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一、細(xì)胞遷移

細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)是研究細(xì)胞在體外條件下移動(dòng)能力的一種實(shí)驗(yàn)方法，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)和免疫學(xué)等領(lǐng)域。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)基于細(xì)胞對(duì)環(huán)境變化的反應(yīng)能力，這些變化可以是物理的（如空間間隙）或化學(xué)的（如梯度差）。實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖悄M并觀察細(xì)胞如何在這些條件變化下移動(dòng)，從而了解細(xì)胞遷移的機(jī)制和影響因素。

 

1、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

（文獻(xiàn)：Cell Migration and Invasion Assays as Tools for Drug Discovery）

 

以下是細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)的基本步驟：

1）在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞至約80-90%匯合。

2）用無菌移液槍頭或劃痕工具在細(xì)胞單層上劃出一道劃痕，模擬傷口。輕輕清洗培養(yǎng)皿以去除浮動(dòng)細(xì)胞。

3）添加新的培養(yǎng)基，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要添加不同的處理物質(zhì)（如藥物、細(xì)胞因子等）。

4）使用顯微鏡觀察并拍攝劃痕后的即時(shí)圖像（0小時(shí)）。將培養(yǎng)皿放回培養(yǎng)箱。

5）定期（如6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)等）取出培養(yǎng)皿，觀察并拍攝細(xì)胞遷移的圖像。

6）使用圖像分析軟件（如ImageJ）測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)劃痕的寬度或遷移的細(xì)胞數(shù)。計(jì)算細(xì)胞遷移率并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

7）匯總實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，繪制細(xì)胞遷移曲線圖。

 

結(jié)果圖展示：

（文獻(xiàn)：Stathmin通過促進(jìn)偽足形成介導(dǎo)TNF-α誘導(dǎo)的皮膚成纖維細(xì)胞遷移）

 

2、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)

以下是基本步驟：

1）在24孔板中放置Transwell插入物。向每個(gè)Transwell上室添加適量無血清培養(yǎng)基（通常為100-200 µL），向下室添加含有化學(xué)誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基（通常為600-800 µL）。

2）用無菌PBS清洗培養(yǎng)的細(xì)胞。使用胰酶消化細(xì)胞，并加入含有無血清培養(yǎng)基的管中中止消化。計(jì)數(shù)細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞懸液至適當(dāng)濃度（例如1×105 cells/mL）。

3）向Transwell上室中添加適量的細(xì)胞懸液（通常為100-200 µL）。小心處理以避免氣泡形成。

4）將Transwell板放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24-48小時(shí)，以允許細(xì)胞遷移。

5）孵育結(jié)束后，取出Transwell插入物。

6）用無菌PBS輕輕清洗上室，去除未遷移的細(xì)胞。

7）用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室遷移的細(xì)胞，固定時(shí)間通常為10-15分鐘。

8）用PBS清洗并染色（如0.1%結(jié)晶紫染色或DAPI染色）。

9）用棉簽擦去上室膜上的未遷移細(xì)胞。使用顯微鏡觀察下室膜上的遷移細(xì)胞，并拍攝圖像。計(jì)數(shù)多個(gè)視野中的遷移細(xì)胞數(shù)，計(jì)算平均值。

10）匯總遷移細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，繪制細(xì)胞遷移圖。

 

結(jié)果圖展示：

 

二、細(xì)胞侵襲

（文獻(xiàn)：Mutational drivers of cancer cell migration and invasion）

 

細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)?zāi)M體內(nèi)細(xì)胞穿越基質(zhì)屏障的過程，通過在Transwell插入物的膜上涂覆一層基質(zhì)膠（如Matrigel）來模擬ECM。細(xì)胞在引誘劑（如趨化因子或生長(zhǎng)因子）存在下，穿過基質(zhì)膠和帶孔的膜遷移到下室。這一過程涉及細(xì)胞對(duì)基質(zhì)膠的降解和穿透能力，是研究癌細(xì)胞侵襲性的重要方法。

 

1、Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn) 

以下是實(shí)驗(yàn)步驟：

1）選擇合適孔徑（通常為8 µm）的Transwell插入物。在插入物的膜上均勻涂覆一層基質(zhì)膠（如Matrigel），模擬ECM。

2）將插入物放置在24孔板中，讓基質(zhì)膠在37°C下固化（通常需要30分鐘至1小時(shí)）。

3）用無菌PBS清洗培養(yǎng)的細(xì)胞。使用胰酶消化細(xì)胞，并加入含有無血清培養(yǎng)基的管中中止消化。計(jì)數(shù)細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞懸液至適當(dāng)濃度（例如1×105 cells/mL）。

4）向Transwell上室中添加適量的細(xì)胞懸液（通常為100-200 µL）。向下室添加含有化學(xué)引誘劑的培養(yǎng)基（通常為600-800 µL）。

5）將Transwell板放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24-72小時(shí)，以允許細(xì)胞侵襲。

6）孵育結(jié)束后，取出Transwell插入物。用無菌PBS輕輕清洗上室，去除未侵襲的細(xì)胞。用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室侵襲的細(xì)胞，固定時(shí)間通常為10-15分鐘。用PBS清洗并染色（如0.1%結(jié)晶紫染色或DAPI染色）。

7）用棉簽擦去上室膜上的未侵襲細(xì)胞。

8）使用顯微鏡觀察下室膜上的侵襲細(xì)胞，并拍攝圖像。計(jì)數(shù)多個(gè)視野中的侵襲細(xì)胞數(shù)，計(jì)算平均值。

9）匯總侵襲細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，繪制細(xì)胞侵襲圖。

 

結(jié)果圖展示：

 

三、注意事項(xiàng)

1）使用基質(zhì)膠時(shí)，需要在鋪膠前將槍頭和耗材置于4度冰箱中，以避免配膠時(shí)直接凝固。同時(shí)，鋪膠的厚度需要摸索，注意鋪膠過程不要產(chǎn)生氣泡，保持均勻，以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2）在制備細(xì)胞懸液前，可以讓細(xì)胞進(jìn)行12-24小時(shí)的血清饑餓，以去除血清的影響。消化細(xì)胞后，用PBS洗滌1-2遍，然后用無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

3）細(xì)胞懸液的量需要摸索，例如200μl加入Transwell小室，下層培養(yǎng)液一般加入600μl含15%FBS的培養(yǎng)基。注意避免在小室和下層培養(yǎng)液之間產(chǎn)生氣泡，因?yàn)闅馀輹?huì)減弱趨化作用。

4）在重復(fù)使用小室時(shí)，應(yīng)注意避免損傷小室膜，并在使用前檢查是否有裂縫。

5）在小室內(nèi)，細(xì)胞可能呈現(xiàn)非貼壁形態(tài)，而是圓形聚集成團(tuán)，這屬于正?，F(xiàn)象。

6）細(xì)胞接種時(shí)應(yīng)盡量均勻，建議沿著壁緩慢加入。