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1.質(zhì)譜常用的類型

表1 質(zhì)量分析器的類型

2 離子源類型

2.1 離子源的類型

主要比較APCI和ESI兩種：

APCI：

ESI源：

2.2 離子源適應(yīng)范圍：

2.3 臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目中離子源選擇：

ESI和APCI離子源的差異在于ESI直接電離，而APCI離子源對(duì)于一些極性小的化合物需要經(jīng)化學(xué)反應(yīng)的幫助下才能電離，故而APCI容易臟。對(duì)于LogP相對(duì)較大的化合物（例如維生素E和維生素K）建議使用APCI源，ESI的對(duì)這兩個(gè)化合物電離的穩(wěn)定性較差。

3 離子對(duì)的選擇

3.1電離模式的選擇

每個(gè)化合物可以經(jīng)過(guò)離子源產(chǎn)生正離子和負(fù)離子，在質(zhì)譜條件開發(fā)的時(shí)候到底是選擇負(fù)離子還是正離子模式，這些是有判斷依據(jù)的。

首先，質(zhì)譜響應(yīng)，一般是選擇響應(yīng)高的離子模式，正離子模式響應(yīng)相對(duì)較高，尤其是在一些含氮的化合物中。

其二，基線，在一些化合物正離子模式下基線相對(duì)較高，而負(fù)離子相對(duì)較低。但是基線的高低還跟溶劑的純度有關(guān)。這個(gè)指標(biāo)可以根據(jù)信噪比來(lái)判斷。

其三，干擾物，尤其在做內(nèi)分泌的化合物的定量時(shí)，化合物在正負(fù)離子的電離程度不同，造成的干擾的程度也不一樣。

其四，項(xiàng)目的LLOQ要求，在做定量分析時(shí)，尤其做中藥藥代動(dòng)力學(xué)的多成分定量。中藥藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)入體內(nèi)可能是不同結(jié)構(gòu)類型的的化合物，這將導(dǎo)致每個(gè)化合物的響應(yīng)不盡相同。小編在碩士期間做中藥藥代動(dòng)力學(xué)時(shí)需要定量的化合物有7個(gè)，這些化合物中有一個(gè)生物堿，而這個(gè)生物堿只有在正離子模式下才有響應(yīng)，其他化合物在正離子模式下的基線很高，信噪比相對(duì)于負(fù)離子較低。除了生物堿之外，小編在負(fù)離子模式下可以將其他化合物L(fēng)LOQ做的很低，很低的LLOQ可以滿足整個(gè)藥代動(dòng)力學(xué)中各個(gè)時(shí)間點(diǎn)采樣的藥物濃度的測(cè)試。最后在考慮這個(gè)生物堿的重要性，小編采用了正離子模式，把采樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行了改變，最后滿足了所有化合物的LLOQ的要求，但是正離子模式下的LLOQ相對(duì)負(fù)離子模式較高。

其五，一般的選擇規(guī)律是堿性化合物選用正離子方式，酸性化合物選用負(fù)離子方式。

建議：離子源的模式最好不要在測(cè)樣時(shí)候改變，在儀器測(cè)樣時(shí)改變電離模式會(huì)影響離子源的穩(wěn)定性，且可能會(huì)造成質(zhì)譜永久性的破壞。如果化合物在不確定是選擇正負(fù)離子，優(yōu)先試用正離子，解釋原因是大自然中容易正離子化的化合物居多。

3.2 母離子的選擇

化合物經(jīng)過(guò)離子源電離會(huì)形成常見的[M+H]+、[M+Na]+、[M]+(含氮的化合物)等正離子準(zhǔn)分子離子峰和[M-H]-、[M+HCOO]-等負(fù)離子準(zhǔn)分子離子峰。正離子中盡量不選擇[M+Na]+，在一些化合物中[M+Na]+的響應(yīng)很好，但是經(jīng)二級(jí)碎裂很不穩(wěn)定。選擇[M+HCOO]-作為母離子時(shí)需要考察添加在流動(dòng)相中甲酸對(duì)目標(biāo)物的電離的影響，HPLC級(jí)、LC-MS級(jí)和不同廠家的甲酸對(duì)目標(biāo)物的離子化可能會(huì)產(chǎn)生影響。

3.3 子離子的選擇

用于MRM（多反應(yīng)監(jiān)測(cè)）的離子選擇是基于離子豐度和特異性的。MRM一般擁有兩個(gè)離子對(duì)，一個(gè)用于定量，一個(gè)用于定性。下圖是小編的碩士畢業(yè)論文的一個(gè)黃酮類新補(bǔ)骨脂異黃酮的質(zhì)譜參數(shù)。

化合物的MRM參數(shù)

選擇m/z 267.2作為定量離子對(duì)的子離子，是因?yàn)槠漤憫?yīng)較好，且在摸索這個(gè)子離子的時(shí)候其豐度和母離子的豐度剛好能滿足1/3原則。另外一個(gè)原因是，在前期做這個(gè)化合物在體內(nèi)鑒定時(shí)，這個(gè)質(zhì)譜碎片相對(duì)與其他的黃酮化合物的很少，其對(duì)新補(bǔ)骨脂異黃酮的結(jié)構(gòu)擁有更好的特異性。選擇m/z 137.2作為定性離子對(duì)，是因?yàn)閙/z 137.2是異黃酮的共同的結(jié)構(gòu)質(zhì)譜碎片，主要是用來(lái)說(shuō)明這個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)的異黃酮特異性。

定性離子對(duì)和定量離子對(duì)之間的質(zhì)量差值的選擇，小編不會(huì)選擇-18Da(-H2O),一般會(huì)選擇丟失碎片的質(zhì)量數(shù)大于>40Da的離子,也不會(huì)選擇在拜諾表查不到的碎片作為子離子。

在摸索的離子對(duì)時(shí)，小編一般摸索4-5個(gè)離子對(duì)，然后在液相摸索過(guò)程中選擇基線低、響應(yīng)好和特異性好的離子對(duì)。

母離子和子離子的質(zhì)量數(shù)值要選準(zhǔn),不能只是整數(shù)。根據(jù)實(shí)際測(cè)試的時(shí)候，小編會(huì)選待測(cè)質(zhì)量數(shù)上下各0.1-0.3 Da，同時(shí)數(shù)對(duì)離子優(yōu)化，最終找出靈敏度最佳的一對(duì)離子。

錐孔電壓和碰撞電壓的選擇，錐孔電壓的選擇子在滿足母離子豐度的情況下，可選擇大一些，這個(gè)根據(jù)以往的經(jīng)驗(yàn)是可能會(huì)影響測(cè)試時(shí)的基線。但是還考慮到錐孔電壓太大會(huì)影響子離子碎裂。碰撞能的選擇，小編在根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際一般都選擇了豐度最高的碰撞能。但是在小編工作期間，一個(gè)質(zhì)譜專家要求定性離子對(duì)和定量離子對(duì)的碰撞能需要一致，解釋是如果不一致，無(wú)法證明定性子離子和定量子離子是同時(shí)從同一個(gè)母離子碎裂的。小編覺得如果真的是這樣的解釋，這個(gè)專家可能違背了3Q質(zhì)譜碎裂的基本原理了。

dwell time的選擇，一般情況下一個(gè)色譜峰最少需要采集20個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，dwell time適當(dāng)長(zhǎng)些噪聲低，但是采集點(diǎn)數(shù)要控制在20個(gè)左右，因?yàn)椴杉c(diǎn)太少會(huì)造成色譜峰變得矮胖，采集點(diǎn)太多會(huì)造成色譜峰噪點(diǎn)太多。對(duì)較弱離子對(duì)，掃描時(shí)間可適當(dāng)長(zhǎng)些。

定性離子對(duì)的信號(hào)和定量離子對(duì)的信號(hào)比（ratio），對(duì)一個(gè)特定的化合物的分析，其信號(hào)比是特定的。無(wú)論是標(biāo)準(zhǔn)品還是生物樣本，如果在分析某一個(gè)樣本時(shí)發(fā)現(xiàn)二者的比例出現(xiàn)明顯的偏離，需要對(duì)這個(gè)樣本重新分析。如果重新分析還是偏離很嚴(yán)重，找出原因后，對(duì)這類樣本建立新的分析方法。在臨床檢測(cè)時(shí)，面對(duì)的病人樣本有可能是服用各種藥物和進(jìn)食各種食物以及病人本身個(gè)體差異，這些原因都有可能引進(jìn)新的干擾物；同時(shí)臨床檢測(cè)中會(huì)使用有機(jī)溶劑作為替代基質(zhì)，替代基質(zhì)與實(shí)際樣本對(duì)兩個(gè)離子對(duì)響應(yīng)可能存在差異。所以監(jiān)測(cè)定性離子對(duì)的信號(hào)和定量離子對(duì)的信號(hào)比也是質(zhì)量控制的方法之一。

4 溶解對(duì)照品的溶劑選擇

摸索新化合物的離子對(duì)時(shí)會(huì)使用溶劑溶解對(duì)照品，小編曾經(jīng)使用純甲醇和純乙腈溶劑溶解對(duì)照品，但是對(duì)某些化合物的電離效果不是很好，小編嘗試在純?nèi)軇┲屑尤爰姿岷涂蓳]發(fā)性鹽，同時(shí)將HPLC級(jí)的溶劑換成LC-MSS級(jí)的溶劑。

另外一種方法是聯(lián)合流動(dòng)相，將流動(dòng)相的比例調(diào)至化合物的出峰位置的梯度比例，流動(dòng)相以0.1ml/min流速進(jìn)行手動(dòng)和自動(dòng)離子對(duì)的摸索。