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剛剛，國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心發(fā)布《CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）》，內(nèi)容如下：

 

CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則

（征求意見稿）

 

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對細(xì)胞色素P450同工酶2C9（Cytochrome P450 2C9，CYP2C9）和維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合體亞基1（vitamin K epoxide reductase complex, subunit 1，VKORC1）基因多態(tài)性檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，也不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則的相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于采用PCR法，對預(yù)期服用或正在服用華法林藥物的患者靜脈全血或口腔拭子等樣本DNA中的CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性進(jìn)行體外定性檢測的試劑，用于華法林的用藥指導(dǎo)，且指導(dǎo)原則僅針對該用藥指導(dǎo)的特定基因多態(tài)性位點(diǎn)檢測進(jìn)行了說明，具體涵蓋CYP2C9 *2（rs1799853，c.430C>T）和/或CYP2C9 *3（rs 1057910，1075A>C），以及VKORC1 -1639G>A（rs9923231）和/或VKORC1 1173C>T（rs9934438）。

對于CYP2C9和VKORC1其他多態(tài)性位點(diǎn)的檢測試劑，以及采用其他分子生物學(xué)檢測方法或其他樣本類型的檢測試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請人可參照本指導(dǎo)原則，根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評價(jià)，并補(bǔ)充其他的評價(jià)資料。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行CYP2C9和VKORC1雙基因多態(tài)性檢測且用于華法林指導(dǎo)用藥的試劑，對于進(jìn)行CYP2C9或VKORC1單基因多態(tài)性檢測且用于華法林用藥指導(dǎo)的試劑，適用部分亦可參考本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則適用于CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測試劑注冊申請和變更注冊申請的情形。本指導(dǎo)原則針對相關(guān)產(chǎn)品注冊申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。其中，產(chǎn)品描述應(yīng)詳述技術(shù)原理、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)、與同類和/或前代產(chǎn)品的比較等。與同類和/或前代產(chǎn)品的比較應(yīng)著重從技術(shù)原理、主要組成成分、預(yù)期用途、被測靶標(biāo)（基因多態(tài)性位點(diǎn)）、性能指標(biāo)、臨床應(yīng)用情況等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與已獲批準(zhǔn)的同類/前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。預(yù)期用途應(yīng)詳述基因多態(tài)性位點(diǎn)與臨床適應(yīng)證的關(guān)系，明確各基因型的發(fā)生率等情況，特別是在中國人群的分布情況。

若被測靶標(biāo)為新的多態(tài)性位點(diǎn)，申請人還應(yīng)提交支持資料，以證明：1.攜帶該新位點(diǎn)等位基因所編碼的CYP2C9酶或VKORC酶，其活性和穩(wěn)定性的變化情況；2.對于攜帶該新位點(diǎn)等位基因的患者，華法林在其體內(nèi)的代謝過程可能出現(xiàn)的預(yù)期改變；3.提供充分的中國人群臨床證據(jù)，以證明該新位點(diǎn)的臨床意義。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價(jià)等結(jié)果，依據(jù)相關(guān)文件資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

第三類體外診斷試劑應(yīng)當(dāng)提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告。針對已有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布的基因多態(tài)性位點(diǎn)，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)該位點(diǎn)檢測國家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求?？商峤簧暾埲顺鼍叩淖詸z報(bào)告或委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。

如有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

2.分析性能研究

注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，并提交詳細(xì)的性能評估資料，包括試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果及結(jié)論等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能研究的背景信息也應(yīng)在資料中有所體現(xiàn)，包括試驗(yàn)地點(diǎn)，采用的試劑名稱、規(guī)格和批號，適用儀器名稱和型號，樣本的背景信息（來源、樣本編號、樣本類型、采集及處理方式、基因型和濃度確認(rèn)方法及結(jié)果）等。分析性能評估用樣本一般應(yīng)為臨床樣本，對于在中國人群中發(fā)生頻率較低的某些稀有基因型（CYP2C9 *2位點(diǎn)CT和TT基因型、CYP2C9 *3位點(diǎn)CC基因型），部分研究可采用細(xì)胞系樣本進(jìn)行配置，須注明細(xì)胞系樣本來源信息。

如聲稱多種適用樣本類型，注冊申請人應(yīng)針對不同樣本類型分別完成性能評估研究。

分析性能評估的試驗(yàn)方法可參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估指導(dǎo)原則進(jìn)行，對于本類產(chǎn)品建議著重從以下分析性能進(jìn)行研究。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性研究應(yīng)采用臨床樣本，主要包括核酸提取純化前樣本的穩(wěn)定性和提取純化后核酸的穩(wěn)定性兩方面。在包含最不利情形的條件下儲存，每間隔一定的時(shí)間段對儲存樣本進(jìn)行分析驗(yàn)證。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價(jià)。如聲稱多種適用樣本類型，注冊申請人應(yīng)針對不同樣本類型分別進(jìn)行樣本穩(wěn)定性研究。

2.2適用的樣本類型

列明產(chǎn)品適用的樣本類型。應(yīng)采用合理方法對每種樣本類型進(jìn)行適用性研究確認(rèn)，對于全血樣本還需考察不同抗凝劑的適用性。對于不可比樣本應(yīng)分別提交相應(yīng)的分析性能研究資料。

2.3準(zhǔn)確度

采用申報(bào)產(chǎn)品與核酸序列測定方法或已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行方法學(xué)比對研究，評價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的準(zhǔn)確度，樣本應(yīng)由若干份臨床樣本組成，且樣本應(yīng)涵蓋CYP2C9 *2位點(diǎn)CC、CT及TT基因型， CYP2C9 *3位點(diǎn)AA、AC和CC基因型， VKORC1 -1639位點(diǎn)AA、AG及GG基因型，VKORC1 1173位點(diǎn)TT、TC和CC基因型。

2.4精密度

精密度評價(jià)應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行研究，稀有基因型可采用細(xì)胞系，樣本應(yīng)至少涵蓋申報(bào)產(chǎn)品所有檢測基因的雜合突變型（即CYP2C9 *2位點(diǎn)CT基因型， CYP2C9 *3位點(diǎn)AC基因型， VKORC1 -1639位點(diǎn)AG基因型，VKORC1 1173位點(diǎn)TC基因型）。試驗(yàn)操作應(yīng)按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等樣本處理步驟。

精密度評價(jià)需滿足如下要求：

2.4.1對可能影響檢測精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測試劑（包括核酸提取/純化組分）本身外，還應(yīng)考慮儀器、操作者、地點(diǎn)、時(shí)間、運(yùn)行、試劑批次等因素。

2.4.2設(shè)定合理的精密度評價(jià)周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間實(shí)驗(yàn)室間以及操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價(jià)。

2.4.3用于精密度評價(jià)的樣本建議至少包含檢出限附近水平和中/高濃度水平，檢測結(jié)果應(yīng)與預(yù)期結(jié)果一致。

2.4.4申請人應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)，對精密度指標(biāo)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如CV值。

2.5檢出限和檢測上限

2.5.1檢出限和檢測上限的建立

CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測試劑的檢出限為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)基因的人基因組DNA最低濃度。

可采用梯度濃度的人基因組DNA樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，確定95%檢出率水平下的人基因組DNA最低濃度，即為檢出限。系列稀釋度應(yīng)能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間（0～100%），可根據(jù)各濃度梯度檢測結(jié)果直接判定，也可通過適當(dāng)?shù)哪Ｐ停ㄈ鏟robit分析）和其他分析方法計(jì)算申報(bào)產(chǎn)品在設(shè)定概率下的檢出限，一般在該檢測濃度下應(yīng)具有95%的檢出率。

同時(shí)，申請人亦應(yīng)評價(jià)CYP2C9和人VKORC1基因多態(tài)性試劑可準(zhǔn)確檢出的人基因組DNA濃度上限，即適當(dāng)檢出率水平下的最高人基因組DNA濃度。

檢出限評價(jià)應(yīng)采用臨床樣本或細(xì)胞系，并至少包含申報(bào)產(chǎn)品所有檢測基因的雜合突變型，并提供詳細(xì)的樣本型別和濃度的確定方法。

2.5.2檢出限的驗(yàn)證

選取與建立不同的臨床樣本對聲稱可檢測位點(diǎn)的所有基因型進(jìn)行驗(yàn)證，稀有基因型可采用細(xì)胞系，對檢出限附近濃度水平的樣本進(jìn)行至少20次的重復(fù)檢測，應(yīng)滿足95%檢出率要求。

2.6分析特異性

2.6.1交叉反應(yīng)

應(yīng)對與靶基因序列相近或具有同源性序列、易引起交叉反應(yīng)的基因序列（如CYP2C9及VKORC1的其他突變序列、CYP2C19、CYP2C8、CYP2C18、VKORC1L1、檢測靶標(biāo)外的其他位點(diǎn)突變序列）進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

試驗(yàn)方案需明確交叉樣本的來源/制備方法、核酸序列確認(rèn)方式及結(jié)果，并提交詳細(xì)的研究資料。

2.6.2干擾研究

應(yīng)針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。干擾物的選擇與所用樣本類型有關(guān)，對于全血樣本，內(nèi)源性干擾物質(zhì)應(yīng)包括血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素、白蛋白等，外源性干擾物質(zhì)應(yīng)包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物（如肝素、華法林、阿司匹林、氯吡格雷、胺碘酮等）。

干擾試驗(yàn)可通過在臨床樣本中添加干擾物質(zhì)的方式，評價(jià)添加前后干擾物質(zhì)對靶基因檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評價(jià)。建議在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評價(jià)，如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。

2.7核酸提取/純化性能

　　在進(jìn)行核酸檢測之前，建議有核酸提取/純化步驟。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測試劑的特性，對配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究，并評價(jià)該方法能否滿足CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測試劑的要求，提供詳細(xì)的評價(jià)資料。

若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測試劑進(jìn)行精密度、檢出限和抗干擾的驗(yàn)證。

2.8企業(yè)參考品驗(yàn)證

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.9反應(yīng)體系

2.9.1樣本采集和處理

請?jiān)斒鰳颖镜牟杉吞幚矸绞剑鞔_樣本的保存介質(zhì)。

2.9.2反應(yīng)體系確定

依據(jù)產(chǎn)品特性，提供最佳反應(yīng)體系確定的研究資料，包括但不限于核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR反應(yīng)中樣本和試劑的加樣體積、各試劑組分加樣量及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。

如有多個(gè)適用機(jī)型，需提交不同適用機(jī)型基線和閾值確定的研究資料。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

3.穩(wěn)定性研究

申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性（如適用）及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)、分析結(jié)果以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批產(chǎn)品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4. 陽性判斷值研究

對于此類試劑，陽性判斷值即為能夠獲得理想的檢測準(zhǔn)確性的臨界值（Cut-off）。建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，涵蓋可檢測位點(diǎn)的所有基因型，采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行研究。亦可采用其他科學(xué)合理的方法進(jìn)行陽性判斷值研究。相關(guān)資料中應(yīng)詳述試驗(yàn)方案、樣本數(shù)量、樣本入組標(biāo)準(zhǔn)、樣本背景信息（來源、可溯源編號、性別、年齡等）及試驗(yàn)結(jié)果等。如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。如采用其他方法對陽性判斷值進(jìn)行確認(rèn)研究，應(yīng)說明這種方法的合理性。

    如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，需要對各樣本類型分別進(jìn)行陽性判斷值研究。

5. 其他資料

5.1主要原材料研究資料

該類產(chǎn)品的主要原材料一般包括引物、探針、酶、dNTP、反應(yīng)緩沖液、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品、參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗(yàn)資料、生產(chǎn)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

5.1.1引物和探針：應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物和探針核酸序列、檢測靶序列及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計(jì)兩套或多套引物和探針以供篩選，針對待測位點(diǎn)的檢測靈敏度和特異性等進(jìn)行評價(jià)，選擇最佳引物探針組合，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。同時(shí)應(yīng)針對引物和探針核酸序列及檢測靶序列進(jìn)行同源性比對，如有同源序列應(yīng)著重評價(jià)是否會有交叉反應(yīng)。

申請人應(yīng)針對選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，一般包括：序列準(zhǔn)確度、分子量、純度、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)，以及功能性試驗(yàn)等，并依據(jù)評價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTPs）：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP或dUTP，應(yīng)提交對其純度、濃度以及功能性試驗(yàn)等驗(yàn)證資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.3酶：涉及的酶主要包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。應(yīng)分別對酶活性、熱穩(wěn)定性、功能性試驗(yàn)等進(jìn)行評價(jià)和驗(yàn)證，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

5.1.4質(zhì)控品

CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測試劑的質(zhì)控品可分別設(shè)置聲稱檢測位點(diǎn)所有基因型的DNA樣品，同時(shí)設(shè)置不含待測靶序列的空白質(zhì)控品用于交叉污染的質(zhì)控；亦可直接采用待測位點(diǎn)的雜合突變型DNA樣品及空白質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制。

對于此類產(chǎn)品，一般情況下，反應(yīng)體系中野生型序列和突變型序列均有陽性反應(yīng)，可以對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則試劑盒中可不另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)對照；否則，應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)對照。

質(zhì)控體系應(yīng)能夠?qū)z測全過程進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，包括試劑及儀器性能、可能的擴(kuò)增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染等因素造成的假陰性或假陽性結(jié)果。質(zhì)控品可采用質(zhì)?；蚺R床樣本的核酸提取液等?？瞻踪|(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請人應(yīng)針對質(zhì)控品原料選擇、制備、定值過程等提供詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)，并對質(zhì)控品的檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。

5.1.5 核酸提取/純化試劑（如有）

應(yīng)提供試劑的主要組成、原理介紹及相關(guān)的篩選及驗(yàn)證資料。

5.1.6企業(yè)參考品

　　企業(yè)參考品一般包括準(zhǔn)確性參考品、特異性參考品、檢出限參考品和精密度參考品等，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際需要設(shè)置企業(yè)參考品。

申請人應(yīng)提交有關(guān)企業(yè)參考品原料來源、選擇、制備方法、濃度及基因型別確認(rèn)方法或試劑的研究資料。參考品設(shè)置應(yīng)采用臨床樣本，樣本類型與待測樣本一致，如涉及稀有基因型別（如CYP2C9 *2位點(diǎn)CT和TT基因型、CYP2C9 *3位點(diǎn)CC基因型，等），可使用細(xì)胞系樣本。

企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

準(zhǔn)確性參考品：應(yīng)包含產(chǎn)品聲稱可檢測位點(diǎn)的所有基因型樣本。

特異性參考品：應(yīng)考慮檢測特異性的評價(jià)，適當(dāng)納入同源序列交叉反應(yīng)樣本、干擾樣本等。

檢出限參考品：可選擇檢出限濃度或略高于檢出限濃度的樣本，應(yīng)至少包含所有多態(tài)性位點(diǎn)的雜合突變型樣本。

精密度參考品：建議包括高、低兩個(gè)濃度的樣本，其中一個(gè)濃度應(yīng)為檢出限附近的濃度。至少包括所有多態(tài)性位點(diǎn)的雜合突變型樣本。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

可結(jié)合工藝流程圖描述生產(chǎn)工藝過程。生產(chǎn)過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，明確關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。并提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

（四）臨床評價(jià)資料

臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第72號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。

1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）已備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗(yàn)。申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，操作人員應(yīng)熟悉臨床試驗(yàn)方案及檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉臨床試驗(yàn)方案。

2.臨床試驗(yàn)方法

2.1針對已有同類產(chǎn)品上市的情況

2.1.1對于已有同類產(chǎn)品上市的產(chǎn)品，建議申請人選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品或Sanger測序作為對比試劑/方法，采用申報(bào)產(chǎn)品與之進(jìn)行比對研究，評價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測性能。對比試劑/方法的選擇應(yīng)從預(yù)期用途、樣本要求、檢測性能等方面，確認(rèn)其與申報(bào)產(chǎn)品具有較好的可比性。

2.2 針對無同類產(chǎn)品上市的情況

2.2.1 針對無同類產(chǎn)品上市的新產(chǎn)品，可以選擇公認(rèn)的參考方法（如：Sanger測序法）作為對比方法，確認(rèn)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測性能。

2.2.2 針對無同類產(chǎn)品上市的新產(chǎn)品，如新的多態(tài)性位點(diǎn)用于華法林用藥指導(dǎo)已獲行業(yè)認(rèn)可（包括：CPIC、國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R、相關(guān)藥物說明書以及臨床應(yīng)用等的認(rèn)可），且有中國人群的臨床證據(jù)，可提交上述資料作為其臨床意義的支持證據(jù)。如新多態(tài)性位點(diǎn)用于華法林用藥指導(dǎo)尚未有共識性文件支持，應(yīng)提交基于中國人群的充分的臨床數(shù)據(jù)，證明產(chǎn)品臨床意義。

3.受試者選擇和樣本類型

3.1受試者選擇

受試者應(yīng)為預(yù)期服用或正在服用華法林藥物的患者，如深靜脈血栓形成、肺栓塞、心房顫動、心臟瓣膜置換術(shù)后血栓栓塞并發(fā)癥、心肌梗死后等疾病患者。

3.2樣本類型

適用的樣本類型一般為靜脈抗凝全血，也可能涉及口腔拭子。

如申報(bào)產(chǎn)品同時(shí)包括靜脈全血或口腔拭子樣本類型，針對臨床檢測性能評價(jià)，靜脈全血樣本類型的對比方法應(yīng)采用相同的樣本類型檢測，對于口腔拭子樣本類型，可與采用靜脈全血樣本類型的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究，或與靜脈全血樣本類型進(jìn)行同源比對。

臨床試驗(yàn)中應(yīng)為臨床原始樣本，不應(yīng)直接采用提取的基因組DNA進(jìn)行試驗(yàn)。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)同時(shí)滿足申報(bào)產(chǎn)品說明書以及對比試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。

4.臨床試驗(yàn)樣本量

針對每個(gè)位點(diǎn)，臨床試驗(yàn)樣本量均建議采用單組目標(biāo)值法進(jìn)行估算。不同基因型亞組，其符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議均不低于95%。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為申報(bào)產(chǎn)品評價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

臨床試驗(yàn)總體樣本量確定時(shí)應(yīng)在上述最低樣本量估算的基礎(chǔ)上，同時(shí)考慮其他可能造成受試者脫落的情況等適當(dāng)增加入組樣本量。

針對CYP2C9*2位點(diǎn)，應(yīng)分別估算CC基因型亞組的例數(shù)，以及CT/TT基因型亞組的例數(shù)。其中CT和TT基因型均應(yīng)有樣本入組。

針對CYP2C9*3位點(diǎn)，應(yīng)分別估算AA基因型亞組的例數(shù)，以及AC/CC基因型亞組的例數(shù)。其中AC和CC基因型均應(yīng)有樣本入組。

針對VKORC1 1639位點(diǎn)，應(yīng)分別估算AA基因型亞組的例數(shù)，以及AG/GG基因型亞組的例數(shù)。其中GG基因型例數(shù)不少于30例。

針對VKORC1 1173位點(diǎn)，應(yīng)分別估算TT基因型亞組的例數(shù)，以及TC/CC基因型亞組的例數(shù)。其中 CC基因型例數(shù)不少于30例。

如申報(bào)產(chǎn)品同時(shí)包括靜脈抗凝全血和口腔拭子樣本類型，臨床試驗(yàn)應(yīng)以靜脈全血樣本類型為主，樣本量滿足如上要求，針對口腔拭子樣本類型，可采用抽樣調(diào)查的公式進(jìn)行樣本量估算，對不同基因型進(jìn)行充分驗(yàn)證。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)對入組人群進(jìn)行人口學(xué)分析，包括年齡、性別和臨床診斷背景信息等。

針對每個(gè)基因位點(diǎn)，采用3x3表格進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算每個(gè)基因型符合率的點(diǎn)估計(jì)值，并針對“4臨床試驗(yàn)樣本量”中涉及的主要基因型亞組計(jì)算符合率及其95%置信區(qū)間。

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，建議采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對差異原因進(jìn)行分析。

6.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對受試者的風(fēng)險(xiǎn)，提請倫理委員會審查，并獲得倫理委員會的同意。注冊申報(bào)時(shí)應(yīng)提交倫理委員會的審查意見。

7.臨床試驗(yàn)方案

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行同一臨床試驗(yàn)方案，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被剔除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程和結(jié)果判定時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)方案的培訓(xùn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

9.臨床試驗(yàn)小結(jié)與報(bào)告的撰寫

根據(jù)《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，撰寫臨床試驗(yàn)小結(jié)與報(bào)告，并且滿足簽章等要求。臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。CYP2C9和VKORC1基因多態(tài)性檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】 應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于體外定性檢測人體XX樣本中的XX基因XX位點(diǎn)的多態(tài)性。

本產(chǎn)品用于華法林的用藥指導(dǎo)。

1.2介紹被測靶標(biāo)（基因多態(tài)性位點(diǎn)），規(guī)范表述多態(tài)性位點(diǎn)，說明基因多態(tài)性位點(diǎn)與臨床適用癥的關(guān)系，明確各基因型的臨床發(fā)生頻率。

1.3明確本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為患者是否用藥的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情、療效及其他實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)等對本產(chǎn)品的檢測結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

2.【檢驗(yàn)原理】

對試劑盒的被測靶標(biāo)進(jìn)行詳細(xì)描述（基因位置、多態(tài)性位點(diǎn)及相關(guān)特征等），對試劑盒所用探針、引物、多態(tài)性的判定方式等進(jìn)行詳細(xì)的介紹；對不同樣本反應(yīng)管組合、質(zhì)控品設(shè)置及熒光信號檢測原理等進(jìn)行介紹。

如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對其作用機(jī)理進(jìn)行簡要介紹。

3.【主要組成成分】

　　明確試劑盒中各組分及具體成分。明確需要但未提供的材料等信息。

4.【樣本要求】

　　應(yīng)明確樣本采集、處理、保存等各環(huán)節(jié)要求，說明樣本保存條件及期限等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制等。

5.【檢驗(yàn)方法】 

詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

5.1實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。

5.2試劑配制方法和注意事項(xiàng)。

5.3簡述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)（如適用），對核酸提取純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理的質(zhì)量控制，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。

5.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

5.5 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動化檢測程序及相關(guān)注意事項(xiàng)。

5.6儀器設(shè)置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標(biāo)記情況、對待測多態(tài)性及其他質(zhì)控品的熒光通道選擇等。

    6.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

　　結(jié)合質(zhì)控品、樣本管檢測結(jié)果以及多態(tài)性類型與華法林表型之間的關(guān)系，可以列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。

7.【檢驗(yàn)方法局限性】

　　7.1申報(bào)產(chǎn)品僅對XX基因XX位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行了驗(yàn)證。

7.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析

7.2.1不合理的樣本采集、運(yùn)送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致檢測失敗。

7.2.2未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。

7.2.3樣本類型如包含口腔拭子，需說明吸煙、進(jìn)食等行為可能對檢測結(jié)果的影響。

8.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

8.1國家參考品和企業(yè)參考品的符合率。

　  8.2對準(zhǔn)確度、精密度的研究方法及結(jié)果進(jìn)行總結(jié)。

8.3檢出限和檢測上限：簡單介紹檢出限的確定方法，并明確檢出限結(jié)果。

8.4分析特異性

8.4.1交叉反應(yīng)：說明驗(yàn)證的交叉物質(zhì)，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。

8.4.2干擾物質(zhì)：說明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類，及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。

8.5臨床試驗(yàn)：介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。

9.【注意事項(xiàng)】

　  9.1 本產(chǎn)品僅用于體外診斷。

9.2 如產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

9.3試劑保存運(yùn)輸及使用過程中多種因素可能導(dǎo)致性能變化，如保存運(yùn)輸不當(dāng)、樣本采集、樣本處理及檢測過程操作不規(guī)范等，請嚴(yán)格按照說明書操作。

9.4臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

（六）質(zhì)量管理體系文件

申請人應(yīng)當(dāng)在申請注冊時(shí)提交與產(chǎn)品研制、生產(chǎn)有關(guān)的質(zhì)量管理體系相關(guān)資料。詳述產(chǎn)品的生產(chǎn)過程，提供生產(chǎn)工藝流程圖。明確申報(bào)產(chǎn)品反應(yīng)及檢測原理和過程，標(biāo)明主要控制點(diǎn)與項(xiàng)目及主要原材料、采購件的來源及質(zhì)量控制方法。

如適用，應(yīng)當(dāng)提供擬核查產(chǎn)品與既往已通過核查產(chǎn)品在生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝等方面的對比說明。

三、參考文獻(xiàn)

[1]基于基因變異的呼吸系統(tǒng)疾病多重用藥專家共識[J].中國臨床藥學(xué)雜志,2024,33(05):321-333.

[2]張進(jìn)華,劉茂柏,蔡銘智,等.模型引導(dǎo)的華法林精準(zhǔn)用藥：中國專家共識(2022版)[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2022,27(11):1201-1212.

[3]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會.藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測技術(shù)指南（試行）.2015.

[4]陳慧,黨愛民,汪芳,等.基因多態(tài)性與抗栓藥物臨床應(yīng)用專家建議[J].福建醫(yī)藥雜志,2017,39(S1):9-19.

[5]Johnson JA, Caudle KE, Gong L, et al. Clinical Pharmacogenetics Implementation Consortium (CPIC) Guideline for Pharmacogenetics-Guided Warfarin Dosing: 2017 Update. Clin Pharmacol Ther. 2017 Sep;102(3):397-404.

 

附件：xx指導(dǎo)原則意見反饋表

 

序號

指導(dǎo)原則一級標(biāo)題（如適用）

指導(dǎo)原則二級標(biāo)題（如適用）

三級標(biāo)題（如適用）

涉及條款所在行號（如適用）

原文內(nèi)容（如適用）

建議修改后內(nèi)容

修改理由

修改依據(jù)（標(biāo)準(zhǔn)、指南、規(guī)范性文件等）

單位名稱/姓名

聯(lián)系人

聯(lián)系電話

郵箱

備注

示例

二、注冊申報(bào)資料要求

（四）分析性能評估資料

1.陽性/陰性參考品符合率

204

 

注：文件請以具體指導(dǎo)原則名稱+修訂意見反饋表命名。