據(jù)經(jīng)驗預(yù)計在該生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品微生物污染的水平，選擇生物指示劑的菌種和孢子數(shù)量。這類產(chǎn)品的無菌保證應(yīng)通過監(jiān)控每批滅菌前的微生物污染的數(shù)量、耐受性和滅菌程序驗證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評估。