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在口服液體制劑的處方開(kāi)發(fā)中，為了避免藥物在貯存和使用期間受到微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)，常需添加一種或多種抑菌劑，抑菌劑主要通過(guò)影響微生物的生長(zhǎng)，或干擾代謝達(dá)到抑菌作用。

由于抑菌劑對(duì)細(xì)胞具有明確的毒性，用量超出一定范圍后，對(duì)人體可能產(chǎn)生安全性風(fēng)險(xiǎn)，但當(dāng)用量不足時(shí)也可能導(dǎo)致抑菌效力不合格，有微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。  

在產(chǎn)品開(kāi)發(fā)過(guò)程中，需要依靠抑菌效力檢查法篩選抑菌劑的種類和用量，該方法屬于微生物檢查法的一種，檢查周期較長(zhǎng)（一般要28天），菌種價(jià)格貴，因此，需要研發(fā)或?qū)嶒?yàn)人員格外關(guān)注操作中的細(xì)節(jié)及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理性，以免導(dǎo)致時(shí)間和資源的浪費(fèi)。

目前，各國(guó)藥典均有關(guān)于“抑菌效力檢查”的專論，如《中國(guó)藥典》（2025版四部通則1121）、歐洲藥典（11.0版5.1.3）、美國(guó)藥典（43版，<51>和<1227>）和日本藥典（18版<8.05>和<制劑總則>）。其中，日本藥典關(guān)于抑菌效力的檢查方法比較分散，需要交叉查閱制劑總則、各論和附錄方法，并強(qiáng)調(diào)若制劑各論中無(wú)特殊要求，默認(rèn)參考<8.05>方法和歐洲藥典/美國(guó)藥典的標(biāo)準(zhǔn)。各國(guó)藥典中對(duì)不同劑型的抑菌效力的標(biāo)準(zhǔn)幾乎一致。

當(dāng)然，目前申報(bào)國(guó)內(nèi)仿制藥或創(chuàng)新藥的抑菌效力檢查都要嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》（2025版四部通則1121）執(zhí)行。結(jié)合對(duì)藥典中抑菌效力檢查法和抑菌效力檢查試驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)抑菌效力檢查的方法及應(yīng)該注意的細(xì)節(jié)進(jìn)行梳理。

一、基本原則

首先，在藥品生產(chǎn)過(guò)程中，抑菌劑不能用于替代藥品生產(chǎn)的GMP管理，不能作為非無(wú)菌制劑降低微生物污染的唯一途徑，也不能作為控制多劑量包裝制劑滅菌前的生物負(fù)載的手段。所有抑菌劑都具有一定的毒性，制劑中抑菌劑的量應(yīng)為最低有效量。同時(shí)，為保證用藥安全，成品制劑中的抑菌劑有效濃度應(yīng)低于對(duì)人體有害的濃度。

簡(jiǎn)單理解，不可因?yàn)楫a(chǎn)品中添加了抑菌劑，成品微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)較低而降低生產(chǎn)中GMP的管理。在保證抑菌效力合格的條件下，制劑中的抑菌劑用量越少越好，尤其對(duì)于兒童用藥，抑菌劑的用量一定要有充分的支持性數(shù)據(jù)或安全性數(shù)據(jù)。

二、培養(yǎng)基和菌種

一般情況下，抑菌效力檢查所用的菌種為金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌和黑曲霉。當(dāng)產(chǎn)品為口服制劑的時(shí)候，要增加對(duì)大腸埃希菌的抑菌效力檢測(cè)。需要特別注意的是，當(dāng)開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品含高濃度糖的口服制劑還應(yīng)選用魯氏酵母為試驗(yàn)菌株。

抑菌效力檢查用到的4種培養(yǎng)基分別為胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。其中，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和大腸埃希菌需要接種在胰酪大豆胨液體或瓊脂培養(yǎng)基；白色念珠菌和黑曲霉需要接種在沙氏葡萄糖液體或瓊脂培養(yǎng)基中。

三、培養(yǎng)基適用性檢查

對(duì)于商品化的預(yù)制培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查。培養(yǎng)基的適用性檢查，簡(jiǎn)單說(shuō)，就是確認(rèn)所選菌種可以在培養(yǎng)基上良好地生長(zhǎng)。適用性檢查通過(guò)后，才能進(jìn)一步說(shuō)明后續(xù)的抑菌效力試驗(yàn)確實(shí)是抑菌劑發(fā)揮了抑制菌種生長(zhǎng)的功能。

若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對(duì)照培養(yǎng)基上菌落平均數(shù)的50%，且菌落形態(tài)大小與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。

四、抑菌效力檢查

首先要了解抑菌效力檢查的目的是模擬貯藏和使用期間產(chǎn)品可能接觸到各類微生物的情況。如多劑量產(chǎn)品在使用中需要多次開(kāi)啟，給藥器具可能多次接觸患者或外部空氣，引入各類微生物的風(fēng)險(xiǎn)要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于產(chǎn)品本身的微生物負(fù)荷。

此外，抑菌效力可能受試驗(yàn)用容器特征的影響，如容器的材質(zhì)、形狀、體積及封口的方式等。因此，只要供試品每個(gè)包裝容器的裝量足夠試驗(yàn)用，一般應(yīng)將試驗(yàn)菌直接接種于供試品原包裝容器中進(jìn)行試驗(yàn)。此外，藥典要求每一個(gè)容器接種一種試驗(yàn)菌，1g或1ml供試品中接菌量為105～106cfu，接種菌液的體積不得超過(guò)供試品體積的1%。觀察不同時(shí)間點(diǎn)菌種的生長(zhǎng)情況。

在做抑菌效力檢查前，需要對(duì)存活菌數(shù)測(cè)定方法的適用性進(jìn)行驗(yàn)證，照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法(通則1105)”進(jìn)行，方法適用性試驗(yàn)試驗(yàn)菌的回收率不得低于50%。這是保證后續(xù)結(jié)果準(zhǔn)確性必不可少的試驗(yàn)。

五、抑菌效力的標(biāo)準(zhǔn)

中國(guó)藥典對(duì)于不同劑型的抑菌效力檢查方法雖然一致，但標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)劑型的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行劃分的。以口服制劑為例，最關(guān)鍵的在14天時(shí)，菌落下降的數(shù)量級(jí)要達(dá)到要求，且在之后的14天內(nèi)，試驗(yàn)菌的數(shù)量增加不能超過(guò)0.5個(gè)lg值。

六、抑菌效力檢查常忽略的細(xì)節(jié)

上述的梳理有利于我們非微生物崗位人員更好地理解抑菌效力檢查的原理和過(guò)程。雖然中國(guó)藥典對(duì)于抑菌效力檢查描述的非常詳細(xì)，但我們很多企業(yè)在實(shí)際操作中還是經(jīng)常出現(xiàn)不合格的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象最會(huì)往往被證明與我們的抑菌劑或處方?jīng)]有關(guān)系，而是試驗(yàn)中的細(xì)節(jié)或操作導(dǎo)致。

我們常遇見(jiàn)的問(wèn)題是同樣的處方工藝，某一次的抑菌效力不合格，再?gòu)?fù)測(cè)一次可能就達(dá)到要求了。這種情況，不能簡(jiǎn)單地提高抑菌劑的用量，而是要去分析兩次試驗(yàn)的異同情況。有時(shí)候不排除是我們加入的菌種濃度有差異導(dǎo)致的。藥典要求每一個(gè)容器接種一種試驗(yàn)菌，1g或1ml供試品中接菌量為105～106cfu，但因?yàn)榫N首先要被稀釋成108cfu/ml，后再被稀釋至105～106cfu/ml，因此最終到供試品中的實(shí)際菌種濃度差異可能太大。導(dǎo)致了最終抑菌效力結(jié)果的不同。

在實(shí)際操作中，出現(xiàn)兩次結(jié)果不一致的另一個(gè)原因常常是供試品中的菌液加樣體積差異太大導(dǎo)致的誤差。常規(guī)操作中，一般將菌液濃度從108稀釋至105~106（100~1000倍）時(shí)，一般會(huì)根據(jù)供試品的裝量確定移取的菌液體積，如100ml供試品一般直接移取1ml菌液，若供試品為50ml，一般直接移取0.5ml菌液。這種體積的差異對(duì)結(jié)果的影響是比較大的。當(dāng)然，藥典規(guī)定了接種菌液的體積不得超過(guò)供試品體積的1%。

此外，中國(guó)藥典雖然明確了抑菌效力的檢查方法，但也明確在做抑菌效力檢查前，需要對(duì)存活菌數(shù)測(cè)定方法的適用性進(jìn)行驗(yàn)證，照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法(通則1105)”進(jìn)行，方法適用性試驗(yàn)試驗(yàn)菌的回收率不得低于50%。在保障了存活菌數(shù)方法有效的前提下，才可評(píng)價(jià)產(chǎn)品的抑菌效力了。

在做抑菌效力的過(guò)程中，我們還發(fā)現(xiàn)對(duì)于一些高粘度的產(chǎn)品，藥液和菌液混合不均勻，導(dǎo)致局部藥液的菌種濃度過(guò)高，而抑菌劑的濃度則相對(duì)較低，最終導(dǎo)致抑菌效力不合格。

七、結(jié)語(yǔ)

以上是我們?cè)谧鲆志Яz查中常遇見(jiàn)的問(wèn)題，希望對(duì)大家的抑菌效力研究提供一些思路。抑菌效力的總體原則是為了篩選合適的抑菌劑種類和用量，確保產(chǎn)品在貯藏和使用中沒(méi)有微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)，也不會(huì)因?yàn)橐志鷦┑挠昧窟^(guò)高導(dǎo)致安全性風(fēng)險(xiǎn)。