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1. 概述

藥物，或一切化學(xué)品對(duì)細(xì)胞的生理狀態(tài)是否能造成影響，能造成多大的影響，是生物學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之一。CCK-8與MTT等藥物毒性實(shí)驗(yàn)就是一種測(cè)量方法。我們都知道“脫離劑量談毒性都是耍流氓”，那么如何設(shè)置實(shí)驗(yàn)中藥物的濃度呢？通常有兩種情形：

直接取一個(gè)固定的濃度，如40μM；

設(shè)置一組濃度梯度，如10μM、30μM、100μM。

這二者有什么不同？如何針對(duì)自己的實(shí)驗(yàn)需求來選擇呢？我們將在下文介紹。

2. 固定濃度的情形

一般來說，如果文獻(xiàn)直接甩出一個(gè)固定濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，完全沒有進(jìn)行量效測(cè)試，說明這個(gè)藥物的效應(yīng)是已知的，就像數(shù)學(xué)答案里的“易得”。

這個(gè)時(shí)候就應(yīng)該查找這段method中是否給出了引用文獻(xiàn)。效應(yīng)濃度已經(jīng)在更早期的實(shí)驗(yàn)中確定了，該文章作者本人研究所用的細(xì)胞樣本應(yīng)該和早期文獻(xiàn)也能保持一致，所以他是在復(fù)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)，直接照做就可以了。

如果我們是在自己取值做實(shí)驗(yàn)，通常這個(gè)濃度可能可以從以下角度推導(dǎo)得到：

基于藥物的藥理學(xué)研究，如藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)：如果這是一個(gè)已知的藥物分子，我們不是第一次合成得到它，首次提出以它作為藥物的文獻(xiàn)應(yīng)該會(huì)提供其藥理學(xué)數(shù)據(jù)，如半衰期、分布容積等參數(shù)，可以基于研究實(shí)驗(yàn)的目的計(jì)算決定；

基于臨床用藥的習(xí)慣劑量：如果這個(gè)藥物已經(jīng)用于臨床了，可以參考臨床報(bào)告的劑量；

直接抄以前的文獻(xiàn)，拿來吧你：這就是第一段所說的情況，已經(jīng)有人做實(shí)驗(yàn)得到結(jié)論了，那我們完全可以直接使用同種細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的研究，反而保證了結(jié)論的可重復(fù)性。

3. 濃度梯度的情形

如果一個(gè)文獻(xiàn)做了多個(gè)濃度或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)來測(cè)試藥物效果，那最大的可能是該文獻(xiàn)所研究的細(xì)胞或藥物此前沒人做過，作者沒得引用，所以只能先做量效測(cè)評(píng)。

所以此時(shí)設(shè)計(jì)上就要考慮做梯度濃度+不同時(shí)間段的設(shè)計(jì)，從一系列實(shí)驗(yàn)結(jié)果中找到最優(yōu)濃度。

如何設(shè)計(jì)梯度和組別呢？如果有人做過類似的藥物或類似的細(xì)胞，我們可以引用前人的智慧，照搬之下再根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)作一定校正；如果完全沒參考對(duì)象，我們可以從以下角度：

設(shè)置濃度梯度，搞清楚IC50：先進(jìn)行濃度梯度測(cè)試，用5-8個(gè)梯度去做預(yù)實(shí)驗(yàn)，比如每個(gè)梯度差別一倍（10、20、40、80、160μM），總之要覆蓋藥物從低毒性到高毒性（甚至毒性過強(qiáng)導(dǎo)致細(xì)胞死亡）的濃度范圍，據(jù)此分組測(cè)細(xì)胞毒性和增殖，摸清楚這個(gè)藥物的IC50；

探索藥物有效劑量的范圍，發(fā)現(xiàn)劑量-效應(yīng)之間的規(guī)律：基于IC50縮減劑量覆蓋的范圍，設(shè)置更細(xì)化的分組，嘗試畫出藥效隨劑量增加而上升達(dá)到峰值、然后隨劑量過量導(dǎo)致細(xì)胞死亡的曲線。

原則即：找出藥物產(chǎn)生效應(yīng)的最低濃度（閾值）以及不同濃度對(duì)細(xì)胞的影響趨勢(shì)。