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醫(yī)療器械無菌檢查為什么選擇14天?

嘉峪檢測網(wǎng)        2025-05-09 08:35

《中國藥典》2000版附錄無菌檢查法規(guī)定無菌檢查需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基管置30~50℃、真菌培養(yǎng)基管置20~25℃培養(yǎng)7日。

 

《中國藥典》2005版附錄無菌檢查法之后才開始延長至14天,因為大多數(shù)的細(xì)菌經(jīng)過7天的培養(yǎng)都可以生長出來,這個對于本身允許少量菌落存在的非無菌藥物已經(jīng)足夠了,但是對于要求嚴(yán)格無菌的藥物,還要考慮到可能有極少數(shù)的細(xì)菌或者真菌,以及霉菌孢子生長速度比較慢,在7天時還未生長,所以要延長培養(yǎng)時間,以同樣條件或者變換為霉菌培養(yǎng)的溫濕度條件,再培養(yǎng)7天,以便給可能存在的污染菌一個足夠的生長時間。

 

的確有些菌在培養(yǎng)7天時觀察不到長菌現(xiàn)象,但在14天培養(yǎng)后才發(fā)現(xiàn)了菌落,如結(jié)核桿菌,與其它常見的細(xì)菌比較,結(jié)核桿菌的生長代謝緩慢,并且在自然環(huán)境不利的情況下,結(jié)核桿菌具有很強的生存能力:常見的細(xì)菌一般10-30分種就能繁殖一代,而結(jié)核桿菌則需要12-24小時才能繁殖—代,由此可見結(jié)核桿菌的生長代謝比潰兇的細(xì)菌緩慢的多。

 

它屬于放線菌目分支桿菌科分支桿菌屬,為專性需氧菌,營養(yǎng)要求高,在含有蛋黃、馬鈴薯、甘油和天門冬素等的固體培養(yǎng)基上才能生長。最適ph6.5~6.8,最適溫度為37℃,生長緩慢,接種后培養(yǎng)3~4周才出現(xiàn)肉眼可見的菌落;抗結(jié)核治療后菌活力衰退,培養(yǎng)時需6--8周甚至20周后才出現(xiàn)菌落。

 

另外布魯氏菌為胞內(nèi)寄生菌,專性需氧,營養(yǎng)要求高,多數(shù)菌株培養(yǎng)時需要多種氨基酸、硫胺素、煙酸和生物素等,可在普通培養(yǎng)基中加入血清或肝滲液進行培養(yǎng)。

 

初次分離需5%-10%的CO2,生長緩慢,培養(yǎng)2-3天出現(xiàn)菌落,4-5天后菌落直徑可達(dá)2-3mm,菌落無色、半透明、表面光滑、無溶血,革蘭染色為革蘭陰性球桿菌,革蘭染色時堿性復(fù)紅著色弱,可延長染色時間至3分鐘,鏡下菌體較小,呈細(xì)沙狀,偶見集聚成小團。觸酶陽性,氧化酶陽性,脲酶快速陽性。

 

有文獻報道使用全自動血培養(yǎng)系統(tǒng)陽性率40-70%,平均培養(yǎng)時間5.7d(3-12d)[1],并且生長曲線平緩。布魯菌在自然環(huán)境中抵抗力很強,在干燥土壤中可生存數(shù)月,在皮毛中、乳及乳制品、凍肉中時間生存較長,對常用的物理消毒方法和化學(xué)消毒劑敏感,加熱60℃或陽光下暴曬10~20min可殺死該菌,5%的石灰水、2%的來蘇兒、0.2%的漂白粉均可以在數(shù)分鐘內(nèi)將該菌殺死。說明培養(yǎng)周期的延長對于無菌藥物中的菌檢還是很有必要的。

 

培養(yǎng)及觀察:《中國藥典》2015版四部通則1101無菌檢查法規(guī)定接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天;接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份,一份置30?35℃培養(yǎng),一份置20?25℃培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。

 

如在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁,培養(yǎng)14天后,不能從外觀上判斷有無微生物生長,可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中,培養(yǎng)3天,觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁。

 

《中國藥典》2020版四部通則1101無菌檢查法規(guī)定接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)不少于14天;接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份,一份置30?35℃培養(yǎng),一份置20?25℃培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁,培養(yǎng)14天后,不能從外觀上判斷有無微生物生長,可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中,再培養(yǎng)不少于4天,觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁。

 

注:文章參考:[1]賈斌,張峰波,等.血液檢出布魯氏菌陽性患者的實驗室及臨床特點分析[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2017,40(2):136-140.;文章參考來源百度百科;《中國藥典》2015版附錄無菌檢查法;《中國藥典》2020版附錄無菌檢查法。

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來源:廣東省藥品檢驗所

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