以下亞硝胺雜質(zhì)的相關(guān)總結(jié)，主要是參考FDA的文件《Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs Guidance for Industry（人用藥物中亞硝胺雜質(zhì)的控制行業(yè)指南）》和《Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs) Guidance for Industry（亞硝胺類藥物雜質(zhì)（NDSRIs）推薦可接受攝入量限度行業(yè)指南，RAIL 指南）》進(jìn)行的，對(duì)亞硝胺雜質(zhì)的分類、形成脈絡(luò)、相關(guān)雜質(zhì)的控制限度、以及可能的控制措施進(jìn)行了一個(gè)總結(jié)。目前國(guó)內(nèi)還頒布了《化學(xué)藥物中亞硝胺類雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》，在CDE的審批過(guò)程中，也與對(duì)該項(xiàng)進(jìn)行過(guò)多次發(fā)補(bǔ)，故也是我們藥品開發(fā)過(guò)程中需要重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容。
01亞硝胺雜質(zhì)的分類：
現(xiàn)在普遍存在的亞硝胺類雜質(zhì)，主要是分為兩種結(jié)構(gòu)類別，一類是小分子亞硝胺類雜質(zhì)，還有一類是亞硝胺藥物物質(zhì)相關(guān)雜質(zhì)(NDSRIs)。
1.1 小分子亞硝胺類雜質(zhì)：該類雜質(zhì)與藥物的結(jié)構(gòu)相關(guān)性不高，可能存在與多種藥物中。目前主要包含N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）、N-亞硝基二異丙胺（NDIPA）、N-亞硝基異丙基乙胺（NIPEA）、N-亞硝基二丁胺（NDBA）和 N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA），結(jié)構(gòu)式詳見(jiàn)圖1。
▲圖1-小分子亞硝胺雜質(zhì)結(jié)構(gòu)圖
1.2 NDSRIs：該類雜質(zhì)與藥物活性成分（API）的結(jié)構(gòu)相關(guān)的亞硝胺類雜質(zhì)（化學(xué)結(jié)構(gòu)中一般含有API或者API的片段，對(duì)于每一種API來(lái)說(shuō)都是不一樣的），一般是API在合成、儲(chǔ)存過(guò)程中產(chǎn)生。與小分子亞硝胺的典型區(qū)別在于是否與藥物中的活性成分的結(jié)構(gòu)相似性。
02亞硝胺雜質(zhì)形成的原因
亞硝胺[（R1N(-R2)-N=O）]是一類亞硝基與胺基結(jié)合形成的化合物，如圖2所示，這些胺類[仲胺（二級(jí)胺）、叔胺（三級(jí)胺）和季胺（四級(jí)胺）]的化合物與亞硝酸（一般是酸性條件下的亞硝酸鹽）之間進(jìn)行亞硝化反應(yīng)，生成亞硝胺類的雜質(zhì)。還有一種情況是1,1-二取代肼類化合物，該類化合物可以被氧化，從而形成亞硝胺。
▲圖2-形成亞硝胺的代表性反應(yīng)（二級(jí)胺）
在前體胺（二級(jí)、三級(jí)、四級(jí)胺或者亞硝酸鹽都被稱為前體胺）存在的情況下，若將疊氮化物作為引入四環(huán)唑或者疊氮基團(tuán)的引入劑，當(dāng)采用亞硝酸作為殘留疊氮化物的猝滅劑的時(shí)候，亞硝胺類雜質(zhì)的產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)會(huì)被提高。
2.1 在藥物活性成分中，小分子亞硝胺類雜質(zhì)存在的原因
① 合成過(guò)程中，當(dāng)原材料、中間體、API（或者API的降解產(chǎn)物）、試劑或者催化劑中出現(xiàn)二級(jí)胺、三級(jí)胺或者四級(jí)胺，又同時(shí)存在亞硝酸（或者亞硝酸鹽與酸性條件）時(shí)，就會(huì)形成亞硝胺類雜質(zhì)。
② 酰胺溶劑在有些條件下會(huì)發(fā)生降解，就會(huì)產(chǎn)生二級(jí)胺（例如，高溫條件下N,N-二甲基甲酰胺會(huì)被降解為二甲胺）。二級(jí)胺（二甲胺）也可能作為雜質(zhì)存在于酰胺溶劑中。三級(jí)胺或者四級(jí)胺作為試劑，也可能會(huì)引入二級(jí)胺。
③ 供應(yīng)商采購(gòu)的原材料也可能帶來(lái)亞硝胺或者它的前體。比如：溶劑運(yùn)輸過(guò)程中，雜質(zhì)在存儲(chǔ)容器之間的轉(zhuǎn)移；API起始材料或者中間體在生產(chǎn)時(shí)，與其他工藝產(chǎn)生的亞硝胺雜質(zhì)的較差污染等，也是我們需要關(guān)注的點(diǎn)。
④ 回收使用的溶劑、試劑和催化劑也可能作為亞硝胺雜質(zhì)的來(lái)源，因?yàn)榛厥帐褂玫奈锪虾芸赡軙?huì)用于不同的生產(chǎn)工藝，可能帶來(lái)亞硝胺雜質(zhì)的交叉污染。
⑤ 缺乏工藝優(yōu)化和控制措施（例如在高溫干燥和氣流粉碎工藝中，空氣中的氮氧化物與活性成分中可能存在的二級(jí)胺、三級(jí)胺或者四級(jí)胺反應(yīng)，就會(huì)為亞硝胺的形成創(chuàng)造可能的條件）。
2.2 非藥物活性成分來(lái)源的藥物產(chǎn)品中的亞硝胺
① 輔料中引入（多種常用輔料中含有亞硝酸鹽、飲用水中也可能含有亞硝酸鹽）
② 包裝容器和制造設(shè)備也可能引入亞硝酸鹽或者亞硝胺類雜質(zhì)（因此在包材的可提取物或浸出物的研究中需要對(duì)此類雜質(zhì)進(jìn)行評(píng)估）
2.3 NDSRIs存在于藥物產(chǎn)品的根本原因
NDSRIs可在藥物產(chǎn)品的制造過(guò)程中或成品藥物產(chǎn)品的儲(chǔ)存期間產(chǎn)生。現(xiàn)在已知的根本原因有：
① 亞硝化雜質(zhì)（如輔料中的殘留亞硝酸鹽或藥物產(chǎn)品中存在的其他亞硝酸鹽），在某些條件下導(dǎo)致含有二級(jí)胺、三級(jí)胺或者四級(jí)胺的活性成分亞硝化產(chǎn)生NDSRIs。
② 從活性成分本身帶入的NDSRIs。（一般情況下，高水平的NDSRIs更多與藥物產(chǎn)品相關(guān)，因?yàn)槠渫ǔＪ怯伤幬锘钚猿煞峙c藥物產(chǎn)品中存在的亞硝酸鹽雜質(zhì)之間的反應(yīng)產(chǎn)生的，基于該原因，也會(huì)導(dǎo)致存儲(chǔ)期間的亞硝胺雜質(zhì)的增加）
03亞硝胺雜質(zhì)的控制限度
基于亞硝胺雜質(zhì)是可能或者疑似的人類致癌物，故我們需要對(duì)其進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)控制，常用AI（可接受攝入量）來(lái)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。ICH M7（R2）中定義的AI限度是基于藥物物質(zhì)（活性成品）和藥物產(chǎn)品中致突變雜質(zhì)的每日暴露量的保守假設(shè)，是在一生中（70年）使每100000名受試者中增加一例癌癥風(fēng)險(xiǎn)的近似水平。
特別注意：而ICH發(fā)布的行業(yè)指南《Q3A新藥原料中的雜質(zhì)》（2008年6月）以及《Q3B（R2）新藥制劑中的雜質(zhì)》（2006年8月）則適用于用于治療晚期癌癥的藥品中存在的亞硝胺雜質(zhì)。
確定AI限度值可以用以下方法進(jìn)行確認(rèn)：
3.1 當(dāng)特定亞硝胺化合物的可靠致癌性數(shù)據(jù)和其他安全信息（包括細(xì)菌致突變性數(shù)據(jù)）不可用時(shí)，F(xiàn)DA推薦使用預(yù)測(cè)致癌效力分類方法確定AI的限度。
FDA公布的RAIL指南中的預(yù)測(cè)致癌效力分類方法主要是適用于N-亞硝基基團(tuán)兩側(cè)各帶有碳原子的NDSRIs，其中碳不直接與雜原子雙鍵相連（即N-亞硝基酰胺、N-亞硝基脲、N-亞硝基胍和其他相關(guān)結(jié)構(gòu)除外）。此外，預(yù)測(cè)致癌性潛力分類方法不適用于氮亞硝基團(tuán)位于芳香環(huán)內(nèi)的N-亞硝基化合物(例如，亞硝化的吲哚)。對(duì)于含有2個(gè)亞硝化基團(tuán)的NDSRIs，應(yīng)使用預(yù)測(cè)致癌效力類別最高的組來(lái)確定整個(gè)分子的推薦AI限度。
該方法假設(shè)許多亞硝胺的致突變和高致癌反應(yīng)是由代謝激活的α-羥基化機(jī)制引起的。因此，直接增加或減少激活機(jī)制有利的結(jié)構(gòu)特征，或者通過(guò)其他生物途徑增加亞硝胺清除率的結(jié)構(gòu)特征，都會(huì)對(duì)致癌活性產(chǎn)生相應(yīng)的影響。
FDA基于NDSRIs的預(yù)測(cè)致癌效力分類方法，推薦了以下的AI限度。
▲表1- 五類預(yù)測(cè)致癌性效力分類及其對(duì)應(yīng)的NDSRIs推薦Al限度
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效力類別
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推薦的AI(ng/天)
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說(shuō)明
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1
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26.5
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建議的AI限值（26.5 ng/天*）等同于基于最強(qiáng)效且經(jīng)過(guò)充分測(cè)試的亞硝胺類物質(zhì)—N-亞硝基二乙胺（NDEA）的類別特定限值。此類別中的 NDSRIs被預(yù)測(cè)為具有不高于亞硝胺雜質(zhì)類別特定限值的致癌活性。
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2
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100
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推薦的100ng/天的Al限度代表了兩種有效的，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格測(cè)試的亞硝胺，N-亞硝基二甲胺(NDMA)和4-(甲基亞硝胺)1-(3-吡啶基)-1-(丁酮)(NNK)，它們的推薦的Al限度分別為96ng/天和100ng/天。歸類為2類的NDSRIs的致癌效力預(yù)計(jì)不高于NDMA和NNK。
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3
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400
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此類別中的NDSRIs與類別2相比，致癌活性較低，例如，由于存在弱去激活結(jié)構(gòu)特征。設(shè)定推薦的AI限度是為了反映致癌效力比第2類降低4倍的化合物。
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4
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1500
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此類別中的NDSRIs可能通過(guò)α-羥基化途徑進(jìn)行代謝激活，但預(yù)計(jì)致癌活性較低，例如，由于該途徑受到空間或電子影響，或者由于優(yōu)先考慮清除途徑。根據(jù)ICH M7（R2）的毒性關(guān)注閾值（TTC），建議的AI限度為1500ng/天。
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5
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1500
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第5類的NDSRIs，由于空間位阻或缺乏a-氫，預(yù)計(jì)不會(huì)通過(guò)a-羥基化途徑代謝激活，或者預(yù)計(jì)形成不會(huì)和DNA反應(yīng)的不穩(wěn)定的物質(zhì)。根據(jù)ICH M7（R2）的TTC，推薦的Al限度為1500ng/天。
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對(duì)于在美國(guó)市場(chǎng)銷售的產(chǎn)品，即使其他監(jiān)管區(qū)域推薦不同的限度，F(xiàn)DA推薦類別1的AI限度為每天26.5納克。
▲圖3-預(yù)測(cè)NDSRI致癌性類別及確定相關(guān)推薦Al限度的流程圖（叔-α-碳定義為一個(gè)處于sp3雜化狀態(tài)的α-碳）
▲圖4-在NDSRI上的α-和β-碳原子結(jié)構(gòu)
如上所述，推薦的AI限度適用于當(dāng)在藥品中的單個(gè)NDSRIs，如果識(shí)別出超過(guò)一個(gè)（NDSRIs和小分子亞硝胺類雜質(zhì)），并且檢測(cè)結(jié)果的總和超過(guò)了基于最嚴(yán)格的亞硝胺雜質(zhì)推算出來(lái)的限度，就需要和FDA進(jìn)行充分溝通（如果涉及藥物短缺的情況，更應(yīng)該充分評(píng)估后采取適當(dāng)?shù)男袆?dòng)）。
關(guān)于如何對(duì)亞硝胺雜質(zhì)的效力進(jìn)行評(píng)分，可以采用以下方法：
▲表2-每個(gè)α-碳上氫原子的數(shù)量（數(shù)量少的排在前面）及相應(yīng)的α-氫評(píng)分。每個(gè)α-碳上氫原子的數(shù)量，從最少的開始例子=a-氫評(píng)分0,2
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每個(gè)α-碳上氫原子的數(shù)量，從最少的開始
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例子
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=a-氫評(píng)分
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0,2
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0,3
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2
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1,2
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3
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1,3
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3
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2,2
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 ![]() ![]()
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1
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2,3
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 ![]() ![]()
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1
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備注：示例僅用于說(shuō)明，并非詳盡無(wú)遺。
＄甲基α-碳不是乙基部分的一部分時(shí)，評(píng)分為3分。如果甲基α-碳是乙基部分的一部分，則應(yīng)評(píng)分為2分。
▲表3-無(wú)活性特征列表及關(guān)聯(lián)評(píng)分
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無(wú)活性的特性
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例子
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單個(gè)無(wú)活性特征評(píng)分
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分子上任意位置的羧基
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+3
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吡咯烷環(huán)上的N-亞硝基
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+3
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含有至少一個(gè)硫原子的六元環(huán)中的N-亞硝基
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+3
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五元或六元環(huán)上的N-亞硝基*
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+2
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嗎啉環(huán)上的N-亞硝基
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+1
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七元環(huán)上的N-亞硝基
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+1
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無(wú)環(huán)N-亞硝基兩側(cè)連續(xù)的5個(gè)非氫原子鏈（環(huán)或無(wú)環(huán)）。每個(gè)環(huán)上不超過(guò)4個(gè)原子即可在同一條鏈上
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+1
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吸電子集團(tuán)**僅與N-亞硝基團(tuán)的α-碳原子相連（無(wú)論環(huán)狀或非環(huán)狀）
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+1
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吸電子集團(tuán)**與N-亞硝基團(tuán)兩側(cè)的α-碳原子相連（無(wú)論環(huán)狀或非環(huán)狀）
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+2
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羥基連接到N-亞硝基團(tuán)單側(cè)的β-碳原子***上（無(wú)論是環(huán)狀還是非環(huán)狀）
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+1
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羥基連接到N-亞硝基團(tuán)兩側(cè)的β-碳原子***上（無(wú)論是環(huán)狀還是非環(huán)狀）
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+2
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為了計(jì)算無(wú)活性特征評(píng)分，需要對(duì)NDSRI結(jié)構(gòu)中列出的所有存在的無(wú)激活特征進(jìn)行單個(gè)評(píng)分的總和。表格中的每個(gè)無(wú)激活特征行只能被計(jì)算一次。對(duì)于NDSRIs的N硝基基團(tuán)位于多個(gè)環(huán)內(nèi)的情況，應(yīng)僅應(yīng)用與最小匹配環(huán)對(duì)應(yīng)的特征評(píng)分。示例旨在說(shuō)明，并非詳盡無(wú)遺。
*排除了N-亞硝胺基位于吡咯環(huán)、包含至少一個(gè)硫原子的六元環(huán)或嗎啉環(huán)（分別計(jì)數(shù)）的情況。
**排除了羧酸（單獨(dú)計(jì)數(shù)）和酮（數(shù)據(jù)沖突）、以及芳基（單獨(dú)計(jì)數(shù)）。額外吸電子基團(tuán)示例僅限于Cross KP和Ponting DJ在2021年發(fā)表于Comput Toxicol期刊上的（N-亞硝胺活性的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系的發(fā)展）一文中描述的“β-碳吸電子基團(tuán)”。
***β-碳電子必須處于sp3雜化狀態(tài)（碳原子通過(guò)單鍵與其他原子相連），以便此特性適用。
▲表4-有活性特征列表及關(guān)聯(lián)評(píng)分。
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有活性的部分
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例子
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單個(gè)有活性部分得分
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與α-碳鍵合的芳基（即N-亞硝基上的苯基或偽苯基取代基）
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-1
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與β-碳鍵合的甲基（環(huán)或無(wú)環(huán)）
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-1
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計(jì)算有活性的特征評(píng)分，需對(duì)NDSRI結(jié)構(gòu)中列出的所有存在的有活性特征的單個(gè)評(píng)分進(jìn)行求和。表格中的每個(gè)有活性特征行僅能計(jì)數(shù)一次。示例旨在說(shuō)明性使用，并非詳盡無(wú)遺。
以下是示例1，如何應(yīng)用預(yù)測(cè)致癌活性分類方法流程圖（圖1）到假設(shè)的NDSRIs，N-亞硝基-1-奈必洛爾。計(jì)算得出N-亞硝基-1-奈必洛爾的分?jǐn)?shù)為4，因此將其歸類為類別4，并與每日推薦可接受攝入量限度1500ng相關(guān)聯(lián)。
例1：N-亞硝基-1-奈必洛爾
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α-氫的計(jì)數(shù)
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分?jǐn)?shù)
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紅色突出顯示的功能
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2,2
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1
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去活化特性
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分?jǐn)?shù)
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紅色突出顯示的功能
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N-亞硝基兩側(cè)與β-碳***鍵合的羥基（環(huán)或無(wú)環(huán)）
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+2
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在無(wú)環(huán)硝基的兩側(cè)有≥5個(gè)連續(xù)的非氫原子鏈（環(huán)或無(wú)環(huán)）。每條鏈上不超過(guò)4個(gè)原子可在同一環(huán)上
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+1
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不存在活性特征
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效力值=1+2+1=4
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效力等級(jí)4
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AI=1500ng/天
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***β-碳必須處于sp3雜化狀態(tài)，以便此特性適用
以下是示例2，展示了預(yù)測(cè)致癌性毒力分類方法流程圖（圖1）如何應(yīng)用于假設(shè)的NDSRIs，N-亞硝基氯酮胺。N-亞硝基氯胺酮被歸類為類別5，與之關(guān)聯(lián)的推薦可接受攝入量限度為每天1500 ng。
例2：N-亞硝基氯胺酮
3.2 確定特定亞硝胺的AI限度的其他方法可以基于數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)搜索可用的致癌性和細(xì)菌致突變數(shù)據(jù)，或使用特定化合物進(jìn)行體內(nèi)和/或體外測(cè)試。
FDA網(wǎng)站上也收錄了一些化合物的AI推薦值，詳見(jiàn)https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/cder-nitrosamine-impurity-acceptable-intake-limits。
▲圖5-FDA官網(wǎng)推薦的亞酰胺雜質(zhì)AI限度（僅示例）
除FDA官網(wǎng)外，也可以通過(guò)the Carcinogenicity Potency Database（CPDB）或者the Lhasa Carcinogenicity Database（LCDB）這兩大數(shù)據(jù)庫(kù)查詢亞硝胺雜質(zhì)的TD50。化合物特異性 AI 限度可基于嚙齒動(dòng)物致癌性效力數(shù)據(jù)計(jì)算，例如在公開文獻(xiàn)中確定的導(dǎo)致50%腫瘤發(fā)生率的劑量（TD50 值）。導(dǎo)致50%腫瘤發(fā)生率的劑量相當(dāng)于1:2的癌癥風(fēng)險(xiǎn)概率水平。
AI限度可以通過(guò)以下公式進(jìn)行計(jì)算（50kg為人體體重）：
以下以N-亞硝基二甲胺（NDMA）為例說(shuō)明AI限度的推導(dǎo)過(guò)程。NDMA在幾種物種中被確定為致突變致癌物，并被美國(guó)環(huán)境保護(hù)署的綜合風(fēng)險(xiǎn)信息系統(tǒng)計(jì)劃列為可能或疑似人類致癌物。根據(jù)致癌性效力數(shù)據(jù)庫(kù)，NDMA的TD50值為0.0959 mg/kg/天（大鼠）和0.189 mg/kg/天（小鼠）。對(duì)于AI限度計(jì)算，使用大鼠的較低值（更保守）。與1:100,000癌癥風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的AI限度（在70年暴露期內(nèi)）通過(guò)將TD50除以50000然后乘以50（考慮50 kg體重的患者）計(jì)算得出，結(jié)果為0.0000959mg/天的NDMA，約為96ng/天的NDMA。因此，每日終身攝入96ng /天的NDMA對(duì)應(yīng)于理論癌癥風(fēng)險(xiǎn)，因此在作為雜質(zhì)存在時(shí)可以代表AI限度。
當(dāng)一種雜質(zhì)如ICH M7（R2）附錄中所述的致癌性研究數(shù)據(jù)不可用或質(zhì)量較差時(shí)，F(xiàn)DA推薦使用預(yù)測(cè)致癌效力分類方法確定AI限度。
3.3 可以使用具有可靠致癌性數(shù)據(jù)的結(jié)構(gòu)相似替代物進(jìn)行的交叉分析，這種可替代物要求結(jié)合和反應(yīng)性上與被替代物類似（取代的程度、空間位阻、電子效應(yīng)、代謝激活的可能性以及生成的代謝物的穩(wěn)定性、反應(yīng)性和整體的分子量），并且要求有可靠的致癌數(shù)據(jù)可用。
① 基于替代物的再交叉評(píng)估：應(yīng)遵循ICH M7(R2) 指南中關(guān)于預(yù)測(cè)致突變潛力的建議，可以執(zhí)行(定量) 結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系（Q）SAR分析。通常情況下，替代物應(yīng)該選擇有穩(wěn)健的致突變性和致癌性數(shù)據(jù)的亞硝胺雜質(zhì)，比如：NDMA，N-亞硝基哌啶(NPIP),4-(甲基亞硝基氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)，N-亞硝基吡咯啶(NPYR), 和N-亞硝基嗎啉（NMOR）。
② 若需進(jìn)行致突變性評(píng)估，可進(jìn)行細(xì)菌致突變性試驗(yàn)。
3.4 如果以上三種方法都無(wú)法確定亞硝胺化合物的AI限度，建議使用26.5 ng/day作為AI限度。
3.5 當(dāng)藥物產(chǎn)品中可能存在多種亞硝胺雜質(zhì)時(shí)，可以使用一種替代的靈活A(yù)I限度方法來(lái)建立規(guī)范。
以下方法可用于建立小分子亞硝胺和亞硝胺類藥物雜質(zhì)（NDSRIs）的規(guī)格限度。
當(dāng)同一藥物產(chǎn)品中可能存在多種亞硝胺時(shí)，可使用靈活方法控制總亞硝胺雜質(zhì)的水平，以滿足基于1:100000增加癌癥風(fēng)險(xiǎn)的推薦可接受攝入量（AI）限度。每個(gè)單獨(dú)的亞硝胺應(yīng)計(jì)算為其AI限度的百分比，使得所有亞硝胺的總和不超過(guò)100%?？倎喯醢返挠?jì)算如下：
其中Xi是每個(gè)單個(gè)亞硝胺i的含量[以百萬(wàn)分之一（ppm）為單位]，AIi是每個(gè)亞硝胺的AI限度（以ppm為單位），n不超過(guò)3。
以下是一種藥物產(chǎn)品中多種亞硝胺雜質(zhì)總推薦AI限度的靈活方法示例。藥物A的最大日劑量為80mg/天：
總亞硝胺是每個(gè)單個(gè)亞硝胺AI限度百分比的總和。不超過(guò)100%意味著理論癌癥風(fēng)險(xiǎn)不超過(guò)1:100,000。
如果提議的總亞硝胺限度方法不同于上述方法，或者在一種藥物產(chǎn)品中檢測(cè)到超過(guò)三種不同的亞硝胺，鼓勵(lì)制造商和申請(qǐng)人聯(lián)系 FDA。
04亞硝胺雜質(zhì)控制的推薦三步緩解策略
4.1 先對(duì)API、上市產(chǎn)品以及已批準(zhǔn)和待批申請(qǐng)產(chǎn)品中亞硝胺雜質(zhì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。
4.2 當(dāng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果顯示有可能存在亞硝胺雜質(zhì)時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行確認(rèn)測(cè)試。（因?yàn)閬喯醢冯s質(zhì)一般情況下分子量比較低、有部分的揮發(fā)性、并且雜質(zhì)的毒性比較高），故需要開發(fā)有高專屬性和高靈敏度的檢測(cè)方法。
4.3 可以對(duì)工藝等進(jìn)行相應(yīng)的變更，以減少亞硝胺雜質(zhì)的產(chǎn)生。并向?qū)?yīng)的監(jiān)管機(jī)構(gòu)提交該變更。
一般而言，對(duì)亞酰胺雜質(zhì)的評(píng)估不僅包括小分子亞硝胺內(nèi)物質(zhì)，也包含NDSRIs，如果檢測(cè)到NDSRIs水平高于推薦的AI限度，建議生產(chǎn)商和申請(qǐng)人制定控制策略或/和設(shè)計(jì)方法，將其控制在可接受水平。
05減輕藥物活性成分（API）中亞硝胺雜質(zhì)的控制措施
一般情況下，在合成路線開發(fā)過(guò)程中優(yōu)化API的制造工藝設(shè)計(jì)，能夠盡可能的減少或者防止亞硝胺雜質(zhì)的形成。包含以下措施：
5.1 盡可能避免可能產(chǎn)生亞硝胺雜質(zhì)的反應(yīng)條件。
5.2 如果合成工藝路線中有可能形成亞硝胺的話，就盡可能使用除二級(jí)胺、三級(jí)胺或四級(jí)胺之外的堿，也盡量避免使用酰胺類的溶劑（N.N-二甲基甲酰胺，N,N-二甲基乙酰胺或者是N-甲基吡咯烷酮），在必須使用時(shí)，需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。
5.3 用其他的反應(yīng)猝滅劑代替亞硝酸鹽用于疊氮化物的分解，若必須使用，可以考慮將疊氮化物先從反應(yīng)混合物中分離出來(lái)，然后在不接觸API、中間體或者擬回收溶劑的情況下，用亞硝酸猝滅疊氮化物（例如反應(yīng)物和疊氮化鈉可以通過(guò)有機(jī)相和水相分離的情況）
5.4 優(yōu)化并持續(xù)控制反應(yīng)、工藝和反應(yīng)條件（如pH值、溫度和反應(yīng)時(shí)間）的順序。
5.5 設(shè)計(jì)能在后續(xù)加工步驟中清除亞硝胺雜質(zhì)的工藝步驟。
5.6 對(duì)反應(yīng)中涉及的起始物料、中間體、回收材料和水中的亞硝胺雜質(zhì)均應(yīng)該進(jìn)行評(píng)估。
對(duì)于亞硝胺雜質(zhì)檢測(cè)結(jié)果高于限度10%的藥物活性成分，制造商在放行時(shí)應(yīng)該進(jìn)行每批檢測(cè)；對(duì)于超過(guò)限度的藥物活性成分，不允許分銷。
06減輕藥物產(chǎn)品中亞硝胺雜質(zhì)的控制措施
6.1 選擇可靠的藥物活性成分的供應(yīng)商。關(guān)注藥物活性成分的合成工藝路線，關(guān)注多批藥物活性成分中的亞硝胺雜質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果。
6.2 對(duì)藥物產(chǎn)品，建立恰當(dāng)?shù)膩喯醢冯s質(zhì)的控制規(guī)范。
◆ 對(duì)于檢測(cè)結(jié)果超過(guò)限度的10%的時(shí)候，就應(yīng)對(duì)藥物產(chǎn)品中的亞硝胺雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)（包括穩(wěn)定性留樣的藥物產(chǎn)品）。
◆ 當(dāng)由于API結(jié)構(gòu)、API 合成工藝路線或制造工藝而存在顯著的亞硝胺形成風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，也建議采用控制策略。
◆ 對(duì)于有檢出，但是未超過(guò)規(guī)定限度的10%的藥物產(chǎn)品，需要對(duì)驗(yàn)證批次和對(duì)監(jiān)管批次進(jìn)行亞硝胺雜質(zhì)的檢測(cè)。當(dāng)其制造過(guò)程、輔料、API或者其他關(guān)鍵要素發(fā)生變更，可能導(dǎo)致產(chǎn)品生命周期中亞硝胺形成時(shí)，也需進(jìn)行檢測(cè)。
◆ 超過(guò)控制限度的藥物產(chǎn)品，在原則上不允許用于分銷。
6.3 盡可能對(duì)產(chǎn)品處方或者生產(chǎn)工藝進(jìn)行優(yōu)化，以減少或預(yù)防產(chǎn)品中的NDSRIs形成。
◆ 對(duì)輔料進(jìn)行篩選，選擇不含亞硝酸鹽或者含亞硝酸鹽但是含量低的輔料，降低輔料引入亞硝酸鹽的風(fēng)險(xiǎn)。
◆ 設(shè)計(jì)藥物產(chǎn)品時(shí)加入抗氧化劑[如抗壞血酸（維生素 C）、抗壞血酸鹽（如抗壞血酸鈉）、α-生育酚或沒(méi)食子酸丙酯]，少量加入會(huì)顯著抑制藥物產(chǎn)品中NDSRIs的形成。
◆ 修改產(chǎn)品處方的pH環(huán)境，從酸性變更為中性或偏堿性。（例如在處方中加入碳酸鈉）
07對(duì)于亞硝胺雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果的評(píng)估
◆ 若進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估后，證明亞硝胺雜質(zhì)不會(huì)在藥物產(chǎn)品或活性成分中存在，就可以不用進(jìn)行確認(rèn)性測(cè)試。
◆ 若無(wú)法完全說(shuō)明亞硝胺雜質(zhì)不存在，就需要進(jìn)行確認(rèn)性檢測(cè)（至少三個(gè)代表批次），檢測(cè)結(jié)果中，控制限度的10%是一個(gè)很關(guān)鍵的值，如果測(cè)定結(jié)果（含穩(wěn)定性數(shù)據(jù)）低于限度的10%，就可以不用在活性成分或者藥物產(chǎn)品中建立亞硝胺雜質(zhì)的控制限度，對(duì)于已經(jīng)批準(zhǔn)的藥品，測(cè)定結(jié)果可在年報(bào)中匯報(bào)；若測(cè)定結(jié)果（含穩(wěn)定性數(shù)據(jù)）高于限度的10%，就需要建立產(chǎn)品的控制標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)放行及穩(wěn)定性產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于已經(jīng)獲批的產(chǎn)品，需要作為變更提交補(bǔ)充資料。
◆ 若檢測(cè)結(jié)果超過(guò)控制限度，就需要進(jìn)行配方、制造工藝或者包裝的變更，來(lái)減緩相應(yīng)的亞硝胺雜質(zhì)的產(chǎn)生。如果有制造商或供應(yīng)商有更合理的限度設(shè)定，可以與FDA進(jìn)行溝通。
注：亞硝胺雜質(zhì)的檢測(cè)方法也可在FDA網(wǎng)站上進(jìn)行查閱。https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/cder-nitrosamine-impurity-acceptable-intake-limits
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