中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

GalNac(N-乙酰化的半乳糖胺)偶聯(lián)修飾是核酸藥物遞送系統(tǒng)中最常用的遞送載體，其中GalNAc遞送系統(tǒng)通常是由三觸GalNAc靶頭（如圖1）或著單觸GalNAc靶頭、和連接臂或連接子（Linker）還有就是siRNA分子所構(gòu)成的綴合物。這種結(jié)構(gòu)的分子依賴肝細(xì)胞表面的唾液酸糖蛋白受體和GalNAc靶頭配體定向結(jié)合提升了siRNA的遞送效率，安全性明顯提升，使得GalNAc-siRNA偶聯(lián)修飾技術(shù)在治療肝臟相關(guān)疾病小核酸藥物中廣泛應(yīng)用

圖1-三觸GalNAc載體

GalNac(N-乙?；陌肴樘前?的應(yīng)用以及發(fā)展前景

GalNAc修飾的藥物在當(dāng)前主要有GalNAc-反義核酸(ASO) 與GalNAc-小干擾核酸（siRNA），由于治療上有效的反義核酸（ASO）已經(jīng)是核苷單體分子經(jīng)過(guò)大量結(jié)構(gòu)修飾的在人體內(nèi)不易被核酸內(nèi)切酶等物質(zhì)降解失效，因此遞送載體對(duì)于反義核酸（ASO）并不是必須的。臨床上對(duì)于小干擾核酸（siRNA）遞送存在若干障礙，構(gòu)成其序列的核苷單體普遍屬于2'-甲氧基修飾2'-氟修飾，包括血管內(nèi)降解、組織外顯性和特異性、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和細(xì)胞外基質(zhì)等因素導(dǎo)致體內(nèi)穩(wěn)定性較差，未修飾的核酸在循環(huán)中的半衰期較短，因?yàn)槿菀籽軆?nèi)降解和被腎臟快速清除，載體遞送技術(shù)可以完美解決這些問(wèn)題，表1是近年來(lái)利用GalNac遞送技術(shù)上市的小核酸藥物。

表1. GalNac技術(shù)上市的藥物

GalNAc（N－乙酰半乳糖胺修飾偶聯(lián)技術(shù)合成綴合物）在肝臟靶向領(lǐng)域帶來(lái)重大突破作為小核酸藥物發(fā)展過(guò)程中的理想遞送載體，能夠解決小核酸藥在進(jìn)入人體后的三個(gè)主要問(wèn)題：靶向性差、脫靶效應(yīng)嚴(yán)重、穩(wěn)定性差。GalNAc（N-乙酰半乳糖胺）作為小核酸藥物的載體，其純度高低對(duì)于藥物的有效性和安全性有重要影響，以下表2是GalNac純度以及影響：

表2. GalNac純度以及影響因素

小核酸載體GalNAc的純度是其研發(fā)和生產(chǎn)中的核心指標(biāo)之一。通過(guò)嚴(yán)格的合成工藝、先進(jìn)的純化技術(shù)以及全面的質(zhì)量控制，可以確保其純度達(dá)到臨床應(yīng)用的要求，GalNAc的純度直接影響小核酸藥物的靶向性、穩(wěn)定性、免疫原性和藥代動(dòng)力學(xué)，進(jìn)而影響療效和安全性。因此筆者描述了一些實(shí)驗(yàn)室工藝研究以及中試放大過(guò)程中常用的純化GalNAc （N－乙酰半乳糖胺載體）的方法，此法均為實(shí)驗(yàn)室實(shí)際操作過(guò)程中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)與筆者個(gè)人見(jiàn)解的歸納

GalNac(N-乙?；陌肴樘前?的純化

1.兩相洗滌萃取

兩相洗滌，產(chǎn)物的粗品使用二氯甲烷，或乙酸乙酯全部溶清，加入碳酸氫鈉水溶液，或純水，或者水和DMF混合溶劑，以及食鹽水等進(jìn)行洗滌后再次分液，分出有機(jī)相合并后旋干即可獲得產(chǎn)品，此方法一般可以將極性較大的雜質(zhì)留在水相。

2.硅膠柱層析

柱層析是將產(chǎn)物的粗品樣用乙酸乙酯溶清，濕法或者干法上樣，硅膠裝柱子，其中硅膠填料可以選擇多種市售硅膠填料，比如普通100目-200目硅膠，球形硅膠填料等等，洗脫劑既可以選擇乙酸乙酯和正己烷混合溶劑沖柱子，梯度洗脫出產(chǎn)品，將雜質(zhì)梯度分離后收集純品，也可以選用二氯甲烷甲醇等常用溶劑梯度洗脫，最后旋干產(chǎn)品獲得目標(biāo)產(chǎn)物。此法是有機(jī)合成最常用的方法可快速獲得純度較好的目標(biāo)產(chǎn)物（注意洗脫劑和點(diǎn)板檢測(cè)產(chǎn)物的展開(kāi)劑會(huì)根據(jù)產(chǎn)品不同適當(dāng)而改變）。

3.制備型色譜以及色譜柱

制備液相色譜法，可以選用色譜柱Flash C18-M column ，或者其他型號(hào)色譜柱，此法為反相色譜柱，制備液相純化成本較高，洗脫劑一般選用乙腈和水，甲醇或乙醇與水，或者乙腈和碳酸氫銨等鹽的水溶液體系洗脫，先梯度洗脫分離出分子結(jié)構(gòu)極性較大的雜質(zhì)，再收集純品，然后旋蒸除去溶劑，進(jìn)行凍干或者再進(jìn)行萃取后才能獲得目標(biāo)產(chǎn)物。

4.重結(jié)晶

單一溶劑重結(jié)晶獲得目標(biāo)產(chǎn)物，即將粗品通過(guò)溶劑如乙酸乙酯，甲醇，乙腈，四氫呋喃等加熱全部溶清，再進(jìn)行降溫，或著濃縮揮發(fā)溶劑等方式讓產(chǎn)物從飽和溶液體系中析出，一般情況析出的固體可以過(guò)濾，或者高速離心獲得固體，如果單一溶劑對(duì)大分子量的產(chǎn)物溶解性不好，也可選用混合溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，比如加入DMF和乙酸乙酯混合溶劑等，再進(jìn)行濃縮或降溫即可析出部分純度較高的固體產(chǎn)物。

5.混合溶劑析晶法或低溫冷凍析晶法

混合溶劑反向滴加析晶獲得固體產(chǎn)物，將粗品溶于乙酸乙酯，四氫呋喃，二氯甲烷中，溶清后加入正己烷，甲基叔丁基醚，正庚烷，或者石油醚等溶劑，析出渾濁固體即可繼續(xù)攪拌過(guò)濾獲得理想的產(chǎn)物，如果析出油狀物質(zhì)即可靜置一段時(shí)間再倒出上層澄清液保留底部油狀物質(zhì)即可獲得產(chǎn)物，此種油析過(guò)程需要多重復(fù)幾次才有純化效果。

6.打漿

如果樣品溶解性不好，可以考慮選用單一溶劑如乙酸乙酯，二氯甲烷，四氫呋喃等實(shí)驗(yàn)室常用溶劑進(jìn)行打漿純化，但需要注意固體漿料分散的狀態(tài)和溶劑的用量多少，如果固體漿料有大塊或者分散狀態(tài)較差，需要改變攪拌方法或者可以考慮混合溶劑打漿，或者先粉碎物料后再進(jìn)行打漿操作，會(huì)獲得比較理想的效果。

未來(lái)伴隨技術(shù)持續(xù)進(jìn)步，會(huì)有更多儀器和實(shí)驗(yàn)方法伴隨時(shí)代發(fā)展而出現(xiàn)，如近年來(lái)越發(fā)成熟的流體化學(xué)技術(shù)，相信這些小核酸藥物的載體合成方法也會(huì)越發(fā)成熟多樣，未來(lái)有更多的方式進(jìn)行GalNAc（N-乙酰半乳糖胺）的合成以及純化這也必將會(huì)造福社會(huì)，為患者帶來(lái)更多治愈疾病的選擇和機(jī)會(huì)，為飽受疾病掙扎的患者帶來(lái)希望和美好的生活。

參考文獻(xiàn)

1）Jayaprakash K. Nair,† Jennifer L. S. Willoughby,† Amy Chan,† Klaus Charisse,† Kallanthottathil G. Rajeev,*and Muthiah Manoharan* et al. dx.doi.org/10.1021/ja505986a | J. Am. Chem. Soc. 2014, 136, 16958−16961.

2）Jayesh A. Kulkarni , Dominik Witzigmann , Sarah B. Thomson , Sam Chen，Blair R. Leavitt，Pieter R. Cullis and Roy van der Meel  Nature Nanotechnology, 2021,16(841):630-643.

3）撰文：幻目，藥度數(shù)據(jù)2024-11-05《淺析：核酸藥物非病毒載體研究進(jìn)展》

4）納拉亞南奈爾• K •賈亞普拉卡什，亞歷山大• V •克林，帕查穆圖•坎德薩米，拉杰夫• G •卡蘭托塔緹爾，莫提亞•馬諾哈蘭《碳水化合物共軛物及其制備改進(jìn)工藝》專利公布號(hào) CN 104717982 A

5）李沖古威李倩尹科馬海萍胡天楠《LPA抑制劑及其用途》專利授權(quán)號(hào)CN 116801886 B