近年來，有關食品添加劑的安全問題引起了企業(yè)與消費者的廣泛關注，其中酸性橙Ⅱ被列為禁用物質(zhì)，被嚴禁添加到食品中，因為酸性橙Ⅱ在偶氮還原酶的作用下會分解產(chǎn)生1-氨基-2-萘酚，這種物質(zhì)具有嚴重的毒性。其次，酸性橙Ⅱ可能導致食物中毒，長期食用甚至可能致癌。此外，酸性橙Ⅱ還可能影響生育，例如導致不孕或畸形兒的發(fā)生。因此，監(jiān)管機構應加強對食品生產(chǎn)和銷售企業(yè)的監(jiān)管，以確保公眾健康不受危害。
然而，隨著食品工業(yè)的快速發(fā)展，食品添加劑的使用難以避免且越來越廣泛。食品用合成著色劑日落黃作為我國批準使用的食品添加劑，主要用于食品和藥物的著色，也可用于制造鋁鹽色淀顏料，常用于果醬、固體飲料、復合調(diào)味料中。日落黃與酸性橙Ⅱ在結(jié)構上極其相似（見圖1），日落黃是對氨基苯磺酸重氮化后與2-萘酚-6-磺酸偶合而得的；酸性橙Ⅱ是雙氨基苯磺酸鈉重氮化后與2-萘酚偶合、鹽析而得的。而2-萘酚-6-磺酸又是由2-萘酚磺化而得的，如果生產(chǎn)日落黃的企業(yè)使用的原料2-萘酚-6-磺酸中含有2-萘酚，其日落黃產(chǎn)品中就極大可能含有酸性橙Ⅱ，然而日落黃生產(chǎn)廠家并未對出廠產(chǎn)品中酸性橙Ⅱ進行檢測。因此，檢測日落黃中的酸性橙Ⅱ是很有必要的，既是對日落黃生產(chǎn)企業(yè)負責，也是對消費者負責。
目前，食品中酸性橙Ⅱ的檢測方法有高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，但是食品用合成著色劑日落黃中的酸性橙Ⅱ檢測還未有完善的方法。研究人員采用液相色譜法測定日落黃中酸性橙Ⅱ的含量，并輔以高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法定性，可為日落黃中酸性橙Ⅱ的檢測提供一種解決方案。
01試驗方法
稱取樣品置于離心管中，準確加入水，渦旋，超聲，過聚四氟乙烯濾膜，按照儀器工作條件測定。部分樣品含量較高，需要稀釋后測定。
02結(jié)果與討論
2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化
以酸性橙Ⅱ的相對分子質(zhì)量為基礎，在SIM掃描模式下，切換正離子（ESI+）、ESI−模式，結(jié)果顯示，在 ESI−模式下酸性橙Ⅱ響應最高，進而獲得酸性橙Ⅱ的母離子m/z和碎裂電壓，并通過Product Ion（生成離子）獲得子離子m/z和碰撞能量等。質(zhì)譜方法用于在日落黃中酸性橙Ⅱ的定性分析，以防止液相色譜定量檢測因處理方法簡單而出現(xiàn)雜質(zhì)干擾誤判。
2.2 色譜條件的優(yōu)化
日落黃作為工業(yè)產(chǎn)品，其合成工藝復雜，容易產(chǎn)生各種副產(chǎn)物，考慮到其可能存在很多雜質(zhì)，試驗對比了 ShimNex C18色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）和Agilent Poroshell EC-C18色譜柱（150mm×4.6mm，2.7μm）對目標物酸性橙Ⅱ的出峰時間及其與雜峰分離的情況。結(jié)果表明：酸性橙Ⅱ的出峰時間依次為15.01，14.69min，差別不大；酸性橙Ⅱ與雜質(zhì)的分離度都大于1.5，都可以很好地分離。綜合考慮，試驗選擇ShimNex C18色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）用于定量分析，Agilent Poroshell EC-C18色譜柱（150mm×4.6mm，2.7μm）用于定性分析。
樣品溶液中酸性橙Ⅱ、日落黃和酸性橙Ⅱ混合標準使用液中日落黃和酸性橙Ⅱ的色譜圖和光譜圖見圖2。日落黃與酸性橙Ⅱ能很好分離，樣品中檢出的酸性橙Ⅱ可通過其色譜峰光譜圖與標準品光譜圖對照，如果一致可判斷出樣品中可能含有酸性橙Ⅱ。
2.3 定量分析方法考察
2.3.1 線性參數(shù)、檢出限和測定下限
按照色譜定量分析條件測定酸性橙Ⅱ標準溶液系列，以酸性橙Ⅱ的質(zhì)量濃度為橫坐標，對應的色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線。結(jié)果表明，酸性橙Ⅱ標準曲線的線性范圍為0.02~20.0mg·L−1，線性回歸方程為y=4.136×104x+2.830×102，相關系數(shù)為0.9999。
以信噪比 (S/N) 大于3計算方法檢出限，以信噪比大于10計算方法測定下限，結(jié)果分別為0.001，0.005g·kg−1。
2.3.2 精密度和回收試驗
按照試驗方法對陰性日落黃樣品進行4個濃度水平的加標回收試驗，每個濃度水平測定6次，計算回收率和測定值的相對標準偏差（RSD），結(jié)果見表1。
由表1可知，酸性橙Ⅱ的回收率為91.9%~ 94.5%，測定值的RSD小于 5.0%，說明方法準確度和精密度良好，可應用于日落黃中酸性橙Ⅱ的檢測。
2.4 定性分析
將經(jīng)過液相色譜定量檢測的樣品提取液稀釋至酸性橙Ⅱ的質(zhì)量濃度為200μg·L−1，進而降低日落黃的相對濃度水平，對質(zhì)譜儀器更加友好。在試驗條件下測定酸性橙Ⅱ標準溶液和上述樣品稀釋溶液。若樣品稀釋溶液中檢出色譜峰的保留時間與相應的酸性橙Ⅱ標準溶液色譜峰的保留時間一致，且樣品稀釋溶液的質(zhì)譜離子對相對豐度與對應濃度水平的酸性橙Ⅱ標準溶液的質(zhì)譜離子對相對豐度相比較，相對豐度的相對偏差符合國家標準GB 31656. 7— 2021《食品國家安全標準 水產(chǎn)品中氯硝柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》規(guī)定的范圍（當相對豐度大于50% 時，允許的相對偏差絕對值為20%；當相對豐度為 [20%，50%] 時，允許的相對偏差絕對值為25%；當相對豐度為 (10%，20%) 時，允許的相對偏差絕對值為 30%；當相對豐度不大于10% 時，允許的相對偏差絕對值為 50%），則可判定日落黃中存在酸性橙Ⅱ。
2.5 樣品分析
按照試驗方法分析10批食品添加劑日落黃樣品，測定其中酸性橙Ⅱ的含量，結(jié)果見表2。
由表2可知，10批樣品中均檢出酸性橙Ⅱ，檢出量為0.26~8.46g·kg−1，還發(fā)現(xiàn)酸性橙Ⅱ的測定值與日落黃的純度沒有相關關系。
03試驗結(jié)論
研究人員采用超聲輔助溶解日落黃樣品，用液相色譜法定量分析其中的酸性橙Ⅱ，同時輔以高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行定性確證。方法能檢測日落黃中的酸性橙Ⅱ，使得雜質(zhì)與目標物分離度大于1.5，保證檢測結(jié)果的準確度；輔以質(zhì)譜法定性，能有效減小因為色譜分離不夠或者存在峰包裹的情況出現(xiàn)假陽性的概率。方法前處理簡單，可快速檢測日落黃中酸性橙Ⅱ，可為日落黃中酸性橙Ⅱ的測定提供技術選擇。
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