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1. 前言

記住，沒有樣本的實驗室毫無意義！

除了細胞以外，蛋白質(zhì)也是生物樣本的主力。尤其是很多課題對蛋白質(zhì)的生物活性具有很高的要求，肽鏈沒破壞但三四級結(jié)構(gòu)損壞了，一樣做不出結(jié)果。

以下將介紹三點蛋白質(zhì)樣本的保存思路。

2. 低溫保存

蛋白質(zhì)，尤其是酶，是非常脆的，稍微偏離一點體溫活性就會大打折扣，通常超過40℃就會失活。所以冷藏一般是短時間保存的必要手段。

如果放在常用的4℃冰箱，一定要在一周內(nèi)用完；如果需長期保存，通常要保存于–20 ~ 5℃ ，如能在-70℃下保存當(dāng)然最好。

因此需反復(fù)強調(diào)一點：按后續(xù)實驗用量分裝保存于適當(dāng)溫度，一次取出立刻用完，避免反復(fù)凍融。

但是！有少數(shù)酶對低溫敏感，如鳥苷丙酮酸羧化酶在25℃時性質(zhì)穩(wěn)定，低溫下反而失活；過氧化氫酶要在0~4℃保存，如果冰凍反而失活；羧肽酶反復(fù)凍融會失活等。這些需要同學(xué)們事先去相關(guān)數(shù)據(jù)庫檢索確認。

此外還有一點debuff：蛋白質(zhì)和酶越純越不穩(wěn)定，溶液狀態(tài)比固態(tài)更不穩(wěn)定，因此還需要其它手段。

3. 脫水，以干粉或結(jié)晶狀態(tài)保存

正如上一段所說：蛋白質(zhì)和酶以固態(tài)存在比溶液要穩(wěn)定得多。這就是為什么實驗室常備凍干機器。

通過冷凍干燥、真空干燥等手段將蛋白質(zhì)樣本制成固態(tài)干粉制劑放在干燥劑中，可在低溫下長期保存超過一年。

以固態(tài)保存在于盡可能抑制游離水造成的化學(xué)反應(yīng)與微生物活動：

● 抑制微生物活性，含水量應(yīng)小于10% ；

● 抑制化學(xué)活性，含水量應(yīng)小于3%。

此外要特別注意酶在凍干時往往會部分失活。

4. 使用保護劑保存

我們在培養(yǎng)細胞時會添加血清，各種反應(yīng)體系需要添加buffer，自然的生物體內(nèi)也具有精密的穩(wěn)態(tài)環(huán)境，模擬這一穩(wěn)態(tài)環(huán)境也可以長期保存蛋白質(zhì)的活性，或者說自然功能。

● 惰性有機物：如糖類、脂肪酸、牛血清清蛋白、氨基酸、多元醇等，以保持穩(wěn)定的疏水環(huán)境；

● 中性鹽：有一些蛋白質(zhì)要求在高離子強度（1 ~ 4 mol/L或飽和的鹽溶液）的極性環(huán)境中才能保持活性。常用MgSO4，NaCl、(NH4)2SO4。等。以此方式保存的蛋白質(zhì)在后續(xù)使用時要先進行脫鹽工序；

● 巰基試劑：一些蛋白質(zhì)和酶的表面或內(nèi)部含有半胱氨酸巰基，易被空氣中的氧緩慢氧化為磺酸或二硫化物而變性。如谷胱甘肽等蛋白是生物體內(nèi)重要的還原劑，其還原性也是分子生物學(xué)的研究對象。為保持這一類蛋白的還原能力，保存時可加人半胱氨酸或巰基乙醇，起到一個替罪羊的作用，代替蛋白質(zhì)自身被氧化。

5. 參考文獻

[1] 張建社，褚武英，陳韜，2009，蛋白質(zhì)分離與純化技術(shù)，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社