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嘉峪檢測網(wǎng) 2025-05-13 15:35
本文所涉及的I型膠原軟骨修復(fù)凝膠類產(chǎn)品，是指所用原材料限定于由動物（牛、豬、鼠、魚等）的組織（皮膚、肌腱、骨骼等）提取、分離及純化（交聯(lián)或非交聯(lián)）得到的I型膠原蛋白，可采用不同的物理、化學(xué)交聯(lián)方法及其它工藝制備而成的凝膠狀支架產(chǎn)品。
根據(jù)《醫(yī)療器械分類目錄》，分類編碼為13-10，管理類別為III類。
一、I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的主要風(fēng)險
開發(fā)人需參照GB/T 42062《醫(yī)療器械 風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》對產(chǎn)品全生命周期實(shí)施風(fēng)險管理，充分識別產(chǎn)品的設(shè)計、原材料、制造過程、產(chǎn)品包裝、滅菌、運(yùn)輸、貯存、使用等產(chǎn)品生命周期內(nèi)各個環(huán)節(jié)的安全特征，從生物學(xué)危險（源）、環(huán)境危險（源）等方面，對產(chǎn)品進(jìn)行全面的風(fēng)險分析，并明確所采取的風(fēng)險控制措施。動物源性來源產(chǎn)品宜參考YY/T 0771標(biāo)準(zhǔn)、《動物源性醫(yī)療器械注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則》（2017年修訂版）開展風(fēng)險分析。
風(fēng)險管理內(nèi)容參考GB/T 42062第9章和《醫(yī)療器械安全和性能的基本原則》的2.1.2e)f)。
二、I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品性能研究實(shí)驗(yàn)要求
1.性能指標(biāo)
根據(jù)產(chǎn)品特性，選擇適用的項(xiàng)目進(jìn)行規(guī)定，例如外觀（如性狀、顏色）、可見異物、裝量、膠原蛋白含量、復(fù)合成分含量（若適用）、總糖含量、脂肪含量、雜蛋白分析、水分、酸堿度、熾灼殘渣、酸水解產(chǎn)物、色氨酸檢查（去端肽時）、重金屬總量和微量元素、添加劑（包括溶劑）殘留、交聯(lián)劑殘留（若適用）、無菌性、環(huán)氧乙烷殘留（若適用）、細(xì)菌內(nèi)毒素等。建議設(shè)定凝膠化相關(guān)的性能。
若使用容器包裝（如預(yù)灌封注射器），并包含配合使用的附件（如注射針），應(yīng)制定相關(guān)適用的性能指標(biāo)（如預(yù)灌封注射器性能指標(biāo)、注射針性能指標(biāo)，及推擠力、可注射性能等）。
2.化學(xué)/材料表征研究
2.1膠原蛋白材料表征
需明確產(chǎn)品I型膠原的具體來源及其制備工藝。膠原蛋白材料的表征至少需包括如下項(xiàng)目：
2.1.1 I型膠原蛋白分子量
采用電泳法測定膠原蛋白分子量時，按照YY/T 1805.2《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 膠原蛋白 第2部分I型膠原蛋白分子量檢測十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法》 進(jìn)行測試。非變性條件下，膠原蛋白分子量可用分子排阻色譜法檢測，具體方法參照《組織工程醫(yī)療器械 膠原蛋白》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行。
2.1.2 I型膠原蛋白純度
按照《中華人民共和國藥典》“色譜法”的“分子排阻色譜法”測定，按面積歸一化法計算純度。
膠原蛋白具有其他蛋白所沒有的三股螺旋結(jié)構(gòu)，可以在特異性的膠原蛋白酶作用下水解形成小分子多肽或者氨基酸；而非膠原蛋白卻不會受到膠原蛋白酶的水解作用。因此，可以利用膠原蛋白酶水解樣品，結(jié)合考馬斯亮藍(lán)對牛血清白蛋白染色極限的確定，檢測膠原蛋白樣品中所含雜蛋白總量，進(jìn)而通過相應(yīng)計算得到膠原蛋白純度。具體方法參照《組織工程醫(yī)療器械 膠原蛋白》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行。
2.1.3 肽圖
按照《中華人民共和國藥典》“肽圖檢查法”規(guī)定的方法進(jìn)行。
2.1.4其它
隨著相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的更新，需進(jìn)一步開展膠原蛋白高級結(jié)構(gòu)分析、膠原蛋白自組裝性能（非交聯(lián)產(chǎn)品）、端肽去除程度（若適用）、熱穩(wěn)定性、膠原蛋白-細(xì)胞相互作用等研究。
2.2產(chǎn)品組成成分表征
2.2.1 I型膠原蛋白鑒別
紅外分光光度法、拉曼光譜法、特征多肽測定法、免疫印跡法、酶聯(lián)免疫法等可用于膠原蛋白鑒別，宜選擇一種或多種方法進(jìn)行膠原蛋白來源動物種屬和/或型別的鑒別。也可選擇其他經(jīng)驗(yàn)證的方法進(jìn)行膠原蛋白的鑒別。
2.2.2膠原蛋白含量
膠原蛋白含量可用總蛋白含量和純度計算?？偟鞍缀康臏y定按照YY/T 1511附錄A“凱氏定氮法蛋白含量測定”進(jìn)行，或按照《中華人民共和國藥典》“蛋白質(zhì)含量測定法 第三法 雙縮脲法”進(jìn)行測定。若使用凱氏定氮法，需明確和驗(yàn)證氮轉(zhuǎn)換為膠原蛋白的換算系數(shù)。
羥脯氨酸是膠原蛋白中含有的特異性氨基酸，分析測定羥脯氨酸含量后，可以計算出膠原蛋白的含量，可參照YY/T 0954《無源外科植入物I型膠原蛋白植入劑》規(guī)定的方法進(jìn)行。
2.2.3 總糖含量
參照《組織工程醫(yī)療器械 膠原蛋白》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行。
2.2.4脂肪含量
可參照GB 5009.6《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪的測定》的規(guī)定進(jìn)行測定。
2.2.5伴生的其他類型膠原
與I型膠原伴生的其他型別的膠原對I型膠原自組裝有影響，應(yīng)評估和控制其在終產(chǎn)品中的含量，以確保產(chǎn)品批次間的一致性。其中，III型膠原作為I型膠原主要的伴生膠原，可以采用天狼猩紅染色或者更精確的免疫組化、免疫熒光、ELISA等技術(shù)對I型和III型膠原進(jìn)行鑒別與量化。
2.2.6重金屬總量和微量元素
其中，重金屬總量以鉛（Pb）計。取膠原熾灼殘渣下遺留的殘渣，按照《中華人民共和國藥典》0821重金屬檢查法第二法進(jìn)行。
微量元素按照《中華人民共和國藥典》“原子吸收分光光度法”、“電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法”、“電感耦合等離子體質(zhì)譜法”或相當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行測定。
2.2.7有毒物殘留
I型膠原提取制備過程中，可能存在有毒成分如三氯甲烷、過氧乙酸等殘留。參照《中華人民共和國藥典》相應(yīng)檢測方法進(jìn)行測試。
2.2.8酸堿度
酸堿度（pH值）是影響膠原分子發(fā)生自組裝的關(guān)鍵條件，pH為7.0-7.5 的膠原溶液可以順利地形成凝膠且成膠時間和成膠效果不會受到明顯的影響。按照《中華人民共和國藥典》 四部通則0631的pH值測定法，取膠原凝膠前驅(qū)體溶液，采用酸度計測定pH值。
2.2.9外源性DNA殘留
按照《中華人民共和國藥典》四部3407外源性DNA殘留量測定法“熒光染色法”或“定量PCR法”進(jìn)行?；蛘邊⒄誝Y/T 1876《組織工程醫(yī)療產(chǎn)品 動物源性生物材料DNA殘留量測定法：熒光染色法》中規(guī)定方法測試。
2.2.10 α-Gal抗原殘留
α-半乳糖基抗原（簡稱Gal 抗原）是動物組織、器官移植到人體引起超急性免疫排斥反應(yīng)的主要靶抗原，廣泛存在于牛、豬和其他低等動物體內(nèi)，人體由于有2 個堿基錯位變異而不表達(dá)Gal 抗原，但人血清中存在高滴度的抗-Gal 抗體，因此當(dāng)人體接受含有Gal 抗原的組織或生物材料時就會引起補(bǔ)體介導(dǎo)的抗體依賴型細(xì)胞毒性效應(yīng)，引起免疫排斥及免疫毒理反應(yīng)。Gal 抗原缺失小鼠已被廣泛應(yīng)用于異種免疫原性評價。參照YY/T 1561《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 動物源性支架材料殘留α-Gal抗原檢測》中規(guī)定方法進(jìn)行測試。
2.2.11 EO殘留
對于經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌后產(chǎn)品的EO殘留量的可耐受接觸限量，建議參考GB/T 16886.7《醫(yī)療器械生物學(xué)評價 第7部分：環(huán)氧乙烷殘留量》中4.3.5.2的要求進(jìn)行規(guī)定。
3.物理和機(jī)械性能研究
3.1凝膠化性能和可注射性
凝膠化性能對原位注射賦型的膠原水凝膠非常重要，若適用，可以通過傾斜法、濁度法、光散射法以及動態(tài)流變儀等檢測手段表征膠原分子聚合動力學(xué)、聚合能力、凝膠化時間等。
3.1.1凝膠化性能
宜確定產(chǎn)品的凝膠化時間，可采取已經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證的測試方法，例如管傾斜試驗(yàn)和動態(tài)流變學(xué)測試等。凝膠交聯(lián)度在很大程度上影響著物理性能，實(shí)際交聯(lián)程度與理論交聯(lián)程度的比值可直接反映交聯(lián)度，故在適用的情況下，推薦測定產(chǎn)品的交聯(lián)程度。在某些情況下，可簡單地通過計算成膠后浸出物的比例來反映水凝膠交聯(lián)程度。
3.1.2可注射性
主要考慮宏觀可注射性，通過壓縮實(shí)驗(yàn)檢測推動注射器所需力大小，考察不同條件下（儲存時間、注射濃度、溫度、針頭大小等）其可注射性能。鼓勵測量剪切粘度變化，進(jìn)行剪切變稀表征。
3.2水性環(huán)境下的形態(tài)穩(wěn)定性
3.2.1溶脹或收縮性能
正常軟骨的含水率較高，維持著良好的營養(yǎng)物質(zhì)透過性能，高的含水率有利于支架材料相關(guān)營養(yǎng)物質(zhì)的滲透運(yùn)輸。建議通過測定材料浸泡前后的質(zhì)量或者體積變化對材料的溶脹速率、或收縮性能進(jìn)行表征。
3.2.2保水性
制備好的水凝膠放置在手術(shù)的正常條件下，記錄溫濕度變化，在一段時間內(nèi)測定凝膠的質(zhì)量變化，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示。前后質(zhì)量差與初始質(zhì)量之比定義為質(zhì)量變化百分比。
3.3力學(xué)性能
機(jī)械性能或者粘彈性在影響細(xì)胞行為與細(xì)胞誘導(dǎo)的基質(zhì)重塑中具有重要作用。根據(jù)材料的形態(tài)與大小選擇，可通過流變儀、動態(tài)力學(xué)分析儀、納米壓痕儀等對膠原水凝膠力學(xué)性能（壓縮、剪切等模式）與粘彈性（蠕變、應(yīng)力松弛、動態(tài)力學(xué)）進(jìn)行測試。需注意材料模量等與組織的匹配度及其在體內(nèi)生物力學(xué)微環(huán)境影響下的穩(wěn)定性。
3.3.1彈性模量
可以以動態(tài)力學(xué)分析儀對樣品進(jìn)行壓縮測試，分析其壓縮曲線，在低形變線性彈性區(qū)計算樣品的彈性模量。
3.3.2蠕變和應(yīng)力松弛
宜在應(yīng)力松弛表征時，固定材料形變，觀察應(yīng)力隨時間的變化趨勢；在蠕變行為表征時，固定材料的初始應(yīng)力，觀察形變隨時間的變化趨勢。
3.3.3抗疲勞性能
對于承重部位的軟骨，在人的日常活動中要經(jīng)歷反復(fù)的擠壓，因此對于膠原水凝膠軟骨修復(fù)材料的抗疲勞力學(xué)性能也提出了相應(yīng)的要求?？刹捎冕槍σ后w浸沒式材料的動態(tài)力學(xué)分析儀等儀器對水凝膠的抗疲勞性能進(jìn)行考察，通過壓縮加載-卸載循環(huán)研究水凝膠的能量耗散，膠原水凝膠樣品被壓縮到一定應(yīng)變下循環(huán)若干次。建議根據(jù)應(yīng)力應(yīng)變定義出能量耗散方程，并得出樣品的循環(huán)壓縮強(qiáng)度。
3.3.4 體外組織結(jié)合性能
若其他理化性能測試不足以判定產(chǎn)品在軟骨缺損部位的固位能力，建議開發(fā)人利用體外模型進(jìn)行產(chǎn)品與組織結(jié)合性能的研究，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。
3.4微觀結(jié)構(gòu)
膠原水凝膠的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)模擬了細(xì)胞外基質(zhì)的微觀結(jié)構(gòu)，影響細(xì)胞的粘附、鋪展和分化?？蓪⑺z樣品經(jīng)液氮處理后凍干，通過掃描電子顯微鏡觀察纖維形態(tài)、直徑、分布以及多孔結(jié)構(gòu)。拍攝后的圖像可采用Image J等圖像處理軟件對其進(jìn)行處理和數(shù)據(jù)收集，而后進(jìn)行統(tǒng)計計算，但凍干過程引起了凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)改變，故僅作為間接評價方法?；蛘撸z樣品直接采用低溫掃描電子顯微鏡或環(huán)境掃描電子顯微鏡對樣品的孔結(jié)構(gòu)、纖維形態(tài)等進(jìn)行表征。
3.5傳質(zhì)性能
物質(zhì)傳遞性能指細(xì)胞、營養(yǎng)、廢物物質(zhì)向基質(zhì)中或者在基質(zhì)中擴(kuò)散的能力，可通過熒光染料-共聚焦顯微鏡、擴(kuò)散室、光密度分析等表征。材料需有利于細(xì)胞黏附、遷移和增殖；有利于氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)傳輸；有利于代謝物的排出和組織的長入。
為檢測膠原水凝膠營養(yǎng)物質(zhì)的透過性能，可采用氯化鈉作為營養(yǎng)物質(zhì)中離子性物質(zhì)的代表，色氨酸作為小分子營養(yǎng)物質(zhì)的代表，測定氯化鈉和色氨酸的透過率；同時，可通過共聚焦顯微鏡觀察熒光蛋白分子的擴(kuò)散來表征水凝膠對蛋白分子的透過率。
4.生物學(xué)特性研究
4.1生物相容性評價
生物相容性評價應(yīng)遵循GB/T 16886.1《醫(yī)療器械生物學(xué)評價第1部分：風(fēng)險管理過程中的評價與試驗(yàn)》相關(guān)要求，生物相容性評價可以參考《醫(yī)療器械生物學(xué)評價指南》，結(jié)合產(chǎn)品的預(yù)期接觸部位和累積使用的接觸時間，必要時開展生物學(xué)試驗(yàn)。生物學(xué)風(fēng)險評價終點(diǎn)一般包括細(xì)胞毒性、致敏、刺激或皮內(nèi)反應(yīng)、材料介導(dǎo)的致熱性、急性全身毒性、亞急性毒性、慢性毒性、亞慢性毒性、植入反應(yīng)、遺傳毒性和致癌性。需結(jié)合物理和/或化學(xué)表征、降解性能等明確產(chǎn)品在上述各項(xiàng)生物學(xué)風(fēng)險評定終點(diǎn)的安全性。
4.2產(chǎn)品與細(xì)胞相互作用研究
對產(chǎn)品與軟骨修復(fù)相關(guān)的材料-細(xì)胞相互作用性能進(jìn)行評價，一般可開展產(chǎn)品對細(xì)胞的粘附、遷移、增殖、分化等影響的生物學(xué)性能評價試驗(yàn)?？蓞⒖肌督M織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 軟骨支架與細(xì)胞相互作用的評價試驗(yàn)》等行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)方法。
在擬進(jìn)行體外模擬研究而設(shè)定體外試驗(yàn)參數(shù)時，宜充分考慮與產(chǎn)品修復(fù)再生關(guān)節(jié)軟骨相關(guān)的體內(nèi)因素，如細(xì)胞類型、細(xì)胞數(shù)量、力學(xué)刺激等。用作體外研究的產(chǎn)品樣品宜具有代表性，需注意樣品尺寸（厚度）與申報產(chǎn)品的差異對體外試驗(yàn)結(jié)果的影響。體外細(xì)胞試驗(yàn)宜選擇預(yù)期體內(nèi)發(fā)揮修復(fù)再生作用的主要細(xì)胞類型，細(xì)胞接種方式、細(xì)胞接種數(shù)量要能與植入后初期/早期能長入/遷移入產(chǎn)品的方式和細(xì)胞數(shù)量相適宜。需要對采用的細(xì)胞培養(yǎng)條件提供合理化理由，例如考慮體內(nèi)軟骨修復(fù)時的體液環(huán)境/軟骨的營養(yǎng)方式等，可考慮采用無血清培養(yǎng)基或低百分比含量血清的培養(yǎng)基、低氧培養(yǎng)條件等。體外細(xì)胞試驗(yàn)也可考慮施加力學(xué)刺激，例如靜水壓。
4.3生物安全性評價
可參照《動物源性醫(yī)療器械注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則》的要求開展產(chǎn)品免疫原性評價以及病毒滅活評價。
Ⅰ型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的免疫原性的研究、評價與控制主要包括：免疫原性毒理學(xué)/臨床相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)、免疫毒理學(xué)試驗(yàn)、免疫原性風(fēng)險相關(guān)的質(zhì)量控制以及免疫原性相關(guān)不良事件等。應(yīng)對熱原進(jìn)行控制，致熱反應(yīng)推薦采用家兔法。且應(yīng)將內(nèi)毒素水平控制列入出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目。對于通過提純?nèi)コ庖咴晕镔|(zhì)的Ⅰ型膠原蛋白，可通過雜蛋白的含量指標(biāo)進(jìn)行控制；對于通過脫細(xì)胞工藝去除免疫原性物質(zhì)的Ⅰ型膠原蛋白，應(yīng)考慮殘留細(xì)胞數(shù)量、殘留DNA數(shù)量和/或殘留α-Gal抗原的數(shù)量等指標(biāo)。開發(fā)人宜根據(jù)具體產(chǎn)品特性，考慮需增加的性能研究項(xiàng)目，如端肽、損傷相關(guān)的分子模式、核酸降解酶以及特異性抗體檢測。
在選擇免疫學(xué)評價項(xiàng)目和設(shè)計試驗(yàn)方案時應(yīng)充分考慮人與實(shí)驗(yàn)動物的種屬差異。Gal抗原缺失動物可能是評價動物源性生物材料免疫原性的合適模型。如果結(jié)合“植入材料特異性抗體檢測”，可以同時檢測特異性抗Gal抗體之外的材料特異性抗體。
在參考GB/T 16886.20分析選擇體外免疫學(xué)試驗(yàn)時，要充分考慮樣品制備的合理性，比如使用浸提液用于實(shí)驗(yàn)樣品時要充分分析和證明抗原物質(zhì)全部被有效浸提出來，客觀地分析實(shí)驗(yàn)體系的局限性。建議參考最新文獻(xiàn)研究，合理選擇體外免疫學(xué)試驗(yàn)方法，客觀評價異種免疫原性風(fēng)險。
關(guān)于病毒滅活，若產(chǎn)品采用常見的工藝，如有機(jī)物、射線、強(qiáng)酸等，其過程和方法相對成熟，開發(fā)人可采用文獻(xiàn)或歷史數(shù)據(jù)對病毒滅活效果進(jìn)行評價，必要時針對申報產(chǎn)品開展病毒滅活試驗(yàn)驗(yàn)證。鑒于產(chǎn)品主要成分為膠原，宜考慮病毒滅活工藝對膠原性能的影響，以及對產(chǎn)品有效性的影響。
5.體外降解性能
適宜的降解行為對軟骨組織修復(fù)具有重要作用，需要關(guān)注材料的降解性能。
5.1組成成分變化
宜對不同時間點(diǎn)降解產(chǎn)物進(jìn)行組成成分（如氨基酸和多肽）的分析。
5.2宏觀形貌變化
宜采用相機(jī)、光學(xué)顯微鏡等對降解不同程度的材料進(jìn)行宏觀形貌的表征。
5.3體積和質(zhì)量的變化
宜在PBS溶液或膠原蛋白酶溶液環(huán)境下，在指定時間點(diǎn)對樣品體積和質(zhì)量進(jìn)行測定。樣品的降解率以質(zhì)量變化率或者體積變化率表示，通過記錄樣品在不同時間點(diǎn)的降解率，獲得其隨時間變化的規(guī)律。
6.動物試驗(yàn)研究
6.1動物試驗(yàn)決策及設(shè)計
需按照《醫(yī)療器械動物試驗(yàn)研究注冊審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則》決策是否需開展動物試驗(yàn)研究。如開展動物試驗(yàn)研究，需按照《醫(yī)療器械動物試驗(yàn)研究注冊審查指導(dǎo)原則 第二部分：試驗(yàn)設(shè)計、實(shí)施質(zhì)量保證》進(jìn)行，并遵循3R原則。需關(guān)注動物模型建立的科學(xué)性和合理性，以及對臨床的借鑒意義。
對于I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品，體內(nèi)降解動物試驗(yàn)研究可與常規(guī)動物試驗(yàn)研究合并開展。I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的動物試驗(yàn)可以使用兔、犬、豬、羊等不同種屬的動物模型，采用形態(tài)學(xué)、組織生物化學(xué)、生物力學(xué)分析等進(jìn)行評價。動物試驗(yàn)方案設(shè)計宜明確的關(guān)鍵內(nèi)容見本指導(dǎo)原則附錄。
6.2實(shí)驗(yàn)動物模型的選擇
實(shí)驗(yàn)動物模型應(yīng)符合動物試驗(yàn)?zāi)康模⒑线m的動物疾病模型用于研究，明確選擇實(shí)驗(yàn)動物模型的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量應(yīng)保證結(jié)果具有可靠性，并結(jié)合統(tǒng)計學(xué)考慮。如選擇的實(shí)驗(yàn)動物模型對于產(chǎn)品應(yīng)用于人體的安全性分析具有局限性，需明確對研究結(jié)果的影響。
研發(fā)產(chǎn)品的生物學(xué)效應(yīng)、機(jī)械性能、降解周期、降解產(chǎn)物同組織的相容性及組織反應(yīng)研究中，宜盡量選用符合相關(guān)國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動物，有效性評價建議包含大動物試驗(yàn)。需要考慮I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的固定方式以及材料脫落風(fēng)險。
6.3受試器械、對照品和實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量
開發(fā)人需明確使用的受試器械和對照品，包括產(chǎn)品名稱、結(jié)構(gòu)及組成（含配合使用的附件）、型號規(guī)格、使用數(shù)量、是否重復(fù)使用等信息。受試器械應(yīng)為典型性產(chǎn)品，對照品宜優(yōu)先選擇已上市的同類器械作為對照品，或?qū)φ张R床常用的有效修復(fù)技術(shù)。適當(dāng)時，動物試驗(yàn)中可設(shè)立陰性對照組和（或）空白對照組。
實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量可結(jié)合研究目的、研究假設(shè)（如適用）、文獻(xiàn)信息、同類產(chǎn)品經(jīng)驗(yàn)等方面估計動物試驗(yàn)數(shù)量，受試器械組關(guān)鍵觀察點(diǎn)實(shí)驗(yàn)動物數(shù)量的設(shè)定需考慮統(tǒng)計學(xué)分析需要。另一方面，建議預(yù)估動物試驗(yàn)數(shù)量時，考慮因各種原因?qū)е聦?shí)驗(yàn)動物過早死亡的情況。
6.4動物試驗(yàn)持續(xù)時間
動物試驗(yàn)的觀察時間宜根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途，評價指標(biāo)及降解周期選擇研究持續(xù)時間，同時宜參考同類產(chǎn)品的研究情況。建議觀察時間點(diǎn)及觀察指標(biāo)參考YY/T 0606.10。動物試驗(yàn)應(yīng)能觀察到產(chǎn)品降解特征且應(yīng)觀察到產(chǎn)品完全降解、吸收，并且產(chǎn)品對靶組織及其他組織（如適用）的影響達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。在研究中應(yīng)選擇多個觀察時間點(diǎn)，其設(shè)定應(yīng)有合理依據(jù)。
6.5評價標(biāo)準(zhǔn)
按照臨床標(biāo)準(zhǔn)推薦的療效指標(biāo)進(jìn)行評價，并表征產(chǎn)品的降解特征。
在動物試驗(yàn)中，應(yīng)對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行完整的尸檢，包括大體和詳細(xì)的組織病理學(xué)檢查，評估指標(biāo)至少包括產(chǎn)品降解、組織再生等情況。
6.6動物試驗(yàn)方案和報告要求
動物試驗(yàn)研究方案和研究報告應(yīng)至少包括但不局限于以下內(nèi)容：
試驗(yàn)?zāi)康?/span>
試驗(yàn)器材或試劑
動物的種類、數(shù)量及該種類作為受試動物的合理性解釋及
選擇依據(jù)
試驗(yàn)方法（樣品準(zhǔn)備、動物準(zhǔn)備、手術(shù)方法）、術(shù)前準(zhǔn)備、
目標(biāo)器官/組織、手術(shù)切口控制等
對照組類型和/或?qū)φ债a(chǎn)品的類型和選取依據(jù)
動物模型的種類及建立方法
產(chǎn)品的使用步驟及時間
觀察方法、觀察指標(biāo)與觀察周期
數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析過程
結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)與試驗(yàn)結(jié)論
有效性標(biāo)準(zhǔn)
安全性指標(biāo)
試驗(yàn)研究的結(jié)論
7.滅菌工藝研究
明確用于保證產(chǎn)品無菌的質(zhì)量保證體系，明確滅菌工藝（方法和參數(shù)）和無菌保證水平（SAL）。采取終端滅菌的I型膠原軟骨修復(fù)產(chǎn)品的無菌保證水平（SAL）需達(dá)到10-6。
該類產(chǎn)品一般為滅菌包裝交付，需開展滅菌工藝驗(yàn)證。對于經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌的產(chǎn)品，需開展滅菌結(jié)果確認(rèn)和過程控制，具體可參照GB 18279系列標(biāo)準(zhǔn)。
對于經(jīng)輻照滅菌的產(chǎn)品，需明確射線種類、輻照劑量并驗(yàn)證。需開展驗(yàn)證評價滅菌方法（包括不同輻照源）對于產(chǎn)品性能的影響，具體可參照GB 18280系列標(biāo)準(zhǔn)。
滅菌過程可對水凝膠或其他添加物質(zhì)(例如賦形劑等)的性質(zhì)產(chǎn)生影響。這些都宜在分析表征數(shù)據(jù)時加以考慮。在某種類別的水凝膠不適用常規(guī)滅菌方法時，宜在無菌條件下生產(chǎn)水凝膠,并考慮增加控制措施，例如參考藥品《除菌過濾技術(shù)及應(yīng)用指南》進(jìn)行除菌過濾，開展相應(yīng)的驗(yàn)證。需注意，經(jīng)過濾的膠原溶液的黏度可能改變分子量，宜在除菌過濾驗(yàn)證中加以評估。
8.穩(wěn)定性研究
申報產(chǎn)品需參照《無源植入性醫(yī)療器械穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則》開展產(chǎn)品穩(wěn)定性研究。在此基礎(chǔ)上，宜將水凝膠產(chǎn)品儲存在溫度和pH值可調(diào)控的環(huán)境中。
貨架有效期驗(yàn)證中需要明確滅菌產(chǎn)品的包裝材料、包裝工藝及方法、加速老化試驗(yàn)或/和實(shí)時老化試驗(yàn)。加速老化試驗(yàn)中需明確試驗(yàn)溫度、濕度、加速老化時間的確定依據(jù)，需明確阿列紐斯方程中各項(xiàng)參數(shù)對凝膠組分的適用性，否則宜開展產(chǎn)品實(shí)時老化試驗(yàn)。若開發(fā)人使用其他醫(yī)療器械產(chǎn)品的貨架有效期驗(yàn)證，則需證明其與本次申報產(chǎn)品在原材料、滅菌方法、滅菌劑量、包裝材料、包裝工藝、包裝方式及其它影響阻菌性能的因素方面具有等同性。不同包裝、不同滅菌方式的產(chǎn)品需分別開展驗(yàn)證。
貨架有效期的確定需建立在科學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，如穩(wěn)定性試驗(yàn)，其目的是考察產(chǎn)品在溫度、濕度、光線、重力的影響下隨時間變化的規(guī)律，為產(chǎn)品的生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件提供科學(xué)依據(jù)，同時通過試驗(yàn)建立產(chǎn)品的有效期。因此，開發(fā)人在申報產(chǎn)品注冊時，需對包裝完整性和包裝強(qiáng)度進(jìn)行評價試驗(yàn)，如染色液穿透試驗(yàn)、氣泡試驗(yàn)、材料密封強(qiáng)度試驗(yàn)、模擬運(yùn)輸?shù)?，同時需結(jié)合產(chǎn)品性能指標(biāo)要求，開展產(chǎn)品有效期的驗(yàn)證，明確內(nèi)包裝材料信息。
開發(fā)人需開展運(yùn)輸穩(wěn)定性驗(yàn)證，可依據(jù)有關(guān)適用的國內(nèi)、國際標(biāo)準(zhǔn)和驗(yàn)證方案進(jìn)行，如：產(chǎn)品包裝的跌落試驗(yàn)、振蕩試驗(yàn)等，證明在規(guī)定的運(yùn)輸條件下，運(yùn)輸過程中環(huán)境條件（包括氣壓、溫度、濕度等變化）不會對產(chǎn)品的特性和性能造成不利影響。
來源：嘉峪檢測網(wǎng)
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