剛剛，中國(guó)器審發(fā)布《基于高通量測(cè)序法的胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2025年修訂版）（征求意見(jiàn)稿）》，全文如下：
基于高通量測(cè)序法的胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2025年修訂版）（征求意見(jiàn)稿）
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。
本指導(dǎo)原則是對(duì)該類試劑的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
胎兒染色體非整倍體（Fetal Chromosome Aneuploidies）中的21三體、18三體、13三體（Trisomy 21、Trisomy 18、Trisomy13，即T21、T18、T13）是臨床上最常見(jiàn)的染色體非整倍體疾病。其對(duì)應(yīng)的分別為21-三體綜合征（又稱唐氏綜合征，先天愚型或Down綜合征）、18-三體綜合征（又稱Edwards綜合征）和13-三體綜合征（又稱Patau綜合征），發(fā)病率分別約為1/700、1/6000、1/10000，患兒絕大多數(shù)存在嚴(yán)重智力障礙及器官畸形。
產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷是為避免產(chǎn)生遺傳缺陷患兒提供的手段。常規(guī)的產(chǎn)前篩查方法包括：早孕期的超聲與血清學(xué)聯(lián)合篩查和中孕期母體血清學(xué)篩查。篩查結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦經(jīng)建議通過(guò)產(chǎn)前診斷進(jìn)行最終確認(rèn)，由孕婦知情選擇。胎兒染色體異常的產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)為介入性產(chǎn)前診斷手術(shù),是指通過(guò)絨毛取材術(shù)/羊膜腔穿刺術(shù)/經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)，取相應(yīng)細(xì)胞采用細(xì)胞生物學(xué)方法對(duì)胎兒染色體進(jìn)行核型分析。
高通量測(cè)序方法檢測(cè)胎兒染色體非整倍體的原理是：孕婦母體血漿中存在胎兒游離脫氧核糖核酸，長(zhǎng)度約為75bp—250bp，幾乎全部來(lái)源于胎盤的滋養(yǎng)層細(xì)胞，其濃度和孕周密切相關(guān)并以一定比例（5%—30%）穩(wěn)定存在于母體外周血漿中。高通量測(cè)序方法通過(guò)取母體血漿提取包含正常母體和胎兒的血漿游離脫氧核糖核酸（cell free Deoxyribonucleic acid，cfDNA），經(jīng)文庫(kù)構(gòu)建等過(guò)程，最后進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，通過(guò)軟件分析數(shù)據(jù)獲得染色體數(shù)目評(píng)價(jià)結(jié)果。以檢測(cè)21三體綜合征為例，當(dāng)對(duì)懷有T21胎兒的母體血漿游離DNA數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí)，其21號(hào)染色體游離DNA總數(shù)會(huì)有小比例的升高，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)算法區(qū)分這一微小差異來(lái)實(shí)現(xiàn)利用cfDNA進(jìn)行胎兒染色體非整倍體的產(chǎn)前篩查。但高通量測(cè)序法不能對(duì)染色體結(jié)構(gòu)異常進(jìn)行檢測(cè)，不能代替?zhèn)鹘y(tǒng)篩查中的開(kāi)放式神經(jīng)管缺陷篩查等。
本指導(dǎo)原則所述的胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒是指通過(guò)高通量測(cè)序法檢測(cè)孕婦外周血血漿中胎兒游離脫氧核糖核酸，通過(guò)分析樣本中的胎兒游離DNA的21號(hào)、18號(hào)及13號(hào)染色體數(shù)量的差異，預(yù)期用于對(duì)胎兒染色體非整倍體疾病21-三體綜合征、18-三體綜合征和13-三體綜合征進(jìn)行產(chǎn)前篩查的檢測(cè)試劑盒。
本指導(dǎo)原則所述的高通量測(cè)序法，是指測(cè)定單元高度并行化、單次讀長(zhǎng)相對(duì)較短的基因測(cè)序技術(shù)類型?；趩畏肿訉?shí)時(shí)測(cè)序原理的測(cè)序方法文中并未涉及，如在企業(yè)參考品設(shè)置、性能評(píng)估或臨床評(píng)價(jià)等方面有適用部分，可以參照?qǐng)?zhí)行。
本指導(dǎo)原則所述檢測(cè)試劑盒的適用人群為：對(duì)孕周為12+0周及以上的孕婦進(jìn)行產(chǎn)前篩查，其結(jié)果不能代表對(duì)孕婦懷有三體胎兒的確認(rèn)，產(chǎn)前篩查的結(jié)果必須要經(jīng)過(guò)產(chǎn)前診斷進(jìn)行確認(rèn)。
倫理學(xué)原則應(yīng)遵守國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)及行業(yè)規(guī)定。
二、注冊(cè)審查要點(diǎn)
（一）監(jiān)管信息
1.產(chǎn)品名稱及分類編碼
產(chǎn)品名稱應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)的要求。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。
2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。
（二）綜述資料
綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說(shuō)明的內(nèi)容。其中，產(chǎn)品描述應(yīng)詳述技術(shù)原理、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)、與同類和/或前代產(chǎn)品的比較等。與同類和/或前代產(chǎn)品的比較應(yīng)著重從方法學(xué)、技術(shù)路線及性能指標(biāo)（如：檢出限）等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。
綜述資料應(yīng)詳細(xì)闡明檢測(cè)原理、檢測(cè)流程、生信分析過(guò)程及數(shù)據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可結(jié)合圖示明確一個(gè)完整檢測(cè)配合使用的全部試劑及耗材名稱、生產(chǎn)廠家、貨號(hào)、注冊(cè)證號(hào)或備案號(hào)、詳細(xì)的組成成分及試劑作用等。
（三）非臨床資料
1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告
注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。
第三類體外診斷試劑應(yīng)當(dāng)提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告。如該項(xiàng)目已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求，并使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。
可提交以下任一形式的檢驗(yàn)報(bào)告：
（1）注冊(cè)申請(qǐng)人出具的自檢報(bào)告。
（2）委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。
如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，建議性能指標(biāo)要求不低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。
2.分析性能評(píng)估資料
注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行的所有分析性能評(píng)估資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括研究目的、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評(píng)估的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括試驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、人員及數(shù)量、儀器名稱和型號(hào)、試劑名稱、規(guī)格和批號(hào)、臨床樣本來(lái)源（如涉及）等。分析性能評(píng)估的試驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究：
2.1樣本穩(wěn)定性
一般包括樣本采集處理、運(yùn)輸及儲(chǔ)存（如：冷藏、冷凍）條件下的有效期驗(yàn)證以及血漿游離DNA提取后儲(chǔ)存條件的驗(yàn)證?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行檢測(cè)，從而確認(rèn)樣本的穩(wěn)定性。對(duì)于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
2.2最低檢出限
2.2.1最低檢出限建立
通過(guò)對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行梯度稀釋并多次檢測(cè)，將具有95%陽(yáng)性檢出率的胎兒游離DNA濃度水平作為最低檢出限，同時(shí)還應(yīng)對(duì)不同基因組DNA濃度可檢出胎兒DNA的最小濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)，確定申報(bào)產(chǎn)品最低檢出限為XX DNA濃度下可檢出胎兒DNA的最小百分比。
2.2.2最低檢出限驗(yàn)證
建議采用T21、T18、T13胎兒DNA片段按不同比例梯度與正常女性血漿混合制備模擬樣本，并稀釋至最低檢出限水平，通過(guò)多次重復(fù)檢測(cè)，應(yīng)滿足至少95%檢出。
模擬樣本以及企業(yè)參考品應(yīng)使用公認(rèn)的準(zhǔn)確定量方法進(jìn)行確認(rèn)，建立和驗(yàn)證樣本不應(yīng)重復(fù)。
2.3企業(yè)參考品驗(yàn)證
根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2.4精密度
注冊(cè)申請(qǐng)人可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，應(yīng)保證研究的科學(xué)合理性，試驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：
2.4.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑（包括核酸分離/純化組分）本身的影響外，應(yīng)對(duì)高通量基因測(cè)序儀、操作者、地點(diǎn)、合理的精密度評(píng)價(jià)周期、試劑批次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。
例如：為期至少XX天的連續(xù)檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。注冊(cè)申請(qǐng)人還應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
2.4.2用于精密度評(píng)價(jià)的模擬樣品和臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣品、臨界陽(yáng)性樣品、（中或強(qiáng)）陽(yáng)性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆＞芏仍u(píng)價(jià)中的每一次檢測(cè)均應(yīng)從核酸提取開(kāi)始。
2.4.3可結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn)，對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。
2.5特異性
2.5.1干擾試驗(yàn)：包括內(nèi)源性干擾物質(zhì)和外源性干擾物質(zhì)。應(yīng)針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議注冊(cè)申請(qǐng)人在干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(即“最差條件”)條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)。內(nèi)源性干擾物質(zhì)的評(píng)價(jià)至少應(yīng)包括膽紅素、游離血紅蛋白、甘油三酯。
2.5.2：對(duì)以下是否干擾T21、T18、T13陰陽(yáng)性的檢出能力進(jìn)行評(píng)價(jià)：
2.5.2.1微缺失、微重復(fù)評(píng)價(jià)：注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)采用一定比例的微缺失、微重復(fù)胎兒DNA與正常女性血漿混合制備微缺失、微重復(fù)模擬樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。
2.5.2.2嵌合體評(píng)價(jià)：申請(qǐng)人應(yīng)采用不同嵌合比例的模擬T21、T18和T13嵌合體樣本對(duì)試劑檢測(cè)嵌合體的能力進(jìn)行評(píng)估，對(duì)不能檢測(cè)到的模擬嵌合體的嵌合比例進(jìn)行確認(rèn)。
2.5.2.3對(duì)其他常見(jiàn)染色體樣本的干擾進(jìn)行評(píng)價(jià)。
微缺失微重復(fù)模擬樣本、嵌合體模擬樣本及其他常見(jiàn)染色體樣本的類型和數(shù)量由注冊(cè)申請(qǐng)人選擇確定，并在產(chǎn)品說(shuō)明書中明確。
2.6反應(yīng)體系研究
反應(yīng)體系研究指完成檢測(cè)所涉及到的最佳反應(yīng)條件的選擇確定過(guò)程，包括對(duì)提取純化步驟、游離DNA片段的末端修復(fù)、接頭及標(biāo)簽連接、文庫(kù)定量、片段擴(kuò)增、測(cè)序反應(yīng)的反應(yīng)條件及反應(yīng)體系的選擇確定，涉及到對(duì)樣本類型、樣本用量、試劑用量、緩沖體系的選擇、反應(yīng)溫度和時(shí)間條件及檢測(cè)過(guò)程中質(zhì)控方法確定的依據(jù)。重點(diǎn)關(guān)注：酶濃度、引物濃度、dNTP濃度、離子濃度、加樣量及反應(yīng)體積、片段擴(kuò)增各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)、測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量的評(píng)估指標(biāo)等，其中加樣量和反應(yīng)體積應(yīng)參考相應(yīng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)研究驗(yàn)證后確定。
此外，還應(yīng)對(duì)數(shù)據(jù)量及胎兒游離DNA濃度和比例對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響進(jìn)行研究。
3.穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。
申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批申報(bào)產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性等研究實(shí)際上均指經(jīng)運(yùn)輸或開(kāi)瓶后對(duì)產(chǎn)品效期及檢測(cè)性能是否有影響，因此注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中充分考慮上述因素。
4.陽(yáng)性判斷值研究
由于目前胎兒染色體非整倍體T13、T18、T21的陽(yáng)性判斷值存在多種計(jì)算方式，且更好的算法和數(shù)據(jù)處理方式仍在不斷開(kāi)發(fā)中。因此，如注冊(cè)申請(qǐng)人選擇了某一算法作為陽(yáng)性判斷值的計(jì)算方式，則應(yīng)詳細(xì)闡述選擇該算法作為陽(yáng)性判斷值依據(jù)的原因（如權(quán)威文獻(xiàn)、行業(yè)共識(shí)），并詳細(xì)闡述計(jì)算公式和各參數(shù)代表的意義。
以大樣本量常用的Z-值（Z-score）算法來(lái)舉例說(shuō)明：
4.1 Z-值這個(gè)統(tǒng)計(jì)量反應(yīng)的是當(dāng)前數(shù)值距離平均數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)距離，Z-值的應(yīng)用條件為大樣本量以及數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，計(jì)算公式如下：
4.1.1 chrN z-score for test sample:所檢測(cè)樣本的Z-值；
4.1.2 N：指定的第N染色體；
4.1.3 %chrNsample：待測(cè)樣品第N條染色體唯一比對(duì)序列數(shù)占常染色體的百分比，通過(guò)高通量測(cè)序后軟件分析獲得；
4.1.4 Mean%chrNreference：參照樣品第N條染色體比例平均值；
4.1.5 S.D.%chrNreference：參照樣品第N 條染色體比例的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
該公式中，影響唯一比對(duì)序列的因素包括GC含量、檢驗(yàn)覆蓋度等，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)計(jì)算并統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)覆蓋度是否在正常范圍內(nèi)。參照樣品的數(shù)量、來(lái)源等均對(duì)其數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響Mean%chrNreference和S.D.%chrNreference。因此，注冊(cè)申請(qǐng)人需對(duì)參照樣品的數(shù)據(jù)計(jì)算進(jìn)行詳述，并提供計(jì)算值。
4.2 被篩查孕婦所懷胎兒的染色體數(shù)量狀況符合正態(tài)分布，即大概率為正常染色體數(shù)量，小概率事件為胎兒染色體非整倍體，如圖1所示：
圖1 正態(tài)分布圖
如圖1可以看出，出現(xiàn)在Z-值為正負(fù)3以外的數(shù)值，則有99.9%的可能為陽(yáng)性，因此，通常將Z-值=3定為陽(yáng)性判斷值分界點(diǎn)，Z-值>3或Z-值<-3判斷為胎兒染色體非整倍體陽(yáng)性。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)根據(jù)試驗(yàn)對(duì)Z-值>3及Z-值<-3的情況分別進(jìn)行說(shuō)明。
鑒于并無(wú)100%陰陽(yáng)性分界點(diǎn)，一般來(lái)說(shuō)，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)定陽(yáng)性判斷值灰區(qū)范圍，灰區(qū)的設(shè)定應(yīng)提交理論和實(shí)際試驗(yàn)結(jié)果的依據(jù)，并在說(shuō)明書【陽(yáng)性判斷值】和【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】項(xiàng)進(jìn)行解釋說(shuō)明，如：是否需要用產(chǎn)前診斷的方式進(jìn)行最終確認(rèn)，可能的原因，是否需要孕齡再大時(shí)進(jìn)行再次抽血復(fù)測(cè)等等。如無(wú)灰區(qū)設(shè)置，也應(yīng)提交理論和大樣本量試驗(yàn)結(jié)果的依據(jù)。
在陽(yáng)性判斷值設(shè)定后，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選取一定數(shù)量陰、陽(yáng)性真實(shí)臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，如與該公式不符，則應(yīng)說(shuō)明出現(xiàn)的問(wèn)題及詳細(xì)的數(shù)據(jù)校正方式。
5.其他資料
5.1主要原材料研究資料
主要原材料的研究資料包括企業(yè)參考品和完成檢測(cè)所需試劑組成兩部分。
5.1.1企業(yè)參考品
應(yīng)至少包括：準(zhǔn)確性參考品、特異性參考品、檢測(cè)限參考品、重復(fù)性參考品，具體要求如下：
5.1.1.1準(zhǔn)確性參考品：應(yīng)采用T21、T18、T13胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本。
5.1.1.2特異性參考品：應(yīng)包括以下樣本進(jìn)行特異性參考品設(shè)置。
5.1.1.2.1采用染色體數(shù)目正常胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本或胎兒核型正常的孕婦血漿。
5.1.1.2.2采用其他染色體異常胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。
5.1.1.2.3采用一定比例的微缺失微重復(fù)胎兒DNA與正常女性血漿混合制備微缺失微重復(fù)模擬樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。
5.1.1.2.4按照對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)控要求自行設(shè)定模擬T21、T18和T13嵌合體的組成比例，如70%異常，30%正常；30%異常，70%正常等。
其他染色體異常、微缺失微重復(fù)以及嵌合體特異性參考品由注冊(cè)申請(qǐng)人依據(jù)常見(jiàn)類型并根據(jù)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)控要求自行選擇。
5.1.1.3檢測(cè)限參考品：應(yīng)采用T21、T18、T13胎兒DNA片段按不同比例梯度與正常女性血漿混合的模擬樣本，如5%、3.5%、2.5%等，建議采用95%（n≥20）的陽(yáng)性檢出率作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn)。
5.1.1.4重復(fù)性參考品：一般包括染色體數(shù)目正常陰性重復(fù)參考品以及T21、T18、T13弱陽(yáng)性重復(fù)性參考品，其中，陽(yáng)性重復(fù)性參考品可采用T21、T18、T13胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本進(jìn)行制備。
T21、T18、T13及其他染色體異常胎兒DNA片段可由流產(chǎn)組織或羊水細(xì)胞、細(xì)胞系等來(lái)源制備。
注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明企業(yè)參考品的組成、詳細(xì)說(shuō)明制備及檢定方法、胎兒DNA片段濃度確認(rèn)方式和所占比例的選擇依據(jù)。組成各項(xiàng)企業(yè)參考品的樣本應(yīng)為不同來(lái)源。
5.1.2.完成全部檢測(cè)流程所需試劑
一般應(yīng)至少包括：血漿游離DNA提取純化試劑、文庫(kù)構(gòu)建試劑、文庫(kù)定量試劑、測(cè)序試劑、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性質(zhì)控品以及與之配合使用的測(cè)序芯片和數(shù)據(jù)分析軟件。具體要求如下：
5.1.2.1血漿游離DNA提取純化試劑：無(wú)論申報(bào)產(chǎn)品中是否包含，注冊(cè)申請(qǐng)人均應(yīng)提交配合使用的提取純化試劑的原理、詳細(xì)組成成分、生產(chǎn)廠家、貨號(hào)及醫(yī)療器械備案憑證編號(hào)的相關(guān)資料。性能方面需對(duì)該試劑提取的DNA片段長(zhǎng)度范圍準(zhǔn)確性、濃度及純度要求，提取效率、重復(fù)性及抗干擾能力進(jìn)行評(píng)估。
5.1.2.2文庫(kù)構(gòu)建試劑、文庫(kù)定量試劑、測(cè)序試劑：文庫(kù)構(gòu)建試劑對(duì)片段化的DNA進(jìn)行缺口補(bǔ)平及相應(yīng)部分5’端磷酸化（如需）和3’端去磷酸化（如需），之后使用連接酶加上用于測(cè)序和分析的標(biāo)簽和接頭，構(gòu)建成可以用來(lái)測(cè)序上機(jī)的標(biāo)準(zhǔn)文庫(kù)；文庫(kù)定量試劑通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction,PCR）擴(kuò)增及與標(biāo)準(zhǔn)品曲線的比對(duì)，用于定量測(cè)定文庫(kù)濃度，為后續(xù)均一化文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序做準(zhǔn)備，同時(shí)能夠評(píng)估文庫(kù)構(gòu)建的質(zhì)量。文庫(kù)定量時(shí)應(yīng)明確對(duì)文庫(kù)質(zhì)量、片段大小及濃度要求，應(yīng)提供分析圖譜，對(duì)其中參數(shù)進(jìn)行解釋說(shuō)明（如是否有雜峰，產(chǎn)生的原因，是否對(duì)最終結(jié)果產(chǎn)生影響）。文庫(kù)定量不限于上述方法，也可采用其他方法進(jìn)行，如熒光染料法、Qubit定量等；測(cè)序試劑用于對(duì)均一化的文庫(kù)進(jìn)行片段擴(kuò)增，通過(guò)基因測(cè)序儀捕捉擴(kuò)增過(guò)程中堿基的變化引起的信號(hào)變化來(lái)達(dá)到讀取序列的目的。
以上三種試劑一般由：相應(yīng)功能的酶（末端修復(fù)酶、DNA連接酶、缺口修復(fù)酶DNA聚合酶等）、核苷酸序列（引物、接頭序列、標(biāo)簽序列、文庫(kù)定量標(biāo)準(zhǔn)品）、緩沖液及dNTP組成。具體要求如下：
5.1.2.2.1酶：應(yīng)提交純度、活性及功能性試驗(yàn)資料。例如：文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程包括但不限于末端修復(fù)酶、DNA連接酶、缺口修復(fù)聚合酶等，所選擇的酶應(yīng)當(dāng)具有末端突出削平、缺口補(bǔ)平、標(biāo)簽或接頭連接、DNA聚合酶活性。
5.1.2.2.2核苷酸序列：應(yīng)提交相應(yīng)的序列組成和純度信息，序列準(zhǔn)確度；引物設(shè)計(jì)應(yīng)提交引物設(shè)計(jì)原則及選擇對(duì)比依據(jù)，靶向測(cè)序技術(shù)應(yīng)提供目標(biāo)區(qū)域覆蓋范圍。
5.1.2.2.3緩沖液：應(yīng)明確詳細(xì)的組成及各鹽濃度選擇對(duì)比的依據(jù)。
5.1.2.2.4 dNTP：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP，應(yīng)提交對(duì)純度、濃度等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。
5.1.2.3陰、陽(yáng)性質(zhì)控品：須能夠監(jiān)控DNA片段提取到最終測(cè)序結(jié)果全過(guò)程，因此應(yīng)當(dāng)由陰、陽(yáng)性（T21、T18和T13）胎兒DNA片段按已知比例與正常女性血漿基質(zhì)混合組成。T21、T18、T13染色體異常胎兒DNA片段可由流產(chǎn)組織或羊水細(xì)胞、細(xì)胞系等來(lái)源制備。
5.1.2.4測(cè)序芯片：應(yīng)詳細(xì)闡明芯片進(jìn)行片段擴(kuò)增的原理及結(jié)構(gòu)，明確使用芯片型號(hào)。
5.1.2.5數(shù)據(jù)分析軟件：舉例介紹原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估、數(shù)據(jù)處理和篩選的方法，明確數(shù)據(jù)篩選依據(jù)以及使用的算法。
5.1.2.6提交不同原材料對(duì)于最終測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量影響的評(píng)估材料。由于各測(cè)序平臺(tái)的技術(shù)側(cè)重點(diǎn)不同，數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估的項(xiàng)目可能存在差異，需考慮包括但不限于以下方面：文庫(kù)濃度、文庫(kù)片段大小、單樣本總序列數(shù)（數(shù)據(jù)量）、唯一比對(duì)率、單次檢測(cè)的GC gap（最高GC值與最低GC值的差值）等。
5.1.2.7除上述資料，注冊(cè)申請(qǐng)人還應(yīng)提交主要原材料的篩選依據(jù)及試驗(yàn)資料。如為自制，則應(yīng)提交：制備方法、質(zhì)量要求、質(zhì)量檢測(cè)方法、對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料等；如為外購(gòu)，則應(yīng)提交：外購(gòu)證書、質(zhì)量要求、質(zhì)量檢測(cè)方法、對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料等。其中，對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料應(yīng)包括篩選過(guò)程中的數(shù)據(jù)、圖譜、對(duì)比圖表等信息。
5.2生產(chǎn)工藝研究資料
包括配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過(guò)程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。所提交申報(bào)資料中應(yīng)包括主要生產(chǎn)工藝介紹和生產(chǎn)工藝流程圖，后者需標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說(shuō)明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。
（四）臨床評(píng)價(jià)資料
臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員
選擇不少于3家（含3家）備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則的要求開(kāi)展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)為已取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)。人員應(yīng)為經(jīng)過(guò)專門培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員。機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》《母嬰保健專項(xiàng)技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》，機(jī)構(gòu)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證》，人員取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書》或者《醫(yī)師執(zhí)業(yè)證書》中加注母嬰保健技術(shù)（產(chǎn)前診斷類）考核合格的。
2.受試者選擇和臨床樣本
臨床試驗(yàn)的入組人群應(yīng)為產(chǎn)品的預(yù)期適用人群，即為孕周為12+0周及以上的孕婦。不同年齡段孕婦應(yīng)按自然比例分布，35歲及以上孕婦占比應(yīng)控制在15%-20%。
臨床樣本一般為外周血血漿樣本。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)等相關(guān)文件的規(guī)定，并滿足相關(guān)產(chǎn)品說(shuō)明書的要求。
3. 臨床試驗(yàn)方法
3.1篩查性能評(píng)價(jià)
研究方法為前瞻性研究，按照臨床試驗(yàn)方案設(shè)定的入組標(biāo)準(zhǔn)前瞻性入組受試者。采用試驗(yàn)體外診斷試劑與確診胎兒染色體非整倍體T21、T18、T13的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究。以介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)結(jié)果（包括絨毛取材術(shù)、羊膜腔穿刺術(shù)和經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)）和出生隨訪結(jié)果作為確診胎兒染色體非整倍體T21、T18、T13的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于出生隨訪，應(yīng)在方案中明確隨訪由產(chǎn)科或新生兒科醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行，各機(jī)構(gòu)在制定方案中對(duì)醫(yī)師進(jìn)行統(tǒng)一的培訓(xùn)，采用科學(xué)的、統(tǒng)一的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)價(jià)項(xiàng)目（應(yīng)當(dāng)提供依據(jù)）對(duì)出生后嬰兒表觀進(jìn)行是否是三體患兒的診斷，也可采用出生后采血進(jìn)行核型分析的方式進(jìn)行診斷。
樣本量依據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)及胎兒染色體三體發(fā)病率計(jì)算，根據(jù)其臨床預(yù)期用于產(chǎn)前篩查的用途，按照發(fā)病率計(jì)算建議總例數(shù)不少于10000例。試驗(yàn)要求能夠篩選出一定數(shù)量的T21陽(yáng)性、至少1例的T18陽(yáng)性和至少1例的T13陽(yáng)性。如未篩查出符合要求的陽(yáng)性病例數(shù)量，則應(yīng)繼續(xù)增加樣本例數(shù)進(jìn)行篩查，所有樣本均應(yīng)可以溯源。
選用交叉四格表的形式總結(jié)試驗(yàn)體外診斷試劑檢測(cè)結(jié)果和臨床參考標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等，并計(jì)算95%置信區(qū)間。
臨床試驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格控制失訪率，對(duì)于失訪數(shù)據(jù)應(yīng)說(shuō)明原因，并確認(rèn)是否對(duì)臨床試驗(yàn)造成偏倚。
3.2臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)
為了更加充分地評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測(cè)性能，鑒于篩查性能評(píng)價(jià)中陽(yáng)性樣本例數(shù)較少，可在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步進(jìn)行回顧性入組，納入部分已確診胎兒染色體非整倍體T21、T18、T13的陽(yáng)性病例，采用試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究。此部分研究，應(yīng)在試驗(yàn)方案和報(bào)告中對(duì)病例選擇的方式和原因進(jìn)行明確的說(shuō)明。
臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)模型進(jìn)行樣本量估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計(jì)方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。例如，臨床試驗(yàn)的陽(yáng)性樣本和陰性樣本的最低樣本量，可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得的陽(yáng)性符合率和陰性符合率的預(yù)期值采用如下公式計(jì)算：
公式中n為樣本量，Z1-α/2為置信度標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù)，P為評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值，Δ為P的允許誤差大小。一般取P的95%可信區(qū)間寬度的一半，常用的取值為0.05-0.1。
根據(jù)臨床發(fā)病率及其他因素綜合考慮，對(duì)于胎兒染色體非整倍體T21，其陽(yáng)性例數(shù)應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)于胎兒染色體非整倍體T18，建議陽(yáng)性樣本例數(shù)不少于20例；對(duì)于胎兒染色體非整倍體T13，建議陽(yáng)性樣本例數(shù)不少于10例。
選用交叉四格表的形式總結(jié)兩種方法的定性檢測(cè)結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以驗(yàn)證兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性。評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括陽(yáng)性符合率和陰性符合率，并計(jì)算95%置信區(qū)間。對(duì)于兩種方法檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)對(duì)不一致的原因進(jìn)行分析。
4.倫理學(xué)要求
臨床試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)遵守《世界醫(yī)學(xué)大會(huì)赫爾辛基宣言》的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得倫理委員會(huì)的同意。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見(jiàn)。
5.臨床試驗(yàn)方案
5.1臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。需遵循如下要點(diǎn)：
5.1.1各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行統(tǒng)一方案，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。臨床試驗(yàn)方案的修改過(guò)程和版本要記錄在案，且每次改動(dòng)應(yīng)記錄原因。
5.1.2整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申辦者的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。
5.2臨床試驗(yàn)方案還應(yīng)詳細(xì)闡述如下內(nèi)容：
5.2.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介；對(duì)臨床試驗(yàn)的整體管理情況、質(zhì)量控制、試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行的規(guī)定。
5.2.2臨床背景、病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、樣本的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。其中須注意，病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)嚴(yán)格制定并實(shí)施，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性，對(duì)于編盲的方式應(yīng)有詳細(xì)描述。
5.2.3如采用出生隨訪方式，則應(yīng)對(duì)出生隨訪的依據(jù)、項(xiàng)目及判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行詳細(xì)規(guī)定，包括但不限于如下內(nèi)容：隨訪操作及記錄人員、復(fù)核人員、隨訪方式、隨訪項(xiàng)目、判定依據(jù)、隨訪時(shí)間周期及間隔、隨訪終點(diǎn)等。
5.2.4樣本類型、樣本的收集、處理及保存等。
5.2.5數(shù)據(jù)預(yù)處理、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。
6.臨床試驗(yàn)報(bào)告
臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。臨床試驗(yàn)報(bào)告的撰寫參考《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》及關(guān)于實(shí)施《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》有關(guān)事項(xiàng)的通告附件《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)報(bào)告范本》的相關(guān)要求。
6.1樣本例數(shù)（包括各機(jī)構(gòu)的樣本例數(shù)、陽(yáng)性檢出例數(shù)等）、孕婦年齡分布情況、建議以列表方式給出具體例數(shù)及百分比。
6.2對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。
6.3具體試驗(yàn)過(guò)程及試驗(yàn)過(guò)程中需要說(shuō)明的問(wèn)題，研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改。
6.4申報(bào)試劑批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息，配合使用的試劑、耗材及儀器的廠商信息、貨號(hào)及產(chǎn)品醫(yī)療器械注冊(cè)證編號(hào)。需要強(qiáng)調(diào)的是：臨床試驗(yàn)研究應(yīng)使用與說(shuō)明書描述一致的配套使用試劑及儀器。
6.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：樣本的納入與排除情況；數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)與否以及最終是否納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理。另外考慮到對(duì)不同年齡段孕婦樣本的陽(yáng)性檢出率可能存在一定差異，故建議對(duì)不同年齡段孕婦樣本分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
6.6討論和結(jié)論：對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。
6.7臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)表應(yīng)包括如下信息：唯一可追溯的樣本編號(hào)、年齡、臨床參考標(biāo)準(zhǔn)具體結(jié)果、試驗(yàn)體外診斷試劑檢測(cè)結(jié)果。其中臨床參考標(biāo)準(zhǔn)如為核型分析，應(yīng)明確具體結(jié)果；如為出生隨訪，則應(yīng)明確胎兒出生時(shí)間、隨訪時(shí)間、隨訪方式、隨訪結(jié)果。全部數(shù)據(jù)應(yīng)可溯源。
（五）產(chǎn)品說(shuō)明書
產(chǎn)品說(shuō)明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，進(jìn)口產(chǎn)品的中文說(shuō)明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與注冊(cè)申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。
結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
1.【產(chǎn)品名稱】
建議按照如下方式命名：胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（方法學(xué)）或胎兒染色體非整倍體（T21/T18/T13）檢測(cè)試劑盒（方法學(xué)）。
舉例：胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（半導(dǎo)體測(cè)序法）、胎兒染色體非整倍體（T21/T18/T13）檢測(cè)試劑盒（可逆末端終止測(cè)序法）、胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（聯(lián)合探針錨定聚合測(cè)序法）。
2.【預(yù)期用途】至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：
2.1該產(chǎn)品用于定性檢測(cè)孕周為12+0周及以上的孕婦外周血血漿中胎兒游離脫氧核糖核酸，通過(guò)分析樣本中的胎兒游離DNA的21號(hào)、18號(hào)及13號(hào)染色體數(shù)量的差異，對(duì)胎兒染色體非整倍體疾病21-三體綜合征、18-三體綜合征和13-三體綜合征進(jìn)行產(chǎn)前篩查。如試劑盒僅是測(cè)序步驟中的建庫(kù)步驟，則預(yù)期用途應(yīng)描述為“構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)”。
2.2按照《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》介紹臨床適應(yīng)癥及背景，說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等，應(yīng)介紹產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)。
2.3明確該產(chǎn)品僅作為21號(hào)、18號(hào)及13號(hào)染色體的產(chǎn)前篩查用途，其結(jié)果要由產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確認(rèn)并遵守相關(guān)法律法規(guī)及行業(yè)規(guī)范。
3.【檢驗(yàn)原理】
詳細(xì)說(shuō)明該產(chǎn)品檢測(cè)母體胎兒游離DNA判斷染色體數(shù)量的檢測(cè)原理及方法學(xué)原理（必要時(shí)可用圖示進(jìn)行）。
4.【主要組成成分】
說(shuō)明試劑盒所包含組分的名稱、數(shù)量，必要時(shí)明確組分比例、濃度等信息，說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。
試劑盒中不包含但該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，說(shuō)明書中應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、生產(chǎn)企業(yè)、貨號(hào)、注冊(cè)證號(hào)/醫(yī)療器械備案憑證編號(hào)（如有）及其他相關(guān)信息，測(cè)序芯片應(yīng)明確型號(hào)。測(cè)序芯片若包含在測(cè)序通用試劑中，有單獨(dú)型號(hào)應(yīng)明確，若無(wú)型號(hào)應(yīng)明確芯片具體名稱。
5.【儲(chǔ)存條件及有效期】
5.1按照穩(wěn)定性研究資料，說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期。
5.2按照《醫(yī)療器械說(shuō)明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（總局令第5號(hào)）增加生產(chǎn)日期，使用期限或者失效日期。
6.【樣本要求】
6.1樣本采集要求。
6.2說(shuō)明對(duì)采血管及抗凝劑的要求。
6.3樣本保存、運(yùn)輸及處理：孕婦外周血樣本的保存條件（溫度、保質(zhì)期限）、運(yùn)輸條件、處理?xiàng)l件（如：多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)必須分離血漿）；已分離的血漿樣本的保存條件（溫度、保質(zhì)期限）、運(yùn)輸條件、處理?xiàng)l件（如：核酸提取前的預(yù)處理）；冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。
上述內(nèi)容均需在穩(wěn)定性研究資料中詳述并用產(chǎn)品進(jìn)行性能評(píng)估驗(yàn)證。
7.【適用機(jī)型】
適用的測(cè)序儀器具體型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。
8.【檢驗(yàn)方法】
無(wú)論是否包含提取試劑或測(cè)序試劑，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)從頭詳細(xì)描述完成完整檢測(cè)所需的全部步驟以指導(dǎo)用戶正確操作，包括血漿游離DNA的提取、文庫(kù)構(gòu)建、文庫(kù)定量及上機(jī)測(cè)序等。該類產(chǎn)品操作程序較多，作為產(chǎn)品使用說(shuō)明書該項(xiàng)內(nèi)容應(yīng)當(dāng)盡量詳細(xì)，以能夠指導(dǎo)用戶進(jìn)行操作，其中應(yīng)當(dāng)包括各步驟的注意事項(xiàng)及配合使用物品的技術(shù)參數(shù)、儀器廠家和型號(hào)（如PCR儀，生物分析儀等）和反應(yīng)條件，以半導(dǎo)體測(cè)序?yàn)槔?/span>
8.1 DNA提?。篋NA提取方式、提取試劑盒貨號(hào)及醫(yī)療器械備案憑證編號(hào)；DNA提取液的短期和長(zhǎng)期保存方式、凍融次數(shù)等。
8.2文庫(kù)構(gòu)建：末端修復(fù)、接頭連接、缺口修復(fù)、PCR擴(kuò)增；所構(gòu)建的文庫(kù)短期和長(zhǎng)期保存方式，凍融次數(shù)等。
8.3文庫(kù)定量；描述對(duì)于定量后文庫(kù)濃度和質(zhì)量的要求，以及何種情況進(jìn)行文庫(kù)的重新構(gòu)建。
8.4測(cè)序模板的制備：混合文庫(kù)、PCR、模板富集。
8.5上機(jī)測(cè)序：儀器準(zhǔn)備、設(shè)置及儀器使用相關(guān)參數(shù)。
8.6說(shuō)明文庫(kù)濃度、有效數(shù)據(jù)量以及樣本結(jié)果的質(zhì)控要求等。
9.【陽(yáng)性判斷值】
明確設(shè)定陽(yáng)性判斷值所使用的算法及驗(yàn)證參考值所使用的樣本例數(shù)及類型。如使用軟件，則應(yīng)明確軟件名稱、軟件發(fā)布版本號(hào)、生產(chǎn)廠家及醫(yī)療器械注冊(cè)證書編號(hào)；如暫未取得醫(yī)療器械注冊(cè)證書，應(yīng)空出相應(yīng)內(nèi)容，在軟件名稱后注明（醫(yī)療器械注冊(cè)證書編號(hào)：）。
10.【檢驗(yàn)方法的局限性】
10.1 本試劑盒作為胎兒染色體非整倍體篩查檢測(cè)，其結(jié)果僅供臨床參考，不能作為診斷的唯一依據(jù)。對(duì)患者的臨床診斷應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)方法（染色體核型分析）并結(jié)合其癥狀/體征、病史及其他實(shí)驗(yàn)室檢查等情況綜合進(jìn)行。本試劑盒不能對(duì)胎兒染色體結(jié)構(gòu)異常進(jìn)行檢測(cè)。
10.2 本試劑盒適用于孕婦外周血血漿樣本檢測(cè)，不適用于其它樣本檢測(cè)。
10.3 胎兒游離DNA濃度在孕婦外周血中存在較大個(gè)體差異，變化范圍從2%到30%不等且和孕周密切相關(guān)，因此若因胎兒游離DNA濃度較低造成檢驗(yàn)失敗時(shí)，可待孕周較大時(shí)再次抽血檢測(cè)。
10.4以下幾種情況的孕婦樣品可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，需要結(jié)合其他檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷：
10.4.1孕婦本人為染色體非整倍體疾病患者、其他染色體疾病患者或攜帶者；
10.4.2胎兒染色體異常中的平衡易位、嵌合型三體異常；
10.4.3懷有雙胎或者多胎（三胎及三胎以上）的孕婦；
10.4.4近期接受過(guò)移植手術(shù)、干細(xì)胞治療；近期接受過(guò)免疫治療或輸注過(guò)異體血制品；
10.4.5孕婦本人為腫瘤患者；
10.4.6通過(guò)體外受精—胚胎移植（IVF-ET）方式受孕的孕婦；
10.4.7體重嚴(yán)重超重的孕婦。
10.5樣本采集、運(yùn)輸及處理不當(dāng)、未按說(shuō)明書操作均有可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果；描述在樣本采集，保存、運(yùn)輸中需遵循的原則及注意事項(xiàng)，例如：
10.5.1描述適用的抗凝采血管；
10.5.2顛倒混勻時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，防止溶血；
10.5.3全血離體后須進(jìn)行血漿分離的時(shí)間；
10.5.4血漿分離過(guò)程中注意不要吸到中間層的白細(xì)胞；
10.5.5血漿樣本是否能夠進(jìn)行反復(fù)凍融；
10.5.6禁止將XX抗凝樣本和血漿樣本在室溫狀態(tài)下放置；
10.5.7血漿樣本寄送采用的運(yùn)輸保存方式。
10.6 其他局限性。
11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
按照分析性能評(píng)估資料內(nèi)容詳述以下性能指標(biāo)：最低檢出限、企業(yè)內(nèi)部參考品符合率、精密度、干擾試驗(yàn)、特異性。各項(xiàng)評(píng)估應(yīng)包括評(píng)估方法、數(shù)據(jù)和結(jié)果。應(yīng)將臨床評(píng)價(jià)的試驗(yàn)結(jié)果納入，包括臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量、樣本例數(shù)、試驗(yàn)結(jié)果等內(nèi)容。
（六）質(zhì)量管理體系文件
注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在申請(qǐng)注冊(cè)時(shí)提交與產(chǎn)品研制、生產(chǎn)有關(guān)的質(zhì)量管理體系相關(guān)資料。詳述產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程，提供生產(chǎn)工藝流程圖。明確申報(bào)產(chǎn)品反應(yīng)及檢測(cè)原理和過(guò)程，標(biāo)明主要控制點(diǎn)與項(xiàng)目及主要原材料、采購(gòu)件的來(lái)源及質(zhì)量控制方法。
如適用，應(yīng)當(dāng)提供擬核查產(chǎn)品與既往已通過(guò)核查產(chǎn)品在生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝等方面的對(duì)比說(shuō)明。
三、參考文獻(xiàn)
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