中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

內(nèi)容提要：白蛋白作為常見(jiàn)的檢測(cè)項(xiàng)目，用于檢測(cè)人體樣本中的白蛋白含量，臨床上用于評(píng)價(jià)肝臟功能及營(yíng)養(yǎng)評(píng)估。文章從體外診斷試劑審評(píng)的角度出發(fā)，參照《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》、YY/T 1228-2014《白蛋白測(cè)定試劑（盒）》、指導(dǎo)原則等標(biāo)準(zhǔn)對(duì)此類(lèi)產(chǎn)品進(jìn)行注冊(cè)要點(diǎn)討論分析，以期為注冊(cè)申請(qǐng)人在該類(lèi)產(chǎn)品申報(bào)時(shí)提供技術(shù)參考。

關(guān) 鍵 詞：白蛋白測(cè)定試劑 體外診斷試劑 審評(píng)要點(diǎn)

 

白蛋白亦稱(chēng)清蛋白，為含580 個(gè)氨基酸殘基的單鏈單純蛋白質(zhì)，分子量66.3kD[1]。白蛋白由肝細(xì)胞合成分泌，是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，占血漿總蛋白質(zhì)的50%~60%，能夠維持膠體滲透壓和血管內(nèi)皮穩(wěn)定[2]。白蛋白檢測(cè)對(duì)人體作用較大，臨床上用于評(píng)價(jià)肝臟功能及營(yíng)養(yǎng)評(píng)估。通過(guò)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)，截至2024 年，國(guó)內(nèi)白蛋白測(cè)定/ 檢測(cè)試劑盒（溴甲酚綠/ 紫法）生產(chǎn)企業(yè)共147 家（173 個(gè)產(chǎn)品），其中溴甲酚綠法144 個(gè)、溴甲酚紫法8 個(gè)、終點(diǎn)法6 個(gè)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法1 個(gè)、免疫透射比濁法1 個(gè)，主要分布在浙江、北京、上海、江蘇、廣東、天津等地[3]。由此可見(jiàn)，白蛋白測(cè)定試劑使用溴甲酚綠/ 溴甲酚紫法的產(chǎn)品較多。溴甲酚綠/ 溴甲酚紫法為染料結(jié)合法，利用白蛋白可以與溴甲酚綠/ 溴甲酚紫等陰離子染料快速結(jié)合顯色的特性，直接測(cè)定血清中的白蛋白[1]。

目前，申報(bào)白蛋白測(cè)定/ 檢測(cè)試劑盒（溴甲酚綠/溴甲酚紫法）應(yīng)參照《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》[4]、《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》[5]、YY/T 1228-2014白蛋白測(cè)定試劑（盒）[6]、《白蛋白測(cè)定試劑（盒）注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》[7]（2024年修訂版）等相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、指導(dǎo)原則提交申報(bào)資料。下文筆者根據(jù)上述法規(guī)要求，結(jié)合日常技術(shù)審評(píng)工作，概述非臨床部分的重點(diǎn)研究，希望能為后續(xù)企業(yè)注冊(cè)申報(bào)及技術(shù)審評(píng)工作提供幫助。

 

1.產(chǎn)品分類(lèi)及預(yù)期用途

根據(jù)《體外診斷試劑分類(lèi)目錄》的要求，白蛋白測(cè)定試劑一級(jí)序號(hào)為08，一級(jí)產(chǎn)品類(lèi)別為用于蛋白質(zhì)檢測(cè)的試劑，二級(jí)序號(hào)為08065，管理類(lèi)別為Ⅱ類(lèi)，分類(lèi)編碼為6840。

預(yù)期用途為用于檢測(cè)人體樣本中的白蛋白含量。臨床上用于評(píng)價(jià)肝臟功能及營(yíng)養(yǎng)評(píng)估。

2.產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理資料

在進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析時(shí)應(yīng)該考慮產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，應(yīng)符合GB/T 42062《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》[8] 的要求，同時(shí)可參照YY/T 0316-2016《醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》[9] 中的附錄C、附錄H進(jìn)行更加細(xì)化的風(fēng)險(xiǎn)分析。

可能的風(fēng)險(xiǎn)及其控制清單詳見(jiàn)表1，也可根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)自行判定其他可能的風(fēng)險(xiǎn)[7]。

 

表1. 可能的風(fēng)險(xiǎn)及其控制清單

 

 

3.主要性能指標(biāo)

在研發(fā)人員確定產(chǎn)品主要性能指標(biāo)時(shí)，應(yīng)先查詢(xún)適用本產(chǎn)品的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及指導(dǎo)原則并參照?qǐng)?zhí)行。

白蛋白測(cè)定/ 檢測(cè)試劑盒（溴甲酚綠/ 紫法）性能指標(biāo)應(yīng)包含試劑的外觀、裝量、試劑空白吸光度、分析靈敏度、準(zhǔn)確度/ 正確度、線(xiàn)性區(qū)間、精密度等。如試劑盒內(nèi)含有校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，校準(zhǔn)品的性狀、裝量（液體適用）、水分含量（干粉適用）、賦值結(jié)果及其不確定度的表示方式、正確度、均勻性等，質(zhì)控品的性狀、裝量、可接受區(qū)間/ 值、瓶間均勻性等[7]。

在《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》中溴甲酚綠法測(cè)定白蛋白的最低檢測(cè)限為2g/L，線(xiàn)性范圍為2~60g/L，批內(nèi)變異系數(shù)≤4.0%，相對(duì)偏差<±10%[1]。

 

4.分析性能評(píng)估

4.1 樣本穩(wěn)定性

在實(shí)際應(yīng)用中，需全面掌握樣本的使用流程，充分評(píng)估其在采集、處理、運(yùn)輸及保存等環(huán)節(jié)的具體條件。針對(duì)不同類(lèi)型的樣本，應(yīng)分別展開(kāi)針對(duì)性分析和評(píng)估。如適用于血漿樣本，還應(yīng)考慮不同抗凝劑對(duì)樣本穩(wěn)定性的影響。

4.2 適用的樣本類(lèi)型

目前該檢測(cè)試劑的適用樣本類(lèi)型為血清及血漿樣本。有必要開(kāi)展針對(duì)同源樣本檢測(cè)一致性的對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究，以驗(yàn)證其檢測(cè)結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。在研究時(shí)，樣本應(yīng)能夠覆蓋檢測(cè)范圍且包含醫(yī)學(xué)決定水平附近以及低值樣本，白蛋白醫(yī)學(xué)決定水平濃度為35g/L[10]。

4.3 校準(zhǔn)品的量值溯源、質(zhì)控品的賦值

如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和/ 或質(zhì)控品，可參考GB/T 21415《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測(cè)量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》[11]、YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》[12]、YY/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》[13]、《質(zhì)控品注冊(cè)審查指導(dǎo)原則——質(zhì)控品賦值研究》等文件進(jìn)行研究并在進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)時(shí)提交詳細(xì)的研究資料。

4.4 正確度

評(píng)估正確度可通過(guò)三種方式實(shí)現(xiàn)：一是利用參考物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，二是通過(guò)方法學(xué)比對(duì)分析，三是開(kāi)展回收試驗(yàn)。在進(jìn)行產(chǎn)品研究時(shí)選擇合理的方法進(jìn)行正確度的研究即可。

4.5 精密度

精密度包括重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度和批間精密度[5]。在研究時(shí)應(yīng)涉及合理的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)精密度進(jìn)行系統(tǒng)、全面評(píng)價(jià)。可參照YY/T 1789.1-2021《體外診斷檢驗(yàn)系統(tǒng) 性能評(píng)價(jià)方法 第1 部分：精密度》[14] 進(jìn)行研究。

在重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度試驗(yàn)中，建議采用20×2×2的模型。實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)如下：在單一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，由固定操作人員采用相同檢測(cè)設(shè)備和同批次試劑，在20d 周期內(nèi)（非連續(xù)）對(duì)同一樣本進(jìn)行重復(fù)測(cè)定。每日完成兩個(gè)獨(dú)立分析批次，批次間設(shè)置適當(dāng)間隔，每批次平行檢測(cè)兩次。

實(shí)驗(yàn)室間精密度推薦采用3×5×5實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，結(jié)合方差分析方法統(tǒng)計(jì)分析。具體方案為：選擇3 家實(shí)驗(yàn)室，采用同型號(hào)檢測(cè)設(shè)備或同系列儀器，在5 個(gè)非連續(xù)工作日內(nèi)完成測(cè)試。每日?qǐng)?zhí)行單個(gè)分析批次，每批次進(jìn)行5 次重復(fù)測(cè)定。

精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的樣本選擇需遵循以下原則：①樣本來(lái)源：優(yōu)先采用臨床真實(shí)樣本或其混合樣本。②濃度范圍：應(yīng)覆蓋檢測(cè)區(qū)間的高、中、低值域，建議設(shè)置3~5 個(gè)水平。③關(guān)鍵濃度：需包含臨床醫(yī)學(xué)決定水平及參考范圍臨界值附近的樣本。④樣本處理：因?qū)嶒?yàn)周期較長(zhǎng)且可能涉及多地點(diǎn)檢測(cè)，必須確保樣本穩(wěn)定性及一致性，推薦采用分裝保存方式以保證檢測(cè)一致性。

4.6 空白吸光度和分析靈敏度

空白吸光度和分析靈敏度的研究可參照GB/T 26124《臨床化學(xué)診斷試劑盒》[15] 及YY/T 1228《白蛋白測(cè)定試劑（盒）》[6] 推薦方法進(jìn)行研究。

4.7 空白限、檢出限及定量限

空白限、檢測(cè)限、定量限均需要進(jìn)行建立及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，一般空白限總是低于檢測(cè)限，而檢測(cè)限則低于或等于定量限。該測(cè)試可能受到多種因素的干擾，例如試劑批次、校準(zhǔn)品批次、校準(zhǔn)周期、操作人員、儀器型號(hào)以及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境等。因此，在開(kāi)展相關(guān)性能指標(biāo)研究前，可通過(guò)文獻(xiàn)查閱、同類(lèi)產(chǎn)品指標(biāo)調(diào)研或預(yù)實(shí)驗(yàn)等方式，預(yù)先識(shí)別潛在的影響因素，并評(píng)估其可能對(duì)測(cè)試結(jié)果產(chǎn)生的影響。通常情況下，無(wú)需對(duì)每個(gè)影響因素進(jìn)行單獨(dú)研究。

檢出限的建立可以參照此方法進(jìn)行，可以滿(mǎn)足最小設(shè)計(jì)要求：用1 個(gè)儀器系統(tǒng)、2 個(gè)試劑批號(hào)、3 個(gè)測(cè)試日、4 個(gè)空白樣本、4 個(gè)低濃度水平樣本（濃度范圍設(shè)定為1~5空白限），每個(gè)樣本需重復(fù)測(cè)試兩次[16]。

在建立定量限時(shí)，需首先設(shè)定總誤差的目標(biāo)值，并明確預(yù)期的定量限目標(biāo)濃度。通過(guò)使用不同生產(chǎn)批次的試劑盒，在單臺(tái)或多臺(tái)同型號(hào)檢測(cè)儀器上，經(jīng)過(guò)多天重復(fù)測(cè)試樣本，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中完整記錄各次檢測(cè)數(shù)據(jù)，并分別計(jì)算每個(gè)試劑批次的總誤差值。確保每批次能夠獲得36 個(gè)低濃度水平樣本的測(cè)試結(jié)果。定量限的建立可參考以下方法：采用單個(gè)儀器系統(tǒng)、2 個(gè)不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑、3 個(gè)測(cè)試日，以及4種經(jīng)認(rèn)證的低濃度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為測(cè)試樣本，每個(gè)樣本在相同條件下進(jìn)行三次重復(fù)測(cè)定，以滿(mǎn)足最低設(shè)計(jì)要求。

在驗(yàn)證檢出限之前，首先需要對(duì)空白限值的準(zhǔn)確性進(jìn)行驗(yàn)證。通過(guò)分析空白樣本的檢測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)其中測(cè)量值不超過(guò)聲明空白限的數(shù)據(jù)所占百分比，并將該比例與表2 所列的下限值進(jìn)行比較。當(dāng)實(shí)際計(jì)算比例達(dá)到或超過(guò)表2規(guī)定的閾值時(shí)，即可判定空白限驗(yàn)證合格，反之則失敗。

計(jì)算檢出限濃度樣本測(cè)試結(jié)果中大于或等于空白限聲明的結(jié)果占總數(shù)的百分比。與表2中的下限值進(jìn)行比較。如果百分比大于或等于表2 的值，則認(rèn)為檢出限驗(yàn)證成功。如果百分比小于表2 的值，則驗(yàn)證失敗。

 

表 2. 檢測(cè)能力聲明結(jié)果的95%置信下限表[16]

 

 

對(duì)檢出限濃度樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算測(cè)量值不低于聲明空白限的數(shù)據(jù)所占比例，并將該比例與表2 中的下限值進(jìn)行對(duì)比。若統(tǒng)計(jì)所得比例達(dá)到或超過(guò)表2規(guī)定的閾值標(biāo)準(zhǔn)，則判定檢測(cè)限驗(yàn)證通過(guò)；反之，若比例低于表2要求值，則表明驗(yàn)證未達(dá)到預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)。

定量限的驗(yàn)證可以使用3×5×3的驗(yàn)證方式，即1 批次試劑、使用1 個(gè)儀器系統(tǒng)，在3 天進(jìn)行5 個(gè)定量限濃度樣本的測(cè)定，每個(gè)樣本測(cè)定重復(fù)3次，得到45個(gè)測(cè)量結(jié)果并計(jì)算目標(biāo)值的允許誤差范圍。同時(shí)計(jì)算滿(mǎn)足定量限生成可接受的目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)與所有樣本測(cè)試結(jié)果的百分比，也與表2 中的下限值進(jìn)行比較，比表2 中的值大或等于表一中的值則驗(yàn)證成功，反之則失敗。

4.8 分析特異性

分析特異性研究包括要充分考慮待測(cè)樣本及試劑在使用過(guò)程中可能存在的干擾因素和交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。檢測(cè)受到干擾時(shí)會(huì)使假性結(jié)果升高，從而導(dǎo)致檢測(cè)失敗，不能夠準(zhǔn)確地為臨床提供真實(shí)可靠的數(shù)據(jù)結(jié)果。從而在研究的過(guò)程中需結(jié)合產(chǎn)品特性，篩選可能的干擾物質(zhì)并逐一進(jìn)行驗(yàn)證分析。如溶血、膽紅素、脂類(lèi)等是常見(jiàn)的內(nèi)源性干擾物質(zhì)，一般血紅蛋白<10g/L、膽紅素<1026μmol/L對(duì)測(cè)定不會(huì)產(chǎn)生明顯干擾[1]。而對(duì)于白蛋白產(chǎn)品外源性干擾也不可忽視，如常見(jiàn)的治療藥物及其代謝物（包括青霉素、水楊酸類(lèi)藥物等）。在研究的過(guò)程中還應(yīng)對(duì)已報(bào)道存在的干擾物質(zhì)進(jìn)行研究。

因本產(chǎn)品為溴甲酚綠/ 紫法，需關(guān)注含以下物質(zhì)的標(biāo)本對(duì)其產(chǎn)生的交叉反應(yīng)，應(yīng)對(duì)血清中含有多種蛋白成分a1- 球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、觸珠蛋白等進(jìn)行比對(duì)研究，驗(yàn)證其對(duì)試劑產(chǎn)生的影響[1]。

同時(shí)還需要考慮對(duì)于使用樣本類(lèi)型為血漿樣本的，要對(duì)其適用的抗凝劑進(jìn)行研究，如：肝素鋰、乙二胺四乙酸二甲、枸櫞酸鈉等[17]。

4.9 測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間

測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間中包含以下幾個(gè)方面的研究，分別是線(xiàn)性區(qū)間及測(cè)量區(qū)間、擴(kuò)展測(cè)量區(qū)間和可報(bào)告區(qū)間。

其中對(duì)于建立和驗(yàn)證線(xiàn)性區(qū)間是必要的。在建立過(guò)程中，采用多點(diǎn)稀釋法建立校準(zhǔn)曲線(xiàn)，首先配制9 個(gè)梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)品（不含空白樣本）且要寬于預(yù)期用途，并對(duì)每個(gè)樣本重復(fù)進(jìn)行多次檢測(cè)。在驗(yàn)證的階段中，至少選取5 個(gè)覆蓋全量程的濃度點(diǎn)進(jìn)行兩次重復(fù)檢測(cè)。此外，測(cè)量區(qū)間的下限為定量限，確保線(xiàn)性范圍完全包含預(yù)期測(cè)量區(qū)間。

為確定試劑的擴(kuò)展測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間，需對(duì)超出初始線(xiàn)性范圍的高濃度樣本進(jìn)行稀釋回收實(shí)驗(yàn)，考察不同稀釋倍數(shù)下的檢測(cè)準(zhǔn)確性。

需評(píng)估不同稀釋液對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，以確定最佳稀釋方案?；趯?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)確定試劑的擴(kuò)展測(cè)量區(qū)間和可報(bào)告區(qū)間，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

4.10 基質(zhì)效應(yīng)

若校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的基質(zhì)與常規(guī)臨床樣本存在差異，需對(duì)其基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行深入分析。

 

5.穩(wěn)定性研究

對(duì)于此產(chǎn)品，應(yīng)分別對(duì)實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

實(shí)時(shí)穩(wěn)定性：要確保產(chǎn)品在儲(chǔ)存期間的性能穩(wěn)定，必須詳細(xì)規(guī)定儲(chǔ)存環(huán)境的具體參數(shù)，包括溫度、濕度和光照等。研究應(yīng)涵蓋至少三個(gè)批次的產(chǎn)品，并在實(shí)際儲(chǔ)存條件下進(jìn)行長(zhǎng)期觀察，直至產(chǎn)品達(dá)到其聲稱(chēng)的有效期。

使用穩(wěn)定性：對(duì)于產(chǎn)品在使用階段的穩(wěn)定性，需要開(kāi)展系列研究。應(yīng)考慮包含產(chǎn)品在開(kāi)封后的穩(wěn)定性、復(fù)溶過(guò)程的穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性、校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性（適用于涉及校準(zhǔn)品的產(chǎn)品）以及凍融次數(shù)的研究。

運(yùn)輸穩(wěn)定性：為確保體外診斷產(chǎn)品在運(yùn)輸環(huán)節(jié)的質(zhì)量穩(wěn)定性，需建立完整的運(yùn)輸驗(yàn)證方案。研究產(chǎn)品在運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性，必須明確產(chǎn)品采用的保護(hù)性包裝及實(shí)際運(yùn)輸過(guò)程中可能遭遇的極端環(huán)境條件。在完成運(yùn)輸后，需對(duì)產(chǎn)品關(guān)鍵性能指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)檢測(cè)，通過(guò)對(duì)比運(yùn)輸前后檢測(cè)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，評(píng)估產(chǎn)品在運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性表現(xiàn)。

 

6.參考區(qū)間

成人血清白蛋白濃度（溴甲酚綠法）參考區(qū)間為40~55g/L。摩爾濃度按濃度（μmol/L）=濃度（g/L）×15.2來(lái)?yè)Q算[18]。

在參考區(qū)間的建立時(shí)需要關(guān)注參考樣本組的選擇，需首先確定檢測(cè)項(xiàng)目所適用的人群。參考個(gè)體要盡可能貼近檢測(cè)項(xiàng)目的臨床患者分布組成，針對(duì)適用人群納入樣本，考慮不同年齡、性別等因素且試驗(yàn)樣本例數(shù)要符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

 

7.小結(jié)

本文基于注冊(cè)申報(bào)要求、現(xiàn)行行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求及指導(dǎo)原則要求總結(jié)分析了白蛋白測(cè)定/ 檢測(cè)試劑盒（溴甲酚綠/ 紫法）在非臨床資料中的相關(guān)要求及重點(diǎn)性能研究方法。對(duì)產(chǎn)品分類(lèi)及預(yù)期用途、綜述資料、產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理資料、主要性能指標(biāo)、分析性能評(píng)估、穩(wěn)定性研究、參考區(qū)間等方面一一進(jìn)行概述，希望能為注冊(cè)申報(bào)此項(xiàng)產(chǎn)品的申請(qǐng)人及技術(shù)審評(píng)人員提供一些參考和幫助。