您當(dāng)前的位置：檢測(cè)資訊 > 科研開(kāi)發(fā)
嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2025-05-07 20:28
摘 要：建立測(cè)定毒品中氟胺酮含量的高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法。樣品經(jīng)稱量、溶解、搖勻和過(guò)濾后，經(jīng)Waters symmetry®C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱分析，以磷酸-三乙胺溶液和甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫（體積比為70∶30），檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。氟胺酮的質(zhì)量濃度在2～500 mg/L范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，檢出限為1 mg/L，定量限為2 mg/L。低、中、高3個(gè)濃度水平的加標(biāo)平均回收率為99.0%～102.2%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.71%～4.05%（n=6）。該方法分離效果和穩(wěn)定性好，適用于固體毒品中氟胺酮的定量分析。
關(guān)鍵詞：氟胺酮；高效液相色譜法；內(nèi)標(biāo)法；毒品
氟胺酮(F-Ketamine，2F-DCK)是一種苯環(huán)利啶類精神活性物質(zhì)，由王世玉等[1]于1987年首次合成，2021年7月1日正式被列入《非藥用類麻醉藥品和精神藥品管制品種增補(bǔ)目錄》[2]。目前氟胺酮成癮性機(jī)理尚未完全清楚[3?4]，但其在毒品繳獲物中的占比在不斷增高。目前國(guó)內(nèi)毒品繳獲物中氟胺酮的定量分析方法主要有氣相色譜法[5?8]和核磁共振法[9]，在生物樣品和環(huán)境樣品中氟胺酮及其代謝物的檢測(cè)方法主要為超高效液相色譜-質(zhì)譜法[10?14]。
目前液相色譜-質(zhì)譜分析方法在毒品定量檢測(cè)中應(yīng)用較少，主要原因是樣品濃度大，容易污染儀器，且使用成本遠(yuǎn)高于氣相色譜法和液相色譜法等方法，因此在實(shí)際檢測(cè)工作中往往不作為毒品定量分析的主流檢測(cè)方法。氣相色譜法分離效果好，但分析時(shí)間較長(zhǎng)，在實(shí)際工作中，隨著毒品樣品量的不斷增加，氣相色譜法已無(wú)法滿足大量樣品定量分析的需求。液相色譜法具有分離效率高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快等優(yōu)勢(shì)，與氣相色譜法相比，液相色譜法可應(yīng)用于熱不穩(wěn)定、高沸點(diǎn)、離子型物質(zhì)的檢測(cè)，大大提高了樣品檢測(cè)范圍。同時(shí)，液相色譜法是法醫(yī)毒物分析領(lǐng)域中一項(xiàng)實(shí)用的檢測(cè)技術(shù)，具有較高的靈敏度，可以顯著降低檢出限，以及具有更強(qiáng)的適用性而被廣泛使用[15]。目前國(guó)內(nèi)還未見(jiàn)采用高效液相色譜法測(cè)定毒品中氟胺酮含量的相關(guān)報(bào)道。為滿足大量樣品的快速分析需求，筆者建立了對(duì)毒品中氟胺酮定量分析的高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法，可為涉及氟胺酮案件的檢驗(yàn)鑒定提供可靠的定量方法。
1.實(shí)驗(yàn)部分
1.1主要儀器與試劑
高效液相色譜儀：Waters e2695型，配有2998 PDA檢測(cè)器，美國(guó)沃特世科技有限公司。
電子天平：XSE105DU型，感量為0.01 mg，梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易(上海)有限公司。
移液槍：10～100 μL、100～1 000 μL，法國(guó)吉爾森公司。
甲醇中氟胺酮溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：1 000 μg/mL，上海原思標(biāo)物科技有限公司。
色胺：純度(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為97%，德國(guó)默克股份兩合公司。
甲醇、三乙胺、濃磷酸：均為色譜純，德國(guó)默克股份兩合公司。
毒品樣品、空白樣品：均為送檢樣品。
實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。
1.2溶液配制
色胺溶液：稱取色胺粉末51.55 mg，置于50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至標(biāo)線，配制成質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL的色胺溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。
氟胺酮系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別精確量取氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，均加入適量色胺溶液，用甲醇配制成氟胺酮的質(zhì)量濃度分別為2、5、10、20、50、100、200、500 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，其中色胺的質(zhì)量濃度均為50 mg/L。
磷酸-三乙胺緩沖溶液：準(zhǔn)確量取3.50 mL濃磷酸，加入200 mL水稀釋；準(zhǔn)確量取6.10 mL三乙胺，滴入上述磷酸溶液中，用水稀釋并定容至1 000 mL。
1.3儀器工作條件
色譜柱：Waters symmetry®C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，美國(guó)沃特世科技有限公司)；流量：1 mL/min；進(jìn)樣體積：5 μL；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；運(yùn)行時(shí)間：10 min；流動(dòng)相：A相為磷酸-三乙胺緩沖溶液，B相為甲醇，A與B的體積比為70∶30；洗脫方式：等度洗脫。
1.4樣品處理
將固體樣品充分研磨，混勻，準(zhǔn)確稱取白色粉末狀樣品2份，各10.00 mg (精確至0.01 mg)，加入適量甲醇超聲提取20 min，加入適量?jī)?nèi)標(biāo)溶液，用甲醇定容至10 mL，搖勻，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，濾液作為樣品溶液，其中內(nèi)標(biāo)色胺的質(zhì)量濃度為50 mg/L。同法制備空白樣品溶液。
1.5定量方法
在1.3儀器工作條件下，分別測(cè)定氟胺酮系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品溶液，以氟胺酮與色胺的質(zhì)量濃度比為橫坐標(biāo)，氟胺酮與色胺的色譜峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中氟胺酮含量。
2.結(jié)果與討論
2.1波長(zhǎng)選擇
在190～450 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行掃描，光譜圖如圖1所示。由圖1可以看出，在相同質(zhì)量濃度下，色胺在219 nm處有最大吸收，氟胺酮在195 nm處有最大吸收，在216 nm處兩種物質(zhì)響應(yīng)一致。為了盡可能獲得較大的氟胺酮響應(yīng)值，在216 nm的基礎(chǔ)上適當(dāng)降低檢測(cè)波長(zhǎng)，但由于190～210 nm波長(zhǎng)屬于低波段，受到樣品雜質(zhì)的干擾比較多，尤其是受到流動(dòng)相中試劑純度影響較大。為了排除雜質(zhì)、溶劑等在低波長(zhǎng)處的干擾，且保證氟胺酮在分析過(guò)程中的靈敏度，最終選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。
圖1氟胺酮和色胺的吸收光譜圖
Fig. 1Absorption spectra of F-Ketamine and tryptamine
2.2流動(dòng)相選擇
分別考察了15 mmol/L磷酸二氫鈉溶液(含體積分?jǐn)?shù)為0.2%的磷酸)-甲醇、磷酸-三乙胺-甲醇兩種流動(dòng)相體系在等度洗脫條件下對(duì)待測(cè)目標(biāo)物保留時(shí)間、色譜峰型和分離度的影響。結(jié)果表明，以15 mmol/L磷酸二氫鈉溶液(含體積分?jǐn)?shù)為0.2%的磷酸)-甲醇作為流動(dòng)相時(shí)，目標(biāo)物不出峰；以磷酸-三乙胺-甲醇為流動(dòng)相時(shí)，在等度洗脫條件下目標(biāo)物能夠有效分離。對(duì)該流動(dòng)相體系配比進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明，當(dāng)磷酸-三乙胺溶液與甲醇的體積比為70∶30時(shí)，目標(biāo)物分離度大于2，故選擇磷酸-三乙胺溶液與甲醇的體積比為70∶30作為流動(dòng)相。
2.3柱溫選擇
采用磷酸-三乙胺溶液與甲醇(體積比為70∶30)為流動(dòng)相，進(jìn)行等度洗脫，考察柱溫分別為25、30、35、40 ℃時(shí)目標(biāo)物氟胺酮和內(nèi)標(biāo)色胺的色譜分離效果。結(jié)果表明，在不同柱溫條件下，兩種分析物隨溫度的升高分離度逐漸增大，且均大于2，可滿足定量分析要求。此外，隨著柱溫的升高，兩種分析物的保留時(shí)間減少1%～6%。當(dāng)柱溫為35 ℃時(shí)，兩種分析物的色譜峰較窄，其峰寬比另外兩種柱溫條件小1%；當(dāng)柱溫為40 ℃時(shí)，兩種分析物的色譜峰分離效果與柱溫為35 ℃時(shí)的色譜峰分離效果相差不明顯。綜合考慮，最終將柱溫設(shè)為35 ℃。
2.4專屬性試驗(yàn)
在1.3儀器工作條件下，分別測(cè)定毒品樣品溶液、空白毒品溶液、氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑空白(甲醇)，色譜圖如圖2所示。由圖2可以看出，空白溶劑和空白樣品基質(zhì)對(duì)2種分析物色譜峰無(wú)干擾，氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液中氟胺酮和色胺色譜峰均達(dá)到有效分離，且分離度大于2。表明該方法專屬性良好，適用于色胺和氟胺酮兩種分析物的檢測(cè)要求。
圖2毒品樣品溶液、空白樣品溶液、氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑空白色譜圖
Fig. 2Chromatograms of drug sample solution， blank sample solution， F-Ketamine standard solution， and solvent blank
2.5線性方程、檢出限及定量限
在1.3儀器工作條件下，測(cè)定氟胺酮系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度比為橫坐標(biāo)，目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到線性回歸方程為y=0.448 19x-0.047 23，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，質(zhì)量濃度線性范圍為2～500 mg/L。以甲醇為溶劑逐級(jí)稀釋氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.3儀器工作條件下測(cè)定，分別以基線噪聲的3倍和10倍作為氟胺酮的檢出限與定量限，得檢出限為1 mg/L，定量限為2 mg/L。
2.6加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)
選擇低、中、高3種質(zhì)量濃度(2、20、200 mg/L)進(jìn)行空白樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)。按所建方法，每個(gè)加標(biāo)水平平行測(cè)定6次，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，空白樣品加標(biāo)平均回收率為99.0%～102.2%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.61%～4.05%。表明該方法準(zhǔn)確度和精密度均符合要求，適用于毒品中氟胺酮含量的測(cè)定。
表1樣品加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)結(jié)果
Tab. 1Results of sample spiked recovery and precision test
2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)
選擇低、中、高3種質(zhì)量濃度(2.0、20.0、200 mg/L)進(jìn)行空白樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)，在1.3儀器工作條件下，連續(xù)測(cè)定3日，每日測(cè)定6次，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，低、中、高3個(gè)加標(biāo)水平測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.18%～5.21%，表明樣品溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，滿足毒品中氟胺酮含量的測(cè)定要求。
表2穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
Tab. 2Stability test results
3.結(jié)語(yǔ)
建立了高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定毒品中氟胺酮的含量，分別對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相、柱溫等條件進(jìn)行了選擇和優(yōu)化。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、精密度良好，為氟胺酮毒品的檢驗(yàn)提供了方法參考。該方法主要針
對(duì)真實(shí)案例中的固體毒品樣品進(jìn)行檢測(cè)，能否適用于其他非固體基質(zhì)的樣品還需進(jìn)一步研究。
參考文獻(xiàn)：
1王世玉，李崇照.麻醉活性物質(zhì)——氟胺酮的合成［J］.北京大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），1987（2）∶117.
WANG Shiyu，LI Chongzhao.Synthesis of anesthetic compound substance—F-Ketamines［J］.Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Pekinensis，1987（2）∶117.
2公安部.關(guān)于將合成大麻素類物質(zhì)和氟胺酮等18種物質(zhì)列入《非藥用類麻醉藥品和精神藥品管制品種增補(bǔ)目錄》的公告［EB/OL］.（2021-05-12）［2024-08-09］.https：//app.mps.gov.cn/gdnps/pc/content.jsp？id=7881703.
Ministry of Public Security.Announcement on Including 18 Substances such as Synthetic Cannabinoids and F-Ketamines in the Supplementary Catalogue of Controlled Non Medicinal Anesthetics and Psychotropic Drugs［EB/OL］.（2021-05-12）［2024-08-09］.https：//app.mps.gov.cn/gdnps/pc/content.jsp？id=7881703.
3李施霆.認(rèn)識(shí)氟胺酮：如何有效防范濫用危害？［N］.中國(guó)禁毒報(bào)，2021-11-26（5）.
LI Shiting.Understanding F-Ketamines：How to effectively prevent abuse hazards？［N］.China Anti Drug News，2021-11-26（5）.
4喬艷玲，李鋒，李香豫，等.氟胺酮研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥物依賴性雜志，2022，31（4）：241.
QIAO Yanling，LI Feng，LI Xiangyu，et al.Research progress on F-Ketamines［J］.Chinese Journal of Drug Dependence，2022，31（4）：241.
5張磊，陳家豪，馬驥.氟胺酮的GC/MS定性定量分析［J］.廣東公安科技，2019，27（4）：47.
ZHANG Lei，CHEN Jiahao，MA Ji.Qualitative and quantitative analysis of flunitrazepam by GC/MS［J］.Guangdong public security technology，2019，27（4）：47.
6何天宇，胡勝華.利用氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)氟胺酮的檢驗(yàn)分析［J］.武漢公安干部學(xué)院學(xué)報(bào)，2021，35（1）：48.
HE Tianyu，HU Shenhua.Analysis of F-Ketamines by gas chromatography-mass spectrometry［J］.Journal of Wuhan Public Security Cadre College，2021，35（1）：48.
7劉斌，閆軍紅，文明亮，等.新精神活性物質(zhì)——氟胺酮的檢驗(yàn)與思考［J］.中國(guó)藥物依賴性雜志，2023，32（4）：271.
LIU Bin，YAN Junhong，WEN Mingliang，et al.Examination and analysis of a new psychoactive substance—F-ketamine［J］.Chinese Journal of Drug Dependence，2023，32（4）：271.
8莊順，葉樹(shù)海，林葭，等.疑似毒品中新型麻醉活性物質(zhì)氟胺酮的GC-MS檢驗(yàn)［J］.中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2020，35（5）：508.
ZHUANG Shun，YE Shuhai，LIN Jia，et al.Identification of F-Ketamine in suspected drugs by GC/MS［J］.Chinese Journal of Forensic Medicine，2020，35（5）：508.
9吳波，郄一奇，楊喬，等.鹽酸氟胺酮的結(jié)構(gòu)確證和核磁共振定量分析［J］.刑事技術(shù)，2023，48（3）：262.
WU Bo，QI Yiqi，YANG Qiao，et al.Structural confirmation and quantitative nuclear magnetic resonance analysis into 2-Fluoro-deschloroketamine hydrochloride［J］.Forensic Science and Technology，2023，48（3）：262.
10方雅莉，馬驥，張磊.UPLC-MS/MS 分析全血與尿液中氯胺酮、氟胺酮、溴胺酮?dú)埩簦跩］.中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2023，38（1）：53.
FANG Yali，MA Ji，ZhANG Lei.Determination of Ketamine，F(xiàn)-Ketamine and Br-Ketamine in whole blood and urine samples by UPLC-MS/MS.［J］.Chinese Journal of Forensic Medicine，2023，38（1）：53.
11蔡玉剛，米蘭，吳永富，等.氟胺酮及其代謝物去甲氟胺酮在大鼠體內(nèi)分布及代謝降解規(guī)律研究［J］.刑事技術(shù)，2022，47（4）：388.
CAI Yugang，MI Lan，WU Yongfu，et al.distribution and metabolic pathway of F-ketamine and its metabolite F-norketamine in rats［J］.Forensic Science and Technology，2022，47（4）：388.
12楊喬，田冰冰，吳波.QTRAP LC-MS/MS 方法分析頭發(fā)中氟胺酮及其代謝物的研究［J］.中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2021，36（5）：470.
YANG Qiao，TIAN Bingbing，WU Bo.Research on the analytical method of F-ketamine and metabolite in hair samples by QTRAP LC-MS/MS［J］.Chinese Journal of Forensic Medicine，2021，36（5）：470.
13楊麗，白登文，楊淑頤，等.應(yīng)用污水流行病學(xué)方法調(diào)查四川省氟胺酮濫用量［J］.中國(guó)藥物濫用防治雜志，2022，28（10）：1 362.
YANG Li，BAI Dengwen，YANG Shuyi，et al.Investigation on the consumption of 2-fluorodeschloroketamine in sichuan province by wastewater-based epidemiology［J］.Chinese Journal of Drug Abuse Prevention and Treatment，2022，28（10）：1 362.
14丁艷，喬宏偉，陳捷，等.在線固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)污水中氟胺酮等21種毒品及其代謝物［J］.中國(guó)司法鑒定，2022（5）：39.
DING Yan，QIAO Hongwei，CHEN Jie，et al.Simultaneous determination of 21 illicit drugs and their metabolites including fluoroketamine in sewage by online SPE-UPLC-MS/MS［J］.Chinese Journal of Forensic Sciences，2022（5）：39.
15李珊，王瀟逸，張雅楠，等.色譜分析技術(shù)在法醫(yī)毒物領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國(guó)藥物濫用防治雜志，2022，28（5）：545.
LI Shan，WANG Xiaoyi，ZHANG Yanan，et al.Advances in the application of chromatographic techniques in forensic toxicology［J］.Chinese Journal of Drug Abuse Prevention and Treatment，2022，28（5）：545.
引用本文：梁舒婷，蒙衛(wèi)寧，吳明霞，等 . 高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定毒品中氟胺酮［J］. 化學(xué)分析計(jì)量，2025，34（1）： 54.(LIANG Shuting, MENG Weining, WU Mingxia, et al. Determination of F-Ketamine in drugs by high performance liquid chromatography with internal standard method[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2025, 34(1): 54.)
來(lái)源：化學(xué)分析計(jì)量
關(guān)于我們 聯(lián)系我們 營(yíng)業(yè)執(zhí)照 全國(guó)服務(wù)電話：400-818-0021 嘉峪檢測(cè)版權(quán)所有 備案號(hào)：京ICP備14047019號(hào)-2 
京公網(wǎng)安備11010802046783號(hào)
