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1. 背景介紹

什么是干燥？

干燥是指去除植物組織中的水分并且保存植物組織的正常形態(tài)不受損傷，如皺縮、破損、變形等的過程。

為什么要干燥？

1、植物組織含水量較大，若直接放入掃描電鏡真空倉中觀察，其形態(tài)會(huì)因真空而形變塌陷；

2、植物組織中的水分會(huì)污染掃描電鏡的物鏡、燈絲等元件；

3、水分的存在會(huì)影響掃描電鏡的成像效果，降低分辨率；

4、水分的存在會(huì)造成離子濺射過程中的放電現(xiàn)象，從而干擾鍍膜及組織形態(tài)的干燥。

利用掃描電子顯微鏡觀測植物組織表面形貌時(shí)，需要先對(duì)植物組織進(jìn)行干燥處理，去除其內(nèi)部水分。常用的干燥方法有自然干燥法、烘箱干燥法、乙醇干燥法、叔丁醇干燥法和臨界點(diǎn)干燥法。

其中對(duì)于大多數(shù)組織而言，叔丁醇干燥法和臨界點(diǎn)干燥法在保存組織形態(tài)的真實(shí)完整性方面較其他方法存在明顯優(yōu)勢。

但因臨界點(diǎn)干燥法需要特殊的臨界點(diǎn)干燥儀才能進(jìn)行，而叔丁醇干燥法只需要真空泵即可完成干燥，操作簡便快捷，適用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)操作。接下來，介紹叔丁醇干燥法的實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)。

2. 實(shí)驗(yàn)原理

叔丁醇，化學(xué)式C4H10O，無色油狀液體，凝固點(diǎn)23.5℃，低真空環(huán)境下即可升華，用叔丁醇作為介質(zhì)干燥植物組織，可以避免氣液界面對(duì)樣品的損傷，從而保存組織的生活狀態(tài)。

3. 實(shí)驗(yàn)步驟

1、根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x取特定部位的植物組織于裝有3%戊二醛固定液的離心管中固定24h，組織大小為3mm3；

2、使用0.1mol PBS（pH7.4）的緩沖液清洗組織3次，每次10min，洗去多余的戊二醛固定液；

3、梯度叔丁醇脫水，其中30%、50%、70%、90%叔丁醇各脫水一次，每次15min；100%叔丁醇脫水三次，每次15min；

4、吸棄離心管中的叔丁醇，再重新加入少量的叔丁醇（沒過組織即可），放入4℃冰箱中30min至叔丁醇凝固成固體。

5、取出離心管放入真空干燥皿中，打開真空泵抽真空至0.08MPa以上，2h左右叔丁醇即可升華完畢，留下干燥的組織。

6、取出組織，粘在粘有導(dǎo)電膠的樣品臺(tái)上，放入離子濺射儀中鍍膜后即可放入掃描電子顯微鏡中進(jìn)行觀察。

4. 注意事項(xiàng)

1、植物組織取材之前，若表面雜質(zhì)較多，需用去離子水或者緩沖液輕柔的清洗組織表面；

2、組織塊的大小要控制在3mm3左右，如果無法減小組織塊的體積，脫水時(shí)間要根據(jù)組織大小有所增加；

3、更換梯度叔丁醇時(shí)，盡可能的吸棄離心管中的叔丁醇，但要保證組織不暴露在空氣中；

4、純叔丁醇脫水要徹底，水分的存在使叔丁醇在4℃條件下無法凝固。