中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

細(xì)菌培養(yǎng)被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)與分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)，例如基因克隆與表達(dá)、DNA與RNA的提取、酶的生產(chǎn)、細(xì)菌與細(xì)胞共培養(yǎng)等。下面以基因克隆表達(dá)中大腸桿菌（生長(zhǎng)周期短）的培養(yǎng)、鳥(niǎo)分枝桿菌（生長(zhǎng)周期長(zhǎng)）的培養(yǎng)為例分享主要的實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)：

2. 實(shí)驗(yàn)步驟

2.1 準(zhǔn)備工作

（1）培養(yǎng)基準(zhǔn)備：LB培養(yǎng)基（大腸桿菌）、Middle brook培養(yǎng)基（鳥(niǎo)分枝桿菌）

（2）試劑準(zhǔn)備：蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、瓊脂、購(gòu)買(mǎi)Middle brook 7H10固體培養(yǎng)基和Middle Brook 7H9肉湯培養(yǎng)基、蒸餾水、抗生素（氨芐青霉素、羧芐青霉素、兩性霉素B）、購(gòu)買(mǎi)增菌液。

（3）儀器、耗材準(zhǔn)備：細(xì)菌培養(yǎng)皿、50mL無(wú)菌離心管、試管、錐形瓶、接種環(huán)、酒精燈、打火機(jī)、高壓蒸汽滅菌鍋、37℃恒溫培養(yǎng)箱、生物安全柜、超凈工作臺(tái)、恒溫?fù)u床。

2.2 實(shí)驗(yàn)步驟

（1）滅菌：按照下面成分（見(jiàn)表1）配置培養(yǎng)基，使用高壓蒸汽滅菌法121℃、30min進(jìn)行滅菌處理。接著將準(zhǔn)備的細(xì)菌培養(yǎng)皿、50mL無(wú)菌離心管、錐形瓶、接種環(huán)、酒精燈等物品放置在超凈工作臺(tái)打開(kāi)紫外線(xiàn)照射至少30min。

（2）培養(yǎng)基配置比例：培養(yǎng)基的配置需要按照質(zhì)量比例要求例如LB培養(yǎng)基需按照質(zhì)量（g）比（2:1:2）分別稱(chēng)取蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉，購(gòu)買(mǎi)的分枝桿菌培養(yǎng)基按照說(shuō)明書(shū)根據(jù)使用的量進(jìn)行配置。固體培養(yǎng)基的配置加入瓊脂粉一般按照15.0 g/L的比例加入。

（3）倒平板：根據(jù)細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況設(shè)置平板的厚度，培養(yǎng)基的量通常的大腸桿菌10mL/平板（培養(yǎng)基層厚度約3-4mm），而分枝桿菌需要20mL/平板（培養(yǎng)基層厚度約5-6mm）。

（4）活化、接種：菌種的來(lái)源可以是涂布的平板也可以是保存在-80℃的菌種。關(guān)閉紫外線(xiàn)，打開(kāi)超凈工作臺(tái)通風(fēng)，點(diǎn)燃酒精燈，將接種環(huán)放置在酒精燈上灼燒至紅色，放置在火焰周?chē)鋮s。挑取適量菌落或者菌液進(jìn)行劃線(xiàn)，使得菌液以多至少的量（圖1）分布在培養(yǎng)基表面。

（5）培養(yǎng)：可將處理好的培養(yǎng)基用封口膜封閉好，正置37℃恒溫培養(yǎng)箱30min左右，然后倒置培養(yǎng)。

（6）觀察：按照細(xì)菌的生長(zhǎng)周期觀察期生長(zhǎng)狀況，大腸桿菌一般需要12~16h，而分枝桿菌生長(zhǎng)緩慢需要1~4周左右。

（7）液體培養(yǎng)：一般在活化、接種后，劃線(xiàn)的平板長(zhǎng)出清晰的單克隆菌落，此時(shí)我們可以挑取單菌落進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。將液體培養(yǎng)基按15~20mL的量倒入無(wú)菌離心管或者10mL左右倒入試管，在灼燒接種環(huán)滅菌冷卻后將菌落挑取伸入試管輕輕晃動(dòng)，使菌落落入液體培養(yǎng)基，封口膜封閉試管或者離心管；最后放置恒溫?fù)u床進(jìn)行培養(yǎng)。

3. 注意事項(xiàng)

（1）細(xì)菌培養(yǎng)要求所涉及的物品、操作均要求無(wú)菌，否則會(huì)存在其他雜菌的污染。

（2）滅菌之前注意按照菌的生長(zhǎng)情況調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值例如LB培養(yǎng)基要求PH值在7.0~7.4之間，防止偏酸或者偏堿的環(huán)境影響菌的生長(zhǎng)。

（3）培養(yǎng)基配置時(shí)，使用蒸餾水充分溶解；滅菌完成后，固體培養(yǎng)基可以暫放烘干箱后倒平板。

（4）抗生素、增菌液一定是等待培養(yǎng)基稍稍冷卻至手可以正常觸碰錐形時(shí)加入，否則抗生素會(huì)失效。

（5）所使用的的物品基本上放置在酒精燈的周?chē)?，例如倒平板時(shí)，灼燒瓶口后一手操作平板一手操作錐形瓶倒平板（圖2）。

（6）為了防止平板產(chǎn)生水汽，可以將平板半敞開(kāi)在酒精燈周?chē)?，也可以全部疊放在酒精燈的旁邊（圖3）。

（7）分枝桿菌生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，需要按照說(shuō)明書(shū)的比例加入增菌液、抗生素以及倒厚平板，保證長(zhǎng)時(shí)間的培養(yǎng)有足夠營(yíng)養(yǎng)成分和良好的生長(zhǎng)環(huán)境。

（8）鳥(niǎo)分枝桿菌屬于非結(jié)核分枝桿菌，存在一定的感染性，使用前需要用60℃水浴滅活30min，同時(shí)在生物安全柜中進(jìn)行操作，防止感染。

（9）在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，需佩戴好手套、口罩、穿好實(shí)驗(yàn)服等。

（10）平板處理，有一定感染性的平板需要集中滅菌處理后再丟棄。

（11）注意標(biāo)記平板，一般標(biāo)記好時(shí)間、菌種名稱(chēng)、培養(yǎng)條件等。