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微生物限度檢查方法

（以下內(nèi)容僅供參考）

本企業(yè)經(jīng)微生物限度檢查方法中微生物計數(shù)及控制菌檢查方法適用性試驗，該產(chǎn)品可按以下方法進(jìn)行微生物計數(shù)及控制菌檢查：

1 供試液的制備：（根據(jù)自身產(chǎn)品特性及方法適用性試驗結(jié)果，詳細(xì)描述供試液的制備過程）

2 需氧菌總數(shù)測定：根據(jù)自身產(chǎn)品特性及方法適用性試驗結(jié)果選擇適宜的方法，如采用直接接種法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液1ml加至適量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上，于30?35℃培養(yǎng)5天，計數(shù)。結(jié)果以點計的菌落數(shù)×10報告菌數(shù)；若濾膜上無菌落生長，以＜10報告菌數(shù)根據(jù)自身產(chǎn)品特性。

3 霉菌和酵母菌總數(shù)測定：根據(jù)自身產(chǎn)品特性及方法適用性試驗結(jié)果選擇適宜的方法，如采用直接接種法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液1mL加至適量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，于20?25℃培養(yǎng)7天，計數(shù)。結(jié)果以點計的菌落數(shù)×10報告菌數(shù)；若濾膜上無菌落生長，以＜10報告菌數(shù)。

4 金黃色葡萄球菌測定：根據(jù)自身產(chǎn)品特性及方法適用性試驗結(jié)果選擇適宜的方法，如采用常規(guī)法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液10mL，加至100mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，投入100mL胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，30?35℃培養(yǎng)18?24小時。取上述培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上，30?35℃培養(yǎng)18?72小時。結(jié)果判斷：若甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上有黃色菌落或外周有黃色環(huán)的白色菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為金黃色葡萄球菌；若平板上沒有與上述形態(tài)特征相符或疑似的菌落生長，或雖有相符或疑似的菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試液未檢出金黃色葡萄球菌。

5 銅綠假單胞菌測定：根據(jù)自身產(chǎn)品特性及方法適用性試驗結(jié)果選擇適宜的方法，如采用常規(guī)法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液10mL，加至100mLpH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，投入100mL胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，30?35℃培養(yǎng)18?24小時。取上述培養(yǎng)物劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上，30?35℃培養(yǎng)18?72小時。取上述平板上生長的菌落進(jìn)行氧化酶試驗，將潔凈濾紙片置于平皿內(nèi)，用無菌玻璃棒取上述平板上生長的菌落涂于濾紙片上，滴加新配制的1%二鹽酸N,N-二甲基對苯二胺試液，在30秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗陽性，否則為陰性。結(jié)果判斷：若溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，且氧化酶試驗陽性，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗，確證是否為銅綠假單胞菌；若平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，且氧化酶試驗陰性，判供試液未檢出銅綠假單胞菌。

6 大腸埃希菌測定：根據(jù)自身產(chǎn)品特性及方法適用性試驗結(jié)果選擇適宜的方法，如采用常規(guī)法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液10mL，加至100mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，投入100mL胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。30?35℃培養(yǎng)18?24小時。取上述培養(yǎng)物lmL接種至100mL麥康凱液體培養(yǎng)基中，42?44℃培養(yǎng)24?48小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30?35℃培養(yǎng)18?72小時。

結(jié)果判斷：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。

7 白色念珠菌測定：根據(jù)自身產(chǎn)品特性及方法適用性試驗結(jié)果選擇適宜的方法，如采用常規(guī)法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液10mL，加至100mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，接種至100ml的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)3～5天。取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)24～48小時。若平板上有菌落生長，且呈乳白色或淡黃色，表面光滑有有濃酵母氣味，培養(yǎng)時間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有褶皺；則挑取疑似菌落接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48小時（必要時延長至72小時），或采用其他適宜方法進(jìn)一步鑒定。

若沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長，且疑似菌在念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上生長的菌落呈陽性反應(yīng)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗，確證是否為白色念珠菌；若沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，或疑似菌在念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上生長的菌落呈陰性反應(yīng)，判供試品未檢出白色念珠菌。