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微生物菌種傳代與保存方法

嘉峪檢測(cè)網(wǎng)        2025-06-05 19:05

菌種代號(hào)的意義

菌種代號(hào)是微生物分類(lèi)、保藏及研究中使用的唯一標(biāo)識(shí),包含以下信息:

1、保藏機(jī)構(gòu)縮寫(xiě)

ATCC:美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)。

CMCC:中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心

CGMCC:中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心。

DSMZ:德國(guó)微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen)。

NCTC:英國(guó)國(guó)家典型培養(yǎng)物保藏中心。

例:Escherichia coli ATCC 25922。

2、分類(lèi)學(xué)信息

包含屬名(Genus)、種名(Species),如Bacillus subtilis(枯草芽孢桿菌)。

3、菌株特性

可能標(biāo)注特殊功能(如產(chǎn)酶、抗性)、致病性(如BSL-2)或來(lái)源(分離環(huán)境、宿主)。

4、內(nèi)部編號(hào)

保藏機(jī)構(gòu)分配的序列號(hào)(如CGMCC 1.2345),或?qū)嶒?yàn)室自定義編號(hào)(如Lab-001)。

 

菌種傳代方法

菌種傳代是指將菌種從一個(gè)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到另一個(gè)新鮮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程,以保持菌種的活性和純度。常見(jiàn)方法如下:

1‌、斜面?zhèn)鞔?zwnj;

‌適用菌種‌:適用于細(xì)菌、酵母菌等生長(zhǎng)較快的微生物。

‌操作步驟‌:在無(wú)菌條件下,用接種環(huán)從原菌種斜面上挑取少量菌苔,在新的斜面培養(yǎng)基上從底部向上劃“Z”字形或“S”形曲線,使菌苔均勻分布在斜面上。接種后,將斜面培養(yǎng)基置于適宜溫度下培養(yǎng)。

‌注意事項(xiàng)‌:接種環(huán)使用前需在火焰上充分灼燒滅菌,待冷卻后再挑取菌苔;劃線時(shí)要注意力度和角度,避免劃破培養(yǎng)基表面。

2‌、液體傳代法‌

‌適用菌種‌:適用于細(xì)菌、放線菌等在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好的微生物。

‌操作步驟‌:用無(wú)菌移液管吸取一定量的原菌種培養(yǎng)液,加入到新鮮的液體培養(yǎng)基中,搖勻后置于適宜溫度下振蕩培養(yǎng)或靜止培養(yǎng)。

‌注意事項(xiàng)‌:移液管使用前要進(jìn)行滅菌處理;加入菌種培養(yǎng)液的量要適當(dāng),一般為液體培養(yǎng)基體積的5%-10%。

‌3、穿刺傳代法‌

‌適用菌種‌:常用于細(xì)菌、酵母菌等,尤其適用于保存一些厭氧菌或半?yún)捬蹙?/span>

‌操作步驟‌:用接種針從原菌種斜面上挑取少量菌苔,垂直刺入半固體培養(yǎng)基的中心,直至接近管底,然后沿原穿刺線將接種針退出。接種后,將培養(yǎng)管置于適宜溫度下培養(yǎng)。

‌注意事項(xiàng)‌:接種針要尖銳、無(wú)菌;穿刺時(shí)要保持垂直,避免彎曲或傾斜。

 

菌種保存方法

菌種保存的目的是使菌種在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持其生物學(xué)特性和遺傳穩(wěn)定性,以便隨時(shí)取用。常見(jiàn)的保存方法有以下幾種:

1‌、斜面低溫保存法‌

‌原理‌:將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上,待菌種生長(zhǎng)良好后,置于4℃冰箱中保存。低溫可以降低菌種的代謝活動(dòng),延長(zhǎng)其存活時(shí)間。

‌適用菌種‌:適用于大多數(shù)細(xì)菌、酵母菌和霉菌。

‌保存期限‌:一般可保存數(shù)周至數(shù)月,需定期傳代。

‌操作要點(diǎn)‌:斜面培養(yǎng)基的制備要符合菌種生長(zhǎng)要求;保存過(guò)程中要注意防止斜面培養(yǎng)基干裂和污染。

‌2、甘油管保存法‌

‌原理‌:將菌種與無(wú)菌甘油溶液混合,使甘油終濃度達(dá)到15%-30%,然后置于-20℃或-80℃冰箱中保存。甘油可以降低冰點(diǎn),減少冰晶對(duì)菌種細(xì)胞的損傷。

‌適用菌種‌:適用于各種細(xì)菌、酵母菌和部分放線菌。

‌保存期限‌:在-20℃下可保存1-2年,在-80℃下可保存數(shù)年。

‌操作要點(diǎn)‌:甘油溶液要無(wú)菌;混合時(shí)要充分振蕩,使菌種均勻分布在甘油溶液中;保存管要密封良好,防止水分蒸發(fā)。

‌3、冷凍干燥保存法‌

‌原理‌:將菌種懸浮在含有保護(hù)劑的溶液中,快速冷凍后在真空條件下使水分升華,從而得到干燥的菌種制品。冷凍干燥可以最大程度地減少菌種細(xì)胞內(nèi)的水分,降低細(xì)胞的代謝活動(dòng),延長(zhǎng)菌種的保存時(shí)間。

‌適用菌種‌:適用于大多數(shù)微生物,尤其是對(duì)冷凍和干燥較為敏感的菌種。

‌保存期限‌:可保存數(shù)年至數(shù)十年。

‌操作要點(diǎn)‌:保護(hù)劑的選擇和濃度要適宜;冷凍干燥過(guò)程要嚴(yán)格控制溫度和真空度;保存后的菌種制品要在低溫、干燥、避光的條件下保存。

‌4、液氮超低溫保存法‌

‌原理‌:將菌種懸浮在含有冷凍保護(hù)劑的溶液中,直接投入液氮(-196℃)中保存。超低溫可以使菌種的代謝活動(dòng)幾乎完全停止,從而長(zhǎng)期保持菌種的活性。

‌適用菌種‌:適用于各種微生物,尤其是難以保存的菌種。

‌保存期限‌:理論上可無(wú)限期保存。

‌操作要點(diǎn)‌:冷凍保護(hù)劑的選擇和濃度要合適;投入液氮時(shí)要迅速,避免菌種在液氮表面停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而受到損傷;取用菌種時(shí)要使用專(zhuān)門(mén)的工具,防止液氮對(duì)操作人員造成凍傷。

 

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