您當(dāng)前的位置：檢測(cè)資訊 > 法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)
嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2025-09-01 21:49
摘 要： 利用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）檢測(cè)技術(shù)10 min快速測(cè)定三七中56種農(nóng)藥殘留的分析方法。樣品經(jīng)乙腈直接提取，采用Agilent 7890B/7000C型氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀及HP-5MS UI（20 m×0.18 mm，0.18 μm）毛細(xì)色譜柱方法運(yùn)行10 min測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。該方法中56種農(nóng)藥在質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01～0.8 mg/kg內(nèi)與對(duì)應(yīng)的色譜峰面積具有良好的線性相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)均大于0.998；在0.02、0.06、0.20 mg/kg 3個(gè)質(zhì)量濃度水平下做加標(biāo)試驗(yàn)，加標(biāo)回收率為69.4%～116.7%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%（n=6），檢出限為0.01 mg/kg。該方法大大縮短了儀器分析時(shí)間，為快速測(cè)定多農(nóng)殘方法開發(fā)提供依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。
關(guān)鍵詞： 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法； 農(nóng)藥殘留； 三七； 快速測(cè)定
三七為五加科植物三七的干燥根和根莖[1]，因其播種后三至七年挖采而且每株長(zhǎng)三個(gè)葉柄，每個(gè)葉柄生七個(gè)葉片，故名“三七”。三七喜溫暖而陰濕的環(huán)境，怕嚴(yán)寒和酷暑，容易引起細(xì)菌滋生和病蟲害[2]。隨著近幾年中藥材需求量大幅增長(zhǎng)，人工栽培技術(shù)不斷進(jìn)步[3?4]，三七生長(zhǎng)過程不可避免地會(huì)使用農(nóng)藥。目前，三七中農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法有氣相色譜法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等，三七中多種農(nóng)藥殘留的儀器測(cè)定方法都在20 min及以上[5?10]，工作量較大。筆者采用Agilent 7890B/7000C型氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀及HP-5MS UI (20 m×0.18 mm，0.18 μm)毛細(xì)色譜柱運(yùn)行10 min測(cè)定三七中56種農(nóng)藥殘留，大大縮短了儀器分析時(shí)間，可為快速測(cè)定多種農(nóng)藥殘留方法開發(fā)提供依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 主要儀器與試劑
氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀：7890B/7000C型，配有電子轟擊(EI)源，美國(guó)安捷倫科技有限公司。
渦旋振蕩器：Multi Reax型、Reax top型，德國(guó)海道爾夫儀器設(shè)備(上海)有限公司。
全自動(dòng)氮吹儀：N1-50型，上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司。
冷凍臺(tái)式離心機(jī)：X3R型，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。
電子分析天平：XSE105型，感量為0.1 mg，德國(guó)METTLER TOLEDO公司。
超聲波清洗器：IDH30型，德國(guó)愛安姆科技有限公司。
Milli-Q超純水系統(tǒng)：美國(guó)密理博公司。
移液器：100～1 000 μL，法國(guó)GILSEN公司。
乙腈、乙酸乙酯：均為色譜純，諾爾施科技有限責(zé)任公司。
外環(huán)氧七氯：10 mg，德國(guó)Dr. E公司。40種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：質(zhì)量濃度均為100 μg/mL，產(chǎn)品號(hào)為1ST021943-100B，天津阿爾塔科技有限公司。
吡唑醚菌酯、烯酰嗎啉、久效磷、殺螟硫磷、二嗪磷、氟氰戊菊酯、三唑酮、三唑醇、乙烯菌核利、嘧霉胺、氟胺氰菊酯、異菌脲、五氯硝基苯、丙環(huán)唑、咯菌腈、啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)品：編號(hào)分別為25311YB、22145YB、4195YB、22809YB、21753YB、22965YB、26131YB、26133YB、26491YB、25361YB、23063YB、23565YB、24763YM、25235YB、22967XA、20689YA，質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，北京曼哈格生物科技有限公司。三七樣品：市售。
1.2 儀器工作條件
1.2.1 色譜儀
色譜柱：HP-5MS UI毛細(xì)管柱 (20 m×0.18 mm，0.18 μm，美國(guó)安捷倫科技有限公司)；進(jìn)樣體積：1.0 μL；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；分流比：不分流；柱流量：1.05 mL/min；升溫程序：初始溫度60 ℃保持0.5 min，以80 ℃/min升溫至170 ℃，然后以20 ℃/min升溫至310 ℃，保持2 min。1.2.2 質(zhì)譜儀離子源溫度：280 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；溶劑延遲：3 min；采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)。56種農(nóng)藥名稱、保留時(shí)間、前級(jí)離子、產(chǎn)物離子、碰撞能量參數(shù)見表1。
表1 56種農(nóng)藥及其質(zhì)譜參數(shù)
Tab. 1 56 kinds of pesticides and their mass spectrum parameters
1.3 溶液配制
56種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：分別精密量取16種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品100 μL于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容后得到質(zhì)量濃度為10 μg/mL的16種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密量取40種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品100 μL及16種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 mL于同一10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容后得到各組分質(zhì)量濃度均為1 μg/mL的56種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。
內(nèi)標(biāo)工作溶液：準(zhǔn)確稱取10.08 mg外環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容，得到質(zhì)量濃度為990.36 μg/mL的環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。取環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5 mL于25 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至25 mL，得到質(zhì)量濃度為19.807 2 μg/mL的環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)工作溶液。
基質(zhì)匹配系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別取同樣品處理后的4 mL陰性基質(zhì)樣品于8只15 mL離心管中，于40 ℃氮吹至干后，分別加入56種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80 mL，用乙酸乙酯定容至1.00 mL，分別加入50 μL環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)混勻后，得到各組分質(zhì)量濃度均分別為10、20、50、100、200、400、600、800 μg/L的基質(zhì)匹配系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法
1.4.1 樣品處理
取三七樣品粉碎過150 μm (100目)篩后，稱取5.0 g三七粉于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈，振搖30 min，以4 700 r/min離心5 min后取出上清液4 mL，于40 ℃氮吹至近干后用乙酸乙酯定容至1 mL，加入50 μL質(zhì)量濃度為20 μg/mL環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)溶液混勻后，過0.2 μm有機(jī)濾膜后作為樣品溶液上機(jī)測(cè)定。1.4.2 樣品測(cè)定將基質(zhì)匹配系列混合準(zhǔn)工作溶液和樣品溶液按照儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定，以保留時(shí)間和定性離子定性，定量離子色譜峰面積內(nèi)標(biāo)法定量。
2 結(jié)果與討論
2.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化
選擇安捷倫MRM農(nóng)殘數(shù)據(jù)庫(kù)中響應(yīng)最高的3對(duì)離子對(duì)來定性定量這56種農(nóng)藥。通過安捷倫Qualitative Analysis B.07.00定性軟件確定56種農(nóng)藥的保留時(shí)間，保留時(shí)間確定后發(fā)現(xiàn)10 min條件下各農(nóng)藥的保留時(shí)間剛好是傳統(tǒng)20 min的一半。同時(shí)對(duì)部分農(nóng)藥的離子對(duì)進(jìn)行了優(yōu)化，比如，殺螟硫磷的離子對(duì)m/z 125.1、47.0和m/z 125.1、79.0豐度雖然高，但是在多種農(nóng)藥殘留測(cè)定時(shí)有干擾，因此選擇離子對(duì)m/z 277.0、260.0和m/z 277.0、109.0；異菌脲的離子對(duì)選擇m/z 243.9、187.0時(shí)基線不平，會(huì)導(dǎo)致積分定量不準(zhǔn)確，因此選擇m/z 313.8、244.9和m/z 313.8、55.9。結(jié)合MRM數(shù)據(jù)庫(kù)離子對(duì)、駐留時(shí)間、左右變化量以及基質(zhì)標(biāo)點(diǎn)，得到最優(yōu)質(zhì)譜參數(shù)條件見表1，三七基質(zhì)標(biāo)點(diǎn)總離子流圖見圖1。
圖1 三七中56種農(nóng)藥總離子流圖
Fig. 1 The TIC of the 56 pesticides in ginseng powder
2.2 基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)(白菜基質(zhì)與三七基質(zhì)結(jié)果比較)
有文獻(xiàn)表明三七中農(nóng)藥殘留測(cè)定存在基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線來定量[11?14]。在三七樣品中農(nóng)藥殘留未知的情況下，采用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的白菜陰性基質(zhì)來初篩，獲得三七陰性樣品，因此，采用大白菜基質(zhì)和三七陰性樣品基質(zhì)分別對(duì)市售三七中農(nóng)藥殘留定量，結(jié)果見表2。經(jīng)t檢驗(yàn)P＞0.05，兩種方法測(cè)定三七中農(nóng)藥殘留無顯著性差異[15]。
表2 某市售三七白菜基質(zhì)與三七基質(zhì)定量結(jié)果比較
Tab. 2 Comparison of quantitative results between Chinese cabbage matrix and Notoginseng matrix in a city
2.3 方法學(xué)性能指標(biāo)驗(yàn)證
基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中各組分在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01～0.8 mg/kg內(nèi)與對(duì)應(yīng)的色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.998以上，利用Agilent MassHunter定量分析軟件結(jié)合信噪比大于3，確定該方法的檢出限為0.01 mg/kg。在三七陰性樣品基質(zhì)中添加0.02、0.06、0.2 mg/kg水平的56種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，分別測(cè)定6次，結(jié)果見表3。由表3可知，各組分的加標(biāo)回收率為69.4%～116.7%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于10%，回收率和精密度均能滿足GB 5009.295—2023《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 化學(xué)分析方法驗(yàn)證通則》的要求。
表3 測(cè)定56種農(nóng)藥的線性相關(guān)系數(shù)、回收率、精密度及檢出限(n=6)
Tab. 3 Determination of linear correlation coefficient，recovery rate，precision and detection limit of 56 pesticides(n=6)
2.4 兩根色譜柱測(cè)定結(jié)果比較
通過查詢文獻(xiàn)[2，5-9，13]，目前用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定多種農(nóng)藥殘留的方法運(yùn)行時(shí)間都在20 min以上，大多數(shù)采用的是DB-5MS/HP-5MS毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm） 20 min以上程序升溫。為了驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性和適用性，將兩根色譜柱的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，無顯著性差異，從圖2、圖3的帶狀可以很形象地體現(xiàn)出來。
圖2 三七樣品中16種農(nóng)藥殘留測(cè)定結(jié)果對(duì)比圖
Fig. 2 Comparison of the determination results of 16 pesticide residues in Panax notoginseng samples
圖3 三七樣品中19種農(nóng)藥殘留測(cè)定結(jié)果對(duì)比圖
Fig. 3 Comparison of the determination results of 19 pesticide residues in Panax notoginseng samples
3 結(jié)語(yǔ)
利用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)建立了一種10 min快速測(cè)定三七中56種農(nóng)藥殘留的方法。通過方法學(xué)驗(yàn)證以及與常用的多農(nóng)殘測(cè)定用氣相色譜柱進(jìn)行比較，結(jié)果均能滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。該方法簡(jiǎn)單、快速，可為三七中多農(nóng)殘快速測(cè)定方法建立提供數(shù)據(jù)參考。
參考文獻(xiàn)
1 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2020年版）：一部［M］.北京：中國(guó)科技醫(yī)藥出版社，2020.
National Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China（2020 Edition）： Part Ⅰ［M］. Beijing： China Medical Science and Technology Press，2020.
2 王一帆，吳易峰，徐敦明，等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定三七中212種農(nóng)藥殘留［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2023，42（10）： 1 251.
WANG Yifan，WU Yifeng，XU Dunming，et al. Simultaneous determination of 212 pesticide residues in panax notoginseng by gas chromatography-tandem mass spectrometry［J］. Journal of Instrumental Analysis，2023，42（10）： 1 251.
3 余文康，董玲，裴文軒，等.基于中藥質(zhì)量樹的中藥飲片全程質(zhì)量控制和管理系統(tǒng)的開發(fā)［J］.中國(guó)中藥雜志，2017，42（23）： 4 488.
YU Wenkang，DONG Ling，PEI Wenxuan，et al. Development of whole process quality control and management system of traditional Chinese medicine decoction pieces based on traditional Chinese medicine quality tree［J］. China Journal of Chinese Materia Medica，2017，42（23）： 4 488.
4 李夢(mèng)，侯旭粲，張麗麗，等.中草藥種植品質(zhì)知識(shí)圖譜的構(gòu)建［J］.世界中醫(yī)藥，2020，15（18）： 2 675.
LI Meng，HOU Xucan，ZHANG Lili，et al. Construction of knowledge graph of Chinese medicine planting quality［J］. World Chinese Medicine，2020，15（18）： 2 675.
5 方翠芬，唐登峰，鄭成. GC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定三七片和三七膠囊中24種農(nóng)藥殘留量［J］.西北藥學(xué)雜志，2017，32（6）： 690.
FANG Cuifen，TANG Dengfeng，ZHENG Cheng. The residues of 24 pesticides in Sanqi Tablets and Sanqi Capsules were determined by GC-MS/MS ［J］.西北藥學(xué)雜志，2017，32（6）： 690.
6 張赟赟，覃潔萍. GC-MS用于廣西三七炮制品中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留測(cè)定方法的研究［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2014（5）： 19.
ZHANG Binbin，QIN Jieping. GC-MS for organochlorine pesticides residues in Guangxi notoginseng processed products research method［J］. Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2014（5）： 19.
7 李彥生，劉建輝，張婷，等. QuEChERS-氣相色譜質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定三七中20種農(nóng)藥殘留［J］.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2018，9（21）： 5 725.
LI Yansheng，LIU Jianhui，ZHANG Ting，et al. Determination of 20 kinds of pesticide residues in Panax notoginseng by QuEChERS-gas chromatography-mass spectrometry［J］. Journal of Food Safety & Quality，2018，9（21）： 5 725.
8 馮紅，李金柱，肖踐麗，等.三七藥材禁用農(nóng)藥殘留的檢測(cè)研究［J］.藥物分析雜志，2022，42（11）： 1 980.
FENG Hong，LI Jinzhu，XIAO Zhanli，et al. Determination of prohibited pesticide residues in traditional Chinese medicines Notoginseng Radix et Rhizoma［J］. Chin J Pharm Anal，2022，42（11）： 1 980.
9 趙立蘋，王科飛，鄭鈺，等.中藥材三七中203種農(nóng)藥殘留檢測(cè)［J］.中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化，2018（z1）： 210.
ZHAO Liping，WANG Kefei，ZHENG Yu，et al. Determination of 203 pesticides residues in Panax Notoginseng［J］. China Standardization，2018（z1）： 210.
10 魏丹，國(guó)明.磁性親水親脂平衡萃取材料輔助基質(zhì)固相分散萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定中藥材中76種農(nóng)藥殘留［J］.色譜，2022，40（4）： 313.
WEI Dan，GUO Ming. Simultaneous determination of 76 pesticide residues in the traditional Chinese medicine by magnetic hydrophilic-lipophilic-balanced materials assisted matrix solid phase dispersion extraction-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry［J］. Chinese Journal of Chromatography，2022，40（4）： 313.
11 鄧永麗. QuEChERS-氣相色譜質(zhì)譜法快速檢測(cè)三七等中藥材中部分有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法研究［D］.大理：大理大學(xué)，2019.
DENG Yongli. QuEChERS-Gas chromatography mass spectrometry for rapid detection of organophosphorus pesticide residues in Panax notoginseng and other traditional Chinese medicines［D］. Dali：Dali University，2019.
12 李家春，伍靜玲，秦建平，等.基于QuEChERS法-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的5種中藥材中35種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的快速分析［J］.藥物分析雜志，2016，36（1）： 122.
LI Jiachun，WU Jingling，QIN Jianping，et al. Rapid determination of 35 organophosphorus pesticide residues in five kinds of traditional Chinese medicines by QuEChERS and UPLC-MS/MS［J］. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis，2016，36（1）： 122.
13 邵林，李福敏，孫鋼，等.氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合QuEChERS測(cè)定三七中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留［J］.分析試驗(yàn)室，2020，39（4）： 459.
SHAO Lin，LI Fumin，SUN Gang，et al. Simultaneous determination of organophosphorus pesticide residues in panax notoginseng by gas chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry with QuEChERS［J］. Chinese Journal of Analysis Laboratory，2020，39（4）： 459.
14 程志，張蓉，劉韋華，等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速篩查測(cè)定中藥材中144種農(nóng)藥殘留［J］.色譜，2014，32（1）： 57.
CHENG Zhi，ZHANG Rong，LIU Weihua，et al. Rapid screening and quantitative analysis of 144 pesticide residues in traditional Chinese medicinal herbs by gas chromatography-tandem mass spectrometry［J］. Chinese Journal of Chromatography，2014，32（1）： 57.
15 羅玥，成桂紅，鐘紅霞，等.氣相色譜直接進(jìn)樣法與頂空進(jìn)樣法測(cè)定白酒中甲醇的比較［J］.中國(guó)釀造，2017，36（8）： 161.
LUO Yue，CHENG Guihong，ZHONG Hongxia，et al. Comparison of direct injection and headspace injection method in determination of methanol in Baijiu［J］. China Brewing，2017，36（8）： 161.
18 董林林，張照宇，劉叢盛，等.以人參和三七為例淺析品質(zhì)中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2022，15（12）： 2 289.
DONG Linin，ZHANG Zhaoyu，LLIU Congsheng，et al. Analysis on the present situation of the qualitative standards of quality Chinese medicinal materials as examples of Panax ginseng and Panax notoginseng［J］. Global Chinese Medicine，2022，15（12）： 2 289.
19 曾鴻超，張文斌，趙愛，等.三七中五氯硝基苯殘留檢測(cè)方法研究［J］.文山學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，28（6）： 4.
ZENG Hongchao，ZHANG Wenbin，ZHAO Ai，et al. A study on the detection method of PCNB residue in panax notoginseng［J］. Journal of Wenshan University，2015，28（6）： 4.
來源：化學(xué)分析計(jì)量
關(guān)于我們 聯(lián)系我們 營(yíng)業(yè)執(zhí)照 全國(guó)服務(wù)電話：400-818-0021 嘉峪檢測(cè)版權(quán)所有 備案號(hào)：京ICP備14047019號(hào)-2 
京公網(wǎng)安備11010802046783號(hào)
