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嘉峪檢測網(wǎng) 2025-07-21 14:56
國家藥監(jiān)局器審中心發(fā)布《人KRAS基因突變檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）》，全文如下：
人KRAS基因突變檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對人KRAS（kirsten rat sarcoma viral oncogene）基因突變檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對注冊申報(bào)資料的審查提供參考。
本指導(dǎo)原則是對該類試劑注冊申報(bào)資料的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如注冊申請人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補(bǔ)充。
本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。需在遵循相關(guān)法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
本指導(dǎo)原則適用于采用核酸聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR法），對10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織樣本中的KRAS基因突變狀態(tài)進(jìn)行體外定性檢測的試劑。本指導(dǎo)原則以用于結(jié)直腸癌（CRC）患者的西妥昔單抗（Cetuximab）伴隨診斷的預(yù)期用途為例，闡述基于PCR法的KRAS基因突變檢測伴隨診斷試劑臨床前及臨床研究相關(guān)要求，對于聲稱其他伴隨診斷藥物、癌種及方法學(xué)的KRAS基因突變檢測試劑，申請人可參照本指導(dǎo)原則相關(guān)要求，根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評(píng)價(jià)，并補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)資料。
KRAS是一種鼠類肉瘤病毒癌基因，由RAS家族成員基因編碼的一種GTP酶蛋白，參與表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)控細(xì)胞生長、分化、增殖和存活。人KRAS基因突變可影響基因的正常功能，引起細(xì)胞生長、分化失去控制，最終導(dǎo)致腫瘤的形成。導(dǎo)致KRAS處于激活狀態(tài)的突變主要位于基因2外顯子（第12、13位密碼子）、3號(hào)外顯子（第59、61位密碼子）、4號(hào)外顯子（第117、146位密碼子）號(hào)上[1]，包括多種突變類型。KRAS基因突變使癌癥患者對抗EGFR抗體類藥物產(chǎn)生耐藥[2]，進(jìn)而不能從該類藥物治療中獲益，而KRAS基因野生型患者則可以從這類藥物中明顯獲益[3-5]。KRAS作為結(jié)直腸癌治療的分子靶標(biāo)受到普遍關(guān)注，并已陸續(xù)開發(fā)出了西妥昔單抗等抗EGFR抗體類藥物。
針對用于結(jié)直腸癌（Colorectal Cancer，CRC）患者的西妥昔單抗的伴隨診斷試劑，所覆蓋的突變位點(diǎn)應(yīng)根據(jù)其不同突變位點(diǎn)的突變率設(shè)置，建議至少包括第2號(hào)外顯子的第12號(hào)和13號(hào)密碼子的7種熱點(diǎn)突變，包括G12D 、G12C、G12S、G12R、G12V、G12A、G13D。
本指導(dǎo)原則適用于人KRAS基因突變檢測試劑注冊申請和變更注冊申請的情形。本指導(dǎo)原則針對人KRAS基因突變檢測注冊申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求。
二、注冊審查要點(diǎn)
（一）監(jiān)管信息
1.產(chǎn)品名稱及分類編碼
產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如人KRAS基因突變檢測試劑（PCR法）。根據(jù)《體外診斷試劑分類目錄》，與治療藥物靶點(diǎn)檢測相關(guān)的試劑和伴隨診斷用試劑，按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。
2.其他信息
還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。
（二）綜述資料
綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。其中，與同類和/或前代產(chǎn)品的比較應(yīng)著重從技術(shù)原理、主要組成成分、被測靶標(biāo)（基因突變位點(diǎn)）、預(yù)期用途、性能指標(biāo)、臨床應(yīng)用情況等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與已獲批準(zhǔn)的同類和/或前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。預(yù)期用途應(yīng)詳述KRAS基因突變與適應(yīng)癥之間的關(guān)聯(lián)，藥物對不同KRAS突變類型的患者治療效果描述，提交相應(yīng)支持性資料。
（三）非臨床資料
1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告
注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。
人KRAS基因突變檢測試劑已有適用的國家參考品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家參考品的相關(guān)要求，并使用國家參考品對三批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。
如有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。
2. 分析性能研究
注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。
如申報(bào)產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交采用不同機(jī)型進(jìn)行性能評(píng)估的資料。如申報(bào)產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗(yàn)證。
分析性能評(píng)估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、類型、數(shù)量、采集和處理方式、稀釋方式等。研究中采用的人KRAS基因突變FFPE樣本，應(yīng)采用科學(xué)合理的方法確定其突變類型、突變序列百分率和人基因組DNA濃度水平，提交具體的試驗(yàn)資料。如涉及樣本稀釋后檢測，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)。對于各項(xiàng)性能中采用的樣本，在下述各項(xiàng)性能研究資料中分別提供樣本信息列表。
2.1樣本穩(wěn)定性
2.1.1樣本提取前核酸序列的穩(wěn)定性
對于經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋的組織樣本，通常較為穩(wěn)定。申請人可依據(jù)相關(guān)專家共識(shí)及文獻(xiàn)，確定樣本的保存溫度及保存年限。一般而言，樣本保存年限不宜超過3年，以確保樣本質(zhì)量及后續(xù)試驗(yàn)的可靠性。
2.1.2樣本提取后核酸序列的穩(wěn)定性
應(yīng)檢測樣本提取后核酸的含量，設(shè)置反應(yīng)體系所需初始DNA含量范圍，如單位體積DNA濃度超過所需濃度上限或下限，應(yīng)提供相應(yīng)的改進(jìn)措施。可采用紫外-可見分光光度計(jì)對DNA濃度進(jìn)行定量，通過260 nm/280 nm處的吸光度比值（OD260/OD280）或其他方法評(píng)價(jià)其純度。同時(shí)，應(yīng)對核酸提取物的保存時(shí)間、保存溫度進(jìn)行驗(yàn)證。并評(píng)價(jià)凍融次數(shù)、儲(chǔ)存條件等對樣本提取后核酸序列穩(wěn)定性的影響。
2.2 適用的樣本類型
列明產(chǎn)品適用的樣本類型為CRC FFPE病理組織樣本。
2.3準(zhǔn)確度
采用申報(bào)試劑與測序結(jié)果或已上市同類產(chǎn)品，同時(shí)檢測臨床樣本，比較檢測結(jié)果之間的一致性程度，進(jìn)行申報(bào)試劑的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)。
研究用樣本應(yīng)納入一定數(shù)量的人KRAS基因突變型CRC FFPE臨床樣本和野生型CRC FFPE臨床樣本，并注意覆蓋產(chǎn)品檢測范圍內(nèi)的每種突變類型樣本，并且應(yīng)包含不同腫瘤分期（I-IV期）樣本、不同組織分型樣本、不同腫瘤組織含量樣本及干擾樣本。
2.4企業(yè)參考品驗(yàn)證
根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2.5精密度
精密度評(píng)價(jià)應(yīng)對可能影響檢測精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測試劑（包括核酸提取/純化組分）本身外，還應(yīng)包括儀器、操作者、時(shí)間、地點(diǎn)、檢測輪次、試劑批次等，設(shè)計(jì)合理的精密度評(píng)價(jià)周期，并對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、不同操作者間和不同實(shí)驗(yàn)室間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。
評(píng)價(jià)用樣本應(yīng)為涵蓋產(chǎn)品檢測范圍內(nèi)所有基因突變類型的FFPE臨床樣本，對于G12R、G12C等罕見基因突變類型，可采用FFPE細(xì)胞系、含有靶序列的核酸或質(zhì)粒與人KRAS野生型CRC FFPE臨床樣本制備DNA存儲(chǔ)液進(jìn)行精密度研究。試驗(yàn)操作應(yīng)按照說明書執(zhí)行，需包含核酸提取/純化等樣本處理步驟。樣本應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣本、檢出限水平樣本、中/強(qiáng)陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫螅纾?/span>
陰性樣本：應(yīng)包括人KRAS野生型樣本，陰性符合率應(yīng)為100%（n≥20）。
檢出限水平樣本：陽性符合率應(yīng)≥95%（n≥20）。
中/強(qiáng)陽性樣本：反應(yīng)體系中人基因組DNA濃度水平呈中度到強(qiáng)陽性，且突變序列百分率呈中到高百分比，陽性檢出率為100%且CV≤5%（n≥20）。
2.6檢出限
研究應(yīng)包括擴(kuò)增反應(yīng)終體系中的突變序列百分率和申報(bào)產(chǎn)品反應(yīng)體系中人基因組DNA濃度兩個(gè)因素。
2.6.1檢出限的建立
建立研究的樣本應(yīng)包括涵蓋產(chǎn)品檢測檢測范圍內(nèi)所有基因突變類型的FFPE臨床樣本，對于G12R、G12C等罕見基因突變類型，可采用FFPE細(xì)胞系、含有靶序列的核酸或質(zhì)粒與人KRAS野生型CRC FFPE臨床樣本制備DNA存儲(chǔ)液。
研究應(yīng)采用不同突變百分率及不同梯度濃度人基因組DNA樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，將95%檢出率水平的突變百分率及人基因組DNA濃度，確定為產(chǎn)品檢出限。
KRAS基因不同突變百分率樣本混合應(yīng)注意，每種突變類型樣本儲(chǔ)存液按照不同突變序列所占比例進(jìn)行混合，應(yīng)至少包括目標(biāo)檢出限和檢出限上下至少各2個(gè)梯度比例范圍。對于按不同比例混合后的樣本，建議采用合理的方法驗(yàn)證各樣本的實(shí)際混合比例。同時(shí)，在KRAS基因突變不同比例研究過程中應(yīng)設(shè)置KRAS野生型樣本作為空白對照。
不同人基因組DNA量樣本混合稀釋應(yīng)注意，使用的FFPE樣本應(yīng)與待混合配置樣本類型相同。建議申請人設(shè)計(jì)一個(gè)顯著高于反應(yīng)體系最高DNA加樣量的DNA濃度，在實(shí)際的KRAS不同突變比例下，進(jìn)行不同梯度DNA濃度的檢測。不同梯度DNA濃度范圍應(yīng)涵蓋申報(bào)產(chǎn)品反應(yīng)體系中設(shè)定的最高DNA濃度和最低DNA濃度。
2.6.2檢出限的驗(yàn)證
針對每種突變類型選擇不同于建立用臨床樣本，在已建立的檢出限水平進(jìn)行驗(yàn)證，建議對最低檢出限和檢測上限附近水平的樣本進(jìn)行至少20次的重復(fù)檢測，應(yīng)滿足95%以上檢出率要求。
2.7分析特異性
2.7.1交叉反應(yīng)
該類產(chǎn)品主要與結(jié)直腸部位腫瘤存在較強(qiáng)關(guān)聯(lián)性，申請人在設(shè)計(jì)交叉反應(yīng)研究時(shí)應(yīng)將此點(diǎn)納入考慮。
申請人應(yīng)考慮與靶序列的核酸序列相近或具有同源性、易引起交叉反應(yīng)的野生型或其他突變類型序列的交叉反應(yīng)。建議交叉反應(yīng)驗(yàn)證考慮以下因素：KRAS基因不同序列；RAS家族不同基因等；高濃度野生型人DNA樣本、非人類基因組基因、產(chǎn)品檢測范圍內(nèi)各突變位點(diǎn)間的交叉干擾等。
非人類基因組基因樣本應(yīng)包括可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的常見腸道感染病原體、CRC組織獲取時(shí)易感染病原體等，如艱難梭菌、志賀氏菌、彎曲桿菌、耶爾森氏菌、沙門氏菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌等，需在有臨床意義相關(guān)濃度下進(jìn)行檢測，細(xì)菌濃度水平建議至少106 cfu/mL，病毒濃度水平建議至少105 pfu/mL。
試驗(yàn)方案需明確用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣本來源、制備方法、核酸序列確認(rèn)和濃度選擇等，并提交詳細(xì)的研究資料。
2.7.2干擾研究
應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。對于FFPE樣本，內(nèi)源性干擾物質(zhì)應(yīng)包括血紅蛋白、甘油三酯、壞死組織等，外源性干擾物質(zhì)應(yīng)包括福爾馬林、石蠟、二甲苯、乙醇、蛋白酶K、常用治療藥物等。
干擾試驗(yàn)可通過在所有突變類型檢出限水平處DNA存儲(chǔ)液中加入干擾物質(zhì)的方式，評(píng)價(jià)干擾物質(zhì)對目標(biāo)基因檢測的影響，也可直接采用暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。
2.8核酸提取/純化性能
石蠟包埋組織樣本在福爾馬林固定過程中，會(huì)使樣品中的核酸與核酸之間、核酸與蛋白之間發(fā)生交聯(lián)。因此，在進(jìn)行核酸檢測之前，應(yīng)有核酸提取/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外，還有盡可能去除PCR抑制物的純化作用。申請人需設(shè)置合理的評(píng)價(jià)方案（如：對同一CRC FFPE臨床樣本中段部分進(jìn)行多份連續(xù)切片，等）和評(píng)價(jià)指標(biāo)，評(píng)價(jià)樣本核酸提取過程的重復(fù)性。
無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測試劑的特性，對配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率、提取過程重復(fù)性的研究，并評(píng)價(jià)該方法能否滿足KRAS基因突變檢測試劑的要求，提供詳細(xì)的評(píng)價(jià)資料。
若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每種核酸提取試劑均需配合檢測試劑進(jìn)行精密度、檢出限和抗干擾的驗(yàn)證。
2.9反應(yīng)體系
2.9.1樣本采集和處理
明確樣本的取材、固定、包埋、切片的具體要求，包括但不限于可檢測標(biāo)本的類型、樣本離體后開始固定的時(shí)間、固定液的選擇、溫度要求、包埋條件、組織塊的厚度要求等。提供樣本處理的方法、步驟及參考的采集標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。
應(yīng)確定樣本中的最低腫瘤細(xì)胞含量，提交確定方法及研究數(shù)據(jù)，腫瘤細(xì)胞所占比例需達(dá)到所用擴(kuò)增檢測方法的要求。當(dāng)樣本中腫瘤細(xì)胞含量低于標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)，如需采用樣本富集的方法來滿足腫瘤細(xì)胞含量要求，應(yīng)提交詳細(xì)的樣本富集方法、步驟及研究數(shù)據(jù)，并對該方法所制備樣本進(jìn)行精密度和檢測限驗(yàn)證研究。
2.9.2核酸提取和反應(yīng)體系
研究確定最佳核酸提取和反應(yīng)體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTPs濃度、陽離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。明確每uL反應(yīng)體系的DNA加樣量和總DNA濃度確定方法，建議在保證核酸提取質(zhì)量的情況下盡量擴(kuò)大總反應(yīng)體系和加樣量，以提高檢測靈敏度。
如有多個(gè)適用機(jī)型，需提供每個(gè)適用機(jī)型基線和閾值的確定資料。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。
3. 穩(wěn)定性研究
包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
4. 陽性判斷值研究
陽性判斷值即為能夠獲得理想的檢測準(zhǔn)確性的臨界值（Cut-off）。研究建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，涵蓋人KRAS野生型和可檢測的不同突變類型，采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行研究，亦可采用其他科學(xué)合理的方法進(jìn)行陽性判斷值研究。如果試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)提交灰區(qū)范圍確定的研究資料。提交陽性判斷值建立及驗(yàn)證研究資料時(shí)，應(yīng)包括研究方案、設(shè)定評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、研究過程以及研究原始數(shù)據(jù)等。其中，所用樣本的背景信息列表應(yīng)至少包括性別、年齡、臨床診斷信息、樣本來源機(jī)構(gòu)、檢測結(jié)果等信息。
5.其他資料
5.1主要原材料研究
此類產(chǎn)品的主要原材料應(yīng)包括引物、探針、酶、dNTPs、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品、企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值試驗(yàn)資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗(yàn)資料、生產(chǎn)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。生產(chǎn)商應(yīng)固定，不得隨意更換。
5.1.1 引物和探針：
應(yīng)詳述每一待測位點(diǎn)檢測用引物、探針的設(shè)計(jì)原則，分別提供引物探針序列、靶基因序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計(jì)兩套或多套引物探針以供篩選，針對待測位點(diǎn)的檢測靈敏度和特異性等進(jìn)行評(píng)價(jià)，選擇最佳引物探針組合，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。同時(shí)應(yīng)針對引物、探針及檢測靶序列與公開數(shù)據(jù)庫進(jìn)行同源性分析，如有同源序列應(yīng)著重評(píng)價(jià)是否會(huì)有交叉反應(yīng)。
申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，一般包括：外觀、分子量、純度、濃度、序列準(zhǔn)確度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)，以及功能性試驗(yàn)等，并依據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
5.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTPs）：包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP，應(yīng)提交對其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗(yàn)證資料，以及功能性試驗(yàn)資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
5.1.3酶：主要包括DNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等，應(yīng)分別對酶活性、熱穩(wěn)定性、功能性試驗(yàn)等進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
5.1.4質(zhì)控品
試劑盒一般包含陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品。陽性質(zhì)控品應(yīng)包含較常見的突變序列或理論上較難測得的突變序列，可采用質(zhì)粒、細(xì)胞系或臨床樣本的核酸提取液等進(jìn)行制備。陰性質(zhì)控品可采用含有野生型核酸序列的核酸溶液，也可采用不含待測靶序列的空白對照，對交叉污染導(dǎo)致的假陽性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。陰性質(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取和檢測的全過程。提交試劑盒質(zhì)控品有關(guān)原料選擇、制備、定值過程、濃度范圍等試驗(yàn)資料，對質(zhì)控品的檢測結(jié)果Ct值范圍做出明確的要求。
5.1.5內(nèi)標(biāo)
內(nèi)標(biāo)，又稱內(nèi)對照，可以對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，應(yīng)與靶核酸一同提取及擴(kuò)增。申請人需對內(nèi)標(biāo)的引物、探針和模板濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。明確內(nèi)標(biāo)的檢測結(jié)果Ct值范圍。建議科學(xué)設(shè)置內(nèi)標(biāo)，對待測樣本的取樣質(zhì)量、試劑的反應(yīng)體系進(jìn)行監(jiān)控。
5.1.6企業(yè)參考品制備
企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和重復(fù)性參考品。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際需要設(shè)置企業(yè)參考品。
常見基因突變位點(diǎn)建議采用臨床樣本提取的DNA儲(chǔ)備液作為原料，對于罕見基因突變類型可采用臨床樣本提取的DNA儲(chǔ)備液、細(xì)胞系或質(zhì)粒作為原料。企業(yè)參考品基質(zhì)應(yīng)與樣本儲(chǔ)存液基質(zhì)相同。應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、濃度、突變樣本突變類型及突變百分率的確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：
陽性參考品：針對試劑盒檢測范圍內(nèi)所有突變位點(diǎn)均應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的陽性參考品，設(shè)置多個(gè)突變百分率梯度。
陰性參考品：應(yīng)包括經(jīng)確認(rèn)無相應(yīng)靶突變序列的樣本（如野生型人基因組，RAS家族不同基因型等）、非人類基因組樣本。
檢出限參考品：針對試劑盒檢測范圍內(nèi)所有突變位點(diǎn)均應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的檢出限參考品，其中每個(gè)突變位點(diǎn)應(yīng)從擴(kuò)增反應(yīng)終體系總核酸濃度和突變序列所占百分率兩個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，可選擇檢出限水平（例如：95%檢出率）或略高于檢出限的水平的樣本。
重復(fù)性參考品：應(yīng)包括略高于檢出限濃度水平的陽性樣本、中或強(qiáng)陽性水平樣本、陰性樣本（野生型樣本），其中陽性精密度參考品以常見突變類型或理論上較難測得的突變序列為主。
5.2生產(chǎn)工藝研究
生產(chǎn)工藝研究資料主要包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTP濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。
（四）臨床評(píng)價(jià)資料
人KRAS基因突變檢測試劑針對結(jié)直腸癌適應(yīng)證，預(yù)期用途為用于西妥昔單抗的伴隨診斷。針對該預(yù)期用途，KRAS突變一般為2號(hào)外顯子（密碼子12和13）、3號(hào)外顯子（密碼子59和61）以及4號(hào)外顯子（密碼子117和146）的突變。申報(bào)產(chǎn)品所覆蓋的突變位點(diǎn)，根據(jù)其不同突變位點(diǎn)的突變率，建議至少包括第2號(hào)外顯子的第12號(hào)和13號(hào)密碼子的7種熱點(diǎn)突變，包括G12D、G12C、G12S、G12R、G12V、G12A、G13D。如產(chǎn)品設(shè)計(jì)所檢測的突變位點(diǎn)少于以上位點(diǎn)，申請人應(yīng)提供相關(guān)支持性資料，應(yīng)根據(jù)突變位點(diǎn)的覆蓋率，充分分析合理性。
該類試劑應(yīng)通過臨床試驗(yàn)路徑進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，臨床試驗(yàn)包括產(chǎn)品臨床檢測性能研究和伴隨診斷試劑臨床意義研究兩部分。臨床試驗(yàn)應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床檢測性能研究
1.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員
申請人應(yīng)選擇不少于3家經(jīng)備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)常規(guī)開展結(jié)直腸癌分子病理檢測，具有病理診斷、分子生物學(xué)檢測的優(yōu)勢，試驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。臨床試驗(yàn)整個(gè)過程均應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
1.2臨床試驗(yàn)適用人群和樣本類型
適用人群為經(jīng)病理診斷為結(jié)直腸癌的人群。應(yīng)注意納入人群應(yīng)覆蓋結(jié)直腸癌不同分期和不同組織分型（腺癌、腺鱗癌、鱗癌等）的病例。陽性樣本應(yīng)包括一部分弱陽性的樣本。
臨床試驗(yàn)所用的樣本類型應(yīng)為病理質(zhì)控合格的FFPE樣本。如對于活檢標(biāo)本及手術(shù)標(biāo)本均適用，則臨床試驗(yàn)中對于兩種標(biāo)本均應(yīng)納入。臨床樣本的處理、保存和核酸提取等應(yīng)分別滿足申報(bào)產(chǎn)品說明書及對比試劑說明書的相關(guān)要求。
1.3對比方法選擇
可選擇實(shí)驗(yàn)室參考方法或已上市同類產(chǎn)品作為對比方法。參考方法的檢測可在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成也可委托具有資質(zhì)的第三方機(jī)構(gòu)完成。已上市同類產(chǎn)品的選擇應(yīng)從預(yù)期用途、樣本要求、檢測性能、檢測范圍、所檢突變是否可以分型等方面，確認(rèn)其與申報(bào)產(chǎn)品具有較好的可比性。
如選擇核酸序列測定方法作為此類試劑臨床試驗(yàn)研究的對比方法，驗(yàn)證申報(bào)試劑檢測結(jié)果與核酸序列測定（測序）結(jié)果之間的一致性情況，臨床研究報(bào)告中應(yīng)對選用的測序方法作詳細(xì)介紹。
1.4臨床試驗(yàn)樣本量
臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計(jì)方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。此部分臨床試驗(yàn)?zāi)康臑樵u(píng)估兩種檢測方法之間的一致性，因此建議采用單組目標(biāo)值法進(jìn)行最低樣本量的估算。通過陽性符合率和陰性符合率來分別計(jì)算所需陽性樣本和陰性樣本的例數(shù)。樣本量估算公式如下：
公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為申報(bào)產(chǎn)品評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。
其中陽性符合率和陰性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于95%。臨床試驗(yàn)結(jié)果中，相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)的95%置信區(qū)間下限應(yīng)不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。
基于申報(bào)產(chǎn)品的方法學(xué)為PCR方法，臨床試驗(yàn)中應(yīng)對所聲稱的每個(gè)突變位點(diǎn)均進(jìn)行驗(yàn)證，且每個(gè)突變位點(diǎn)均應(yīng)具有一定的陽性病例。對于臨床罕見的突變位點(diǎn)，例數(shù)可酌情減少，申請人應(yīng)提供相關(guān)的支持性資料。
臨床試驗(yàn)總樣本量確定時(shí)應(yīng)在上述陰、陽性樣本最低樣本量估算的基礎(chǔ)上，同時(shí)考慮其他可能造成受試者脫落的情況以及申報(bào)產(chǎn)品所覆蓋的突變位點(diǎn)，根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)增加入組樣本量。
1.5統(tǒng)計(jì)分析
首先應(yīng)針對所入組人群進(jìn)行人口學(xué)分析，包括性別、年齡、治療狀態(tài)、組織分型、分期、樣本類型、腫瘤細(xì)胞含量等方面進(jìn)行分析，還應(yīng)分析臨床試驗(yàn)中所納入的陽性判斷值附近的樣本情況。
以四格表分別總結(jié)申報(bào)產(chǎn)品與對比方法的定性檢測結(jié)果，計(jì)算陽性符合率、陰性符合率及相應(yīng)的95%置信區(qū)間。除總體統(tǒng)計(jì)外，還要針對每個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以驗(yàn)證申報(bào)產(chǎn)品與對比方法檢測結(jié)果的一致性。
針對兩種方法檢測不一致樣本，應(yīng)采用合理的方法進(jìn)行確認(rèn)，對不一致的原因綜合進(jìn)行分析。
2.伴隨診斷臨床意義的確認(rèn)
2.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量
針對此部分臨床研究，申請人應(yīng)選擇不少于3家按要求備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。
2.2 臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)及對比方法的選擇
因KRAS基因突變對于西妥昔單抗的伴隨診斷為負(fù)向位點(diǎn)，野生型可使用西妥昔單抗藥物。因此可采用一致性比對的方式進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。
如申報(bào)試劑僅包括上述的7個(gè)熱點(diǎn)突變，可采用與原研伴隨診斷試劑進(jìn)行比較研究，評(píng)價(jià)兩者之間的一致性。
如申報(bào)試劑包括KRAS 2號(hào)外顯子（密碼子12和13）、3號(hào)外顯子（密碼子59和61）以及4號(hào)外顯子（密碼子117和146）的突變，則可與西妥昔單抗藥物臨床試驗(yàn)中所采用的CTA方法進(jìn)行比較研究?？刹捎弥亟–TA的方式，應(yīng)注意重建CTA的實(shí)驗(yàn)流程、檢測性能應(yīng)與CTA方法具有良好的一致性。
申報(bào)產(chǎn)品用于指導(dǎo)用藥的靈敏度應(yīng)與原研伴隨診斷試劑相當(dāng)，根據(jù)原研伴隨診斷試劑的靈敏度水平設(shè)置相應(yīng)的陽性判斷值，以保證兩者具有較好的一致性。
2.3入組人群
此部分臨床研究的目的在于評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的伴隨診斷的預(yù)期用途，因此所入組人群應(yīng)以西妥昔單抗藥物的適應(yīng)證人群，即轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌為主。
樣本量的估算方法與上述臨床性能評(píng)價(jià)中的樣本量估算方法相同，根據(jù)與原研伴隨診斷試劑的一致性水平設(shè)置合理的最低可接受標(biāo)準(zhǔn)。如原研伴隨診斷試劑同時(shí)能夠滿足對申報(bào)產(chǎn)品臨床檢測性能的評(píng)價(jià)，則此部分研究可與第一部分臨床檢測性能的評(píng)價(jià)進(jìn)行合并，但應(yīng)注意入組人群的差異。
此部分研究中應(yīng)根據(jù)適應(yīng)證人群中的基因突變率納入臨床常見的突變位點(diǎn)。
2.4 其他
如申報(bào)產(chǎn)品所伴隨藥物為其他藥物，則應(yīng)根據(jù)伴隨診斷試劑相關(guān)指導(dǎo)原則的要求提供伴隨診斷證據(jù)。如申報(bào)產(chǎn)品為與新開發(fā)的抗腫瘤藥物同步研發(fā)的伴隨診斷試劑，則可提供與藥物同步開發(fā)的藥物臨床試驗(yàn)資料作為其伴隨診斷證據(jù)。藥物臨床試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)明確所使用的伴隨診斷試劑為申報(bào)產(chǎn)品，并明確申報(bào)產(chǎn)品在藥物臨床試驗(yàn)中所起的作用以及與藥物療效的關(guān)系。
3.通用要求
3.1臨床試驗(yàn)方案
臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行同一臨床試驗(yàn)方案，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申請人的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被剔除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。
3.2質(zhì)量控制
臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)方案的培訓(xùn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
3.3臨床試驗(yàn)報(bào)告
臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。臨床試驗(yàn)報(bào)告的撰寫應(yīng)參考相關(guān)法規(guī)的要求。
（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿
產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。人KRAS基因突變檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。
1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：
1.1試劑盒用于體外定性檢測結(jié)直腸癌患者經(jīng)10%中性福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本中KRAS基因第X號(hào)外顯子XX密碼子的X個(gè)突變位點(diǎn)（明確突變型別）。用于XX藥物的伴隨診斷。
1.2建議列表表述人KRAS多個(gè)基因突變型別，列明不同外顯子中基因突變的排列順序。至少明確產(chǎn)品外顯子、突變位點(diǎn)、cosmic ID、突變位點(diǎn)臨床意義及人KRAS基因信息所使用的數(shù)據(jù)庫。
1.3 人KRAS基因突變檢測的目標(biāo)人群：
1.4申報(bào)試劑應(yīng)伴隨特定腫瘤治療藥物聯(lián)合進(jìn)行臨床試驗(yàn)研究，并證明兩者伴隨使用具有顯著的臨床治療意義，說明書中需明確具體藥物通用名稱，并簡要介紹相關(guān)的臨床患者受益情況。
1.5應(yīng)介紹相關(guān)的臨床背景，包括相關(guān)適用人群特征、腫瘤的組織類型、適用的樣本類型、待測靶基因序列的特征及選擇依據(jù)、靶基因及其表達(dá)蛋白在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中可能起到的作用、相關(guān)藥物或其他治療技術(shù)及其作用機(jī)理、與待測突變位點(diǎn)可能存在的關(guān)系等。
1.6明確說明該試劑盒僅用于對結(jié)直腸癌患者靶基因序列的檢測，其檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為患者個(gè)體化治療的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情、藥物適應(yīng)癥、治療反應(yīng)及其他實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)等因素對檢測結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。
2.【檢驗(yàn)原理】
2.1對試劑盒檢測能夠覆蓋的所有突變位點(diǎn)或突變類型、內(nèi)標(biāo)基因進(jìn)行詳細(xì)描述（靶序列長度、基因座位、突變類型及相關(guān)特征等），對引物及探針設(shè)計(jì)、不同樣品反應(yīng)管組合、質(zhì)控品設(shè)置及熒光信號(hào)檢測原理等進(jìn)行逐項(xiàng)介紹。
2.2詳細(xì)介紹核酸分離/純化方法、原理等（如適用）。
2.3如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UDG/UNG等），也應(yīng)對其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。
3.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：
樣本的采集、處理、運(yùn)送和保存：明確對適用樣本的取材、固定、包埋的具體要求，可參考國內(nèi)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作性文件內(nèi)容進(jìn)行編寫或引用。明確樣本中腫瘤細(xì)胞含量的要求，明確低于聲稱腫瘤細(xì)胞含量樣本的處理方式。明確樣本核酸提取/純化前的預(yù)處理過程、保存條件及期限、運(yùn)輸條件等。
4.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：
詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：
4.1 FFPE組織樣本脫蠟過程，應(yīng)分別描述封固于載玻片與未封固于載玻片（如有）的脫蠟步驟。
4.2試劑配制方法、注意事項(xiàng)。
4.3核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。質(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，以對核酸分離/純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理的質(zhì)量控制，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。
4.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項(xiàng)等。
4.5 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。
4.6儀器及軟件設(shè)置：特殊參數(shù)，待測基因、內(nèi)標(biāo)和質(zhì)控品的熒光通道選擇等。
5.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
結(jié)合質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)以及樣本管檢測結(jié)果的Ct值，以列表的形式對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。
6.【檢驗(yàn)方法的局限性】
6.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者個(gè)體化治療的選擇應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。
6.2陰性結(jié)果不能完全排除靶基因突變的存在，樣本中腫瘤細(xì)胞過少、核酸過度降解或擴(kuò)增反應(yīng)體系中靶基因濃度低于檢出限亦可造成陰性結(jié)果。
6.3腫瘤組織（細(xì)胞）可能存在較大異質(zhì)性，不同部位取樣可能會(huì)得到不同的檢測結(jié)果。
6.4不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理，以及不當(dāng)?shù)脑囼?yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。
6.5明確該檢測僅限于規(guī)定的樣本類型及檢測系統(tǒng)（包括適用機(jī)型、核酸分離/純化試劑、檢測方法等）。
6.6本檢測試劑的檢測范圍僅包括檢測試劑聲稱的基因突變位點(diǎn)范圍，不包括檢測試劑盒聲明之外的基因突變位點(diǎn)的檢測。
7【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：
7.1對國家參考品和企業(yè)參考品的符合情況。
7.2檢出限：說明在試劑盒規(guī)定的檢測條件及擴(kuò)增體系中，試劑盒能夠覆蓋的所有突變類別的最低檢出濃度。重點(diǎn)考慮原始模板中基因突變的百分率和擴(kuò)增終體系中核酸濃度兩個(gè)因素對最低檢出限的影響，并簡單介紹最低檢出限的確定方法。
7.3對精密度的研究情況進(jìn)行總結(jié)。
7.4分析特異性
7.4.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗(yàn)證的基因類型、病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。
7.4.2干擾試驗(yàn)：說明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。
7.5臨床試驗(yàn)：簡要介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。
8【注意事項(xiàng)】
8.1本產(chǎn)品僅用于體外診斷。
8.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。
8.3試劑保存運(yùn)輸及使用過程中多種因素可能導(dǎo)致性能變化，如保存運(yùn)輸不當(dāng)、樣本采集、樣本處理及檢測過程操作不規(guī)范等，請嚴(yán)格按照說明書操作。
8.4生物安全防護(hù)相關(guān)內(nèi)容。
8.5避免實(shí)驗(yàn)室污染的措施。
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來源：中國器審
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