中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

剛剛，國家藥監(jiān)局器審中心發(fā)布《碳青霉烯類抗生素耐藥基因blaKPC檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）》，全文如下：

 

本指導(dǎo)原則適用于碳青霉烯類抗生素耐藥基因blaKPC檢測試劑進行產(chǎn)品注冊和變更注冊的情形。本指導(dǎo)原則針對注冊申報資料中的部分內(nèi)容進行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求，同時建議參考《定性檢測試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則》等適用的技術(shù)文件要求。

 

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如碳青霉烯類抗生素耐藥基因blaKPC檢測試劑盒（熒光PCR法）。

2.分類編碼

按照《6840體外診斷試劑分類子目錄》《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840-01-01148。

3.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。

其中，需注意以下內(nèi)容：

1.預(yù)期用途明確所檢測的樣本類型、靶基因、臨床意義。

2.產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報產(chǎn)品所檢測基因的選擇依據(jù)、基因靶序列的選擇依據(jù)，產(chǎn)品所有可檢出的blaKPC亞型、尚未驗證的blaKPC亞型以及各基因亞型的選擇依據(jù)（如臨床意義、流行特征）。產(chǎn)品設(shè)計時建議根據(jù)相關(guān)共識、文獻進行綜合考慮，盡量包含已發(fā)布的主要基因亞型。

明確檢測耐藥基因的臨床意義、所檢測的耐藥基因與相應(yīng)抗生素的相關(guān)性、基因型與表型耐藥的符合率、抗生素用藥背景及中國人群數(shù)據(jù)等。

3.應(yīng)詳細說明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及檢測流程。提供不同適用機型的檢測通量，即一次檢測最多可檢測的樣本數(shù)。提供核酸提?。ㄊ止ず妥詣犹崛》绞綉?yīng)分別明確）和PCR擴增的時間，以及檢測全過程所需的時間。不同檢測流程，分別提供最少和最多檢測樣本量下的檢測時間。

4.與已上市同類產(chǎn)品進行比較，比較內(nèi)容包括預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測原理、檢測靶標、組成成分、內(nèi)標、質(zhì)控品、判讀規(guī)則、分析性能和臨床性能等。應(yīng)著重從檢測靶標、所檢菌株覆蓋情況、基因亞型覆蓋情況、檢出限等方面詳細說明申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

1.1產(chǎn)品技術(shù)要求

注冊申請人應(yīng)當在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關(guān)文獻資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

碳青霉烯類抗生素耐藥基因blaKPC檢測試劑已有國家標準品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家標準品的相關(guān)要求。

如有適用的國家標準、行業(yè)標準，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

1.2檢驗報告

碳青霉烯類抗生素耐藥基因blaKPC檢測試劑已有國家標準品，應(yīng)使用國家標準品進行檢驗。

第三類體外診斷試劑應(yīng)當提供三個不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗報告。

提交資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明》《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》等相關(guān)文件的要求。

2.分析性能研究

注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑進行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、可接受標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。提交分析性能研究的背景信息，包括試驗地點、采用的試劑名稱、規(guī)格和批號，儀器名稱和型號，樣本相關(guān)信息等。樣本相關(guān)信息包括樣本來源、樣本類型、采集和處理方式、稀釋方式、定值過程及定值結(jié)果、菌株編號及其blaKPC亞型相關(guān)信息等。

針對研究中采用的碳青霉烯類抗生素blaKPC耐藥基因樣本，應(yīng)采用科學(xué)合理的方法（如Sanger測序、已上市同類產(chǎn)品檢測等）進行陰陽性的確認，采用科學(xué)合理的方法（如數(shù)字PCR、標準曲線法（通過標準物質(zhì)或構(gòu)建質(zhì)粒繪制標準曲線）等）進行樣本濃度的確認。

分析性能評估用樣本可采用滅活臨床樣本、滅活培養(yǎng)菌株加至陰性臨床樣本基質(zhì)，應(yīng)采用合理方法進行陰性基質(zhì)的確認。此處陰性基質(zhì)是指不含blaKPC基因的臨床樣本。不建議采用質(zhì)粒等進行分析性能評估。如涉及稀釋后檢測，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)進行稀釋。

對于分離菌落，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書要求進行樣本的采集、處理及檢測。

如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交采用不同機型進行性能評估的資料。

如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進行分析或驗證。

如申報產(chǎn)品適用不同的樣本類型，需要分別進行分析性能研究。

2.1樣本穩(wěn)定性

應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進行研究，包括不同的樣本采集處理方法，采集后未經(jīng)處理的樣本，加入不同裂解液/消化液/保存液進行處理的樣本（如適用），研究內(nèi)容包括室溫保存、冷藏和冷凍保存條件及時間（如適用）。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。

如產(chǎn)品適用不同的樣本類型，應(yīng)對每種樣本類型進行穩(wěn)定性研究。

如核酸提取液可不立即進行檢測，還需對核酸提取液的保存條件和保存時間進行研究。

2.2適用的樣本類型

列明產(chǎn)品適用的樣本類型。

2.3準確度

2.3.1方法學(xué)比對

采用申報試劑與診斷準確度標準或已上市核酸檢測產(chǎn)品同時檢測臨床樣本，比較檢測結(jié)果之間的一致性程度，進行申報試劑的準確度評價。所選對比試劑的檢測靶基因應(yīng)與申報試劑一致，方法性能可比，且臨床公認質(zhì)量較好。對于無已上市核酸檢測試劑的靶基因，可與Sanger測序進行比對。用于核酸序列測定的引物序列應(yīng)不同于申報試劑中用于檢測靶基因的引物序列。研究應(yīng)納入一定數(shù)量的陰性和陽性樣本，納入檢測范圍內(nèi)的國內(nèi)常見基因亞型（至少包含blaKPC-2及1種其他亞型），并注意包含一定數(shù)量陽性判斷值附近的樣本和干擾樣本。

2.3.2陰陽性參考品符合率

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用至少三批產(chǎn)品對企業(yè)陰陽性參考品進行檢測并提供詳細的試驗數(shù)據(jù)。

2.4精密度

應(yīng)對精密度指標，如標準差或變異系數(shù)等的評價標準做出合理要求。應(yīng)考慮運行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點等影響精密度的條件，設(shè)計合理的精密度試驗方案進行評價。精密度評價試驗應(yīng)包含核酸提取純化步驟。設(shè)定合理的精密度評價周期，例如為期至少20天的檢測。對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，獲得重復(fù)性、中間精密度、再現(xiàn)性等結(jié)果。

應(yīng)針對檢測范圍內(nèi)的所有常見亞型（至少包含blaKPC-2及1種其他亞型）進行精密度研究。

可采用滅活臨床樣本、滅活培養(yǎng)菌株加至陰性臨床樣本基質(zhì)進行精密度評價，應(yīng)至少包含3個水平：陰性樣本、臨界陽性樣本、中/強陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當?shù)木芏纫螅纾?/span>

陰性樣本：不含blaKPC的樣本，其檢測為陰性的比率應(yīng)為100%（n≥20）。

臨界陽性樣本：blaKPC濃度略高于試劑的檢出限，陽性檢出率應(yīng)高于95%（n≥20）。

中/強陽性樣本：blaKPC濃度呈中度至強陽性，陽性檢出率為100%且CV≤5%（n≥20）。

2.5檢出限

使用臨床樣本或臨床分離菌株/標準菌株，采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)進行系列稀釋，進行檢出限建立與驗證研究。

如樣本類型為痰液，建議使用模擬基質(zhì)進行稀釋，如可使用含生理鹽水、黏蛋白及人類基因組DNA的基質(zhì)作為痰液樣本替代基質(zhì)。如樣本類型為直腸拭子，建議使用陰性樣本拭子采集液作為陰性基質(zhì)。如樣本類型為分離菌落，建議使用標準方法進行菌株的混懸、稀釋和定值。無論使用何種模擬或替代基質(zhì)，應(yīng)進行基質(zhì)比對性試驗證明替代基質(zhì)與臨床實際樣本的等效性。

應(yīng)明確每份樣本/菌株的來源、陰陽性及確認方式、濃度及確認方式、制備方法等信息?？刹捎脭?shù)字PCR、標準曲線等方法進行樣本/菌株核酸濃度的確認，以copies/mL為檢測單位，若以CFU/mL作為菌濃度單位，提供CFU/mL和copies/mL的換算關(guān)系。

所選樣本/菌株應(yīng)納入檢測范圍內(nèi)的國內(nèi)常見基因亞型（至少包含blaKPC-2及1種其他亞型）。

2.5.1檢出限的建立

采用不同來源的至少5個blaKPC陽性樣本，稀釋至多個濃度梯度進行檢測，每個濃度至少重復(fù)20次檢測，將具有95%陽性檢出率的最低濃度水平作為確定的檢出限。

2.5.2檢出限的驗證

選擇另外5個不同來源的blaKPC陽性樣本，在檢出限濃度水平進行驗證，每個濃度至少重復(fù)20次檢測，應(yīng)達到95%陽性檢出率。

2.6包容性

包容性研究包括檢出限和重復(fù)性驗證。包容性研究樣本和檢出限研究樣本應(yīng)相互獨立，不可重復(fù)使用。

針對痰液樣本及直腸拭子樣本，選擇具有區(qū)域特征性的不同來源的臨床樣本或培養(yǎng)菌株進行研究。建議檢索近年國內(nèi)相關(guān)文獻報道并收集各地區(qū)來源的不同菌株，研究應(yīng)包含可檢出的常見腸桿菌目耐藥微生物（如肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌、腸桿菌屬、沙門桿菌屬），還應(yīng)包含一部分鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌。

納入檢測范圍內(nèi)的國內(nèi)常見基因亞型及已有明確報道且影響用藥方案的blaKPC亞型的研究資料（至少包含blaKPC-2、blaKPC-33、blaKPC-51、blaKPC-76、blaKPC-79及其他亞型），分析假陰性風(fēng)險并在說明書局限性項下進行明確。建議使用臨床樣本或?qū)⑴囵B(yǎng)菌株添加至陰性基質(zhì)進行研究。

針對分離菌落樣本，應(yīng)提交來源于患者常見感染部位（如肺部感染、血流感染、泌尿道感染）的菌落研究資料。

2.7分析特異性

2.7.1交叉反應(yīng)

對于檢測范圍外的其他碳青霉烯酶基因（如A類：IMI、SME、GES、NMC，B類：NDM、IMP、VIM、GIM、SPM、SIM，D類：OXA-23、OXA-24、OXA-48、OXA-58和OXA-51），建議通過生物信息學(xué)分析，如存在較高同源性，應(yīng)采用人工合成樣本進行交叉反應(yīng)研究。

交叉反應(yīng)驗證的病原體種類主要考慮以下幾方面：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀的其它病原體，或待檢測樣本中可能共存的其它病原體。建議至少包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、流感嗜血桿菌、屎腸球菌、糞腸球菌、嗜麥芽窄食單胞菌、肺炎鏈球菌以及近3年內(nèi)我國出現(xiàn)的主要臨床耐藥分離菌種，具體可參考中國細菌耐藥監(jiān)測網(wǎng)公布的信息。

申請人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗證的微生物的來源、種屬/型別和濃度確認等試驗資料。建議在病毒和細菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進行交叉反應(yīng)的驗證。通常，細菌感染的水平為106 CFU/mL或更高，病毒為105 PFU/mL或更高。

有關(guān)交叉反應(yīng)驗證的信息應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標】項中有所體現(xiàn)。

2.7.2干擾試驗

干擾試驗通常包含內(nèi)源性干擾（如異嗜性抗體、疾病相關(guān)蛋白、患者體內(nèi)的異常生化代謝物）、外源性干擾（如樣本添加劑、常用藥物及其代謝物）等。

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾情況進行驗證。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行試驗，檢測陰性樣本及至少包含臨界陽性水平的blaKPC陽性樣本。應(yīng)注明不同干擾物質(zhì)對被檢測物質(zhì)無干擾的最高限值。用于干擾試驗研究的物質(zhì)具體見表1。

 

表1 用于干擾試驗研究的物質(zhì)

類別	具體物質(zhì)
內(nèi)源物質(zhì)	痰液樣本：血液、黏蛋白、人細胞
	直腸拭子樣本：血紅蛋白、膽紅素、白細胞、血清蛋白、多糖、膽固醇
常見治療藥物	亞胺培南、美羅培南、多立培南、粘菌素、氨基糖苷類、替加環(huán)素、磷霉素

2.8核酸提取/純化性能

在進行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出靶核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。

對配合使用的所有核酸提取試劑進行提取核酸純度、提取效率的研究，并與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進行平行比對。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測試劑進行抗干擾、精密度和檢出限的驗證。如果配套核酸提取試劑提取原理存在差異，還需同時進行檢出限的建立研究。

2.9反應(yīng)體系

2.9.1樣本采集

詳述樣本的采集方式、樣本采集量的選擇，提供相關(guān)的研究資料。直腸拭子樣本還應(yīng)提供拭子頭、拭子桿材質(zhì)研究資料，并在說明書中明確。

2.9.2樣本處理

不同類型的樣本應(yīng)分別進行研究。痰液樣本重點關(guān)注樣本處理及消化過程（明確消化液原理），包括所用試劑及用量、液化條件、液化時間，應(yīng)在說明書中明確。直腸拭子樣本重點關(guān)注保存液或裂解液的成分、濃度、使用量的要求等，應(yīng)在說明書中明確。分離菌落樣本重點關(guān)注菌落培養(yǎng)、混懸液制備的要求等，應(yīng)在說明書中明確。

2.9.3核酸提取和反應(yīng)體系

研究確定最佳核酸提取和反應(yīng)體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR反應(yīng)加樣體積、試劑用量、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)條件（各階段溫度、時間、循環(huán)數(shù)）、校準方法、質(zhì)控方法等。

建議在保證核酸提取質(zhì)量的情況下盡量擴大總反應(yīng)體系和加樣量，以提高檢測靈敏度。

提交不同適用機型基線和閾值循環(huán)數(shù)的確定資料。

不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗證資料。

3.穩(wěn)定性研究資料

申報試劑的穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制（如適用）等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。對于開瓶穩(wěn)定性研究，應(yīng)模擬真實使用情形，包括開瓶穩(wěn)定性的開瓶頻次和開瓶時間等。

4.陽性判斷值

對于此類試劑，陽性判斷值主要是指用于結(jié)果判斷的Ct值。申請人可采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式對申報產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的臨界值予以確認。如采用其他研究方法，應(yīng)說明其合理性。

陽性判斷值研究用樣本來源應(yīng)具有多樣性和代表性，應(yīng)為預(yù)期人群，考慮不同時間、地域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素，盡量納入較多弱陽性樣本。提交所用樣本的背景信息列表，至少包括性別、年齡、臨床診斷信息、樣本來源機構(gòu)、檢測結(jié)果等信息。

如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，應(yīng)對各樣本類型進行陽性判斷值的驗證。

提供內(nèi)標檢測結(jié)果范圍的確定方法和研究資料。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

該類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、dNTP、酶、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品、參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量控制標準等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值研究資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細制備過程；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗資料、生產(chǎn)商提供的質(zhì)量標準、出廠檢驗報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。生產(chǎn)商應(yīng)固定，不得隨意更換。

5.1.1引物和探針

應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、靶序列的基因位點及兩者的對應(yīng)情況。建議設(shè)計兩套或多套引物、探針以供篩選，通過序列比對和功能性試驗等方式，進行包容性和特異性（如交叉反應(yīng)）的評價，其中序列比對包括與已公布KPC基因亞型序列、已公布其他耐藥基因位點序列、易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他序列的比對。

通過篩選確定最佳的引物和探針組合。引物、探針的質(zhì)量標準應(yīng)至少包括序列準確性、純度、濃度及功能性實驗等。

5.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTP）

包括dATP、dUTP、dGTP、dCTP、dTTP，應(yīng)提供對純度、濃度、功能性等的詳細驗證資料。

5.1.3酶

需要的酶主要包括DNA聚合酶等，應(yīng)分別對酶活性、功能性等進行評價和驗證。

5.1.4核酸分離/純化組分（如有）

應(yīng)提交核酸分離/純化組分主要組成、原理介紹及相關(guān)驗證資料。

5.1.5質(zhì)控品

此類試劑的質(zhì)控品一般包括陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品，可采用滅活菌株、工程菌株、質(zhì)粒等制備。陽性質(zhì)控品應(yīng)包含試劑所檢測的靶序列，陰性質(zhì)控品應(yīng)不含試劑所檢靶序列的基因，質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與實際樣本基質(zhì)一致或接近。

質(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，以對整個PCR反應(yīng)過程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進行合理質(zhì)量控制。申請人應(yīng)提交試劑質(zhì)控品有關(guān)的原料選擇、制備、定值過程、濃度范圍等試驗資料，對質(zhì)控品檢測結(jié)果Ct值范圍或濃度范圍做出明確要求。

5.1.6內(nèi)標

應(yīng)設(shè)置合理的內(nèi)對照（內(nèi)標）以對管內(nèi)抑制可能造成的假陰性結(jié)果進行質(zhì)控。

申請人應(yīng)對內(nèi)標的引物、探針和模板的濃度做精確驗證，既要保證內(nèi)標熒光通道呈明顯的陽性曲線，又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。明確內(nèi)標檢測結(jié)果的Ct值范圍。申請人應(yīng)提交內(nèi)對照（內(nèi)標）基因的選擇、制備、定值過程及試驗資料。

5.1.7企業(yè)參考品

該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和精密度參考品。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗證的實際需要設(shè)置企業(yè)參考品。

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度確認方法等相關(guān)驗證資料。企業(yè)參考品可優(yōu)先采用滅活菌株，難獲得的可采用工程菌株等制備，參考品基質(zhì)應(yīng)與適用樣本基質(zhì)一致。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

陽性參考品：根據(jù)檢測范圍設(shè)置不同基因亞型（應(yīng)涵蓋我國常見亞型，至少包括blaKPC-2），并覆蓋不同濃度。陽性參考品的亞型以及濃度需經(jīng)可靠方法進行確認。

陰性參考品：應(yīng)包括不含blaKPC的陰性樣本。建議納入多個菌種。

檢出限參考品：設(shè)置略高于檢出限（如100%陽性檢出率）的水平。

精密度參考品：設(shè)置高、低兩個濃度的樣本，其中一個濃度應(yīng)為檢出限附近的濃度。如有必要，建議同時設(shè)置陰性濃度的參考品。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述并標明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

（四）臨床試驗

臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。

1.臨床試驗機構(gòu)的選擇

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）經(jīng)備案的醫(yī)療器械臨床試驗機構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮擬申報產(chǎn)品的特點和預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，鑒于不同地區(qū)及醫(yī)療機構(gòu)中碳青霉烯抗生素耐藥菌流行情況的差異，應(yīng)選擇不同地區(qū)的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。且臨床試驗機構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評價方案。

2.臨床試驗設(shè)計

有已上市同類產(chǎn)品的，建議選擇已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑進行比較研究。對比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測方法學(xué)、檢測性能、檢測基因靶序列以及覆蓋基因型和突變型等方面應(yīng)與試驗體外診斷試劑具有較好的可比性。

針對新樣本類型，則可選擇與Sanger測序以及藥敏試驗進行比較研究。應(yīng)注意，藥敏試驗應(yīng)選擇代表性碳青霉烯類抗生素，至少應(yīng)包括美羅培南、亞胺培南及厄他培南。

針對不同樣本類型對應(yīng)的不同預(yù)期用途，應(yīng)分別設(shè)計臨床試驗進行研究。

3.病例選擇及樣本類型

臨床試驗病例選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品聲稱預(yù)期用途中使用的樣本類型及適用人群進行選擇，如臨床背景內(nèi)容中所述，該產(chǎn)品適用不同樣本類型時對應(yīng)不同的臨床預(yù)期用途，采用直腸拭子樣本的試劑用于碳青霉烯抗生素耐藥菌院內(nèi)感染的預(yù)防和控制時，應(yīng)采用醫(yī)療機構(gòu)中的住院病人包括重癥監(jiān)護病人、器官移植、造血干細胞移植等病例進行臨床研究；采用痰液用于結(jié)合其他實驗室檢測等輔助診斷碳青霉烯抗生素耐藥菌感染時，應(yīng)采用疑似革蘭氏陰性菌引起的院內(nèi)獲得性肺炎以及呼吸機相關(guān)肺炎等病例進行臨床研究；采用分離菌落樣本用于臨床需進行培養(yǎng)檢測的疑似碳青霉烯抗生素耐藥菌感染患者的輔助診斷時，應(yīng)采用臨床需進行微生物培養(yǎng)并進行碳青霉烯抗生素耐藥菌感染確認的患者作為病例進行臨床研究。同時適用于上述不同樣本類型時，應(yīng)分別進行相關(guān)病例的臨床研究。

申請人在建立病例納入標準時，應(yīng)綜合考慮到試劑所適用的各類人群的潛在差異，如年齡、性別、病情等。

臨床試驗中常見的腸桿菌目細菌均應(yīng)有一定例數(shù)入組，還應(yīng)入組一部分銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌等細菌感染病例。

針對分離菌落樣本，應(yīng)為來源于患者感染部位的菌落。

對于直腸拭子和痰液樣本，與已上市同類產(chǎn)品比較時，應(yīng)注意入組一部分弱陽性樣本(一般將對比試劑檢測的Ct值小于cutoff值3～5個Ct值的樣本定義為弱陽性樣本)，弱陽性樣本應(yīng)覆蓋每種樣本類型。

4.臨床試驗病例數(shù)

與對比試劑或與Sanger測序的比較研究的臨床試驗樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求，可采用適當?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進行估算。臨床試驗可依據(jù)試驗用體外診斷試劑相對于對比方法的陰陽性符合率分別估算最低陰陽性樣本例數(shù)。

臨床樣本量的估算建議采用如下樣本量公式計算，

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標準正態(tài)分布的分數(shù)位，P0為評價指標的臨床可接受標準，PT為試驗體外診斷試劑評價指標預(yù)期值。其中，陰、陽性符合率的臨床可接受標準（P0）建議不低于90%。

臨床試驗總體樣本量確定時應(yīng)在上述陰、陽性樣本最低樣本量估算的基礎(chǔ)上，同時考慮其他可能造成受試者脫落的情況適當增加入組樣本量。

因不同樣本類型適用不同預(yù)期用途，因此針對每一種預(yù)期用途臨床試驗的病例數(shù)均應(yīng)分別滿足上述統(tǒng)計學(xué)要求。

針對藥敏試驗，建議不少于300例，應(yīng)至少包括150例碳青霉烯類抗生素耐藥菌和150例碳青霉烯類抗生素敏感菌。應(yīng)以blaKPC為主要耐藥機制的細菌為主，并具有一定的菌種代表性。

5.統(tǒng)計學(xué)分析

首先應(yīng)對入組人群的人口學(xué)進行分析，包括年齡、性別、臨床診斷背景、納入菌種等。臨床試驗中包含不同樣本類型的，每個樣本類型分別進行統(tǒng)計分析。

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如陽性符合率、陰性符合率、臨床靈敏度、特異度等。常選擇四格表的形式總結(jié)兩種方法的定性檢測結(jié)果，并計算試驗體外診斷試劑與對比方法的陽性符合率/靈敏度、陰性符合率/特異度、總符合率及其相應(yīng)的95%置信區(qū)間。

針對納入的不同菌株，如腸桿菌目（肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌等）、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌進行亞組分析。

臨床試驗中所有不一致結(jié)果均應(yīng)結(jié)合其他方法的檢測結(jié)果、患者的臨床癥狀、疾病轉(zhuǎn)歸等信息進行充分的分析。

6.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被剔除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。

7.質(zhì)量控制

臨床試驗開始前，建議進行臨床試驗的培訓(xùn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可精密度精密度。

8.臨床證據(jù)的形式要求

申請人應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》等法規(guī)文件要求提交各機構(gòu)倫理審查意見、臨床試驗方案、臨床試驗小結(jié)、臨床試驗報告以及臨床試驗數(shù)據(jù)庫。

臨床試驗數(shù)據(jù)表作為臨床試驗小結(jié)的附件提交。數(shù)據(jù)表中應(yīng)包括唯一且可溯源的樣本編號、年齡、性別、樣本類型、樣本來源（適用于分離菌落樣本）、臨床診斷背景信息、試驗體外診斷試劑檢測結(jié)果、對比試劑的檢測結(jié)果等。

關(guān)于測序試驗，申請人應(yīng)提供關(guān)于測序部分的詳細試驗資料，包括測序方法的建立及驗證資料，需由臨床試驗機構(gòu)簽章確認。

（五）產(chǎn)品說明書和標簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，應(yīng)以規(guī)范格式進行標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。

碳青霉烯類抗生素耐藥基因blaKPC檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1試劑用于體外定性檢測碳青霉烯耐藥患者的痰液、直腸拭子、分離菌落樣本中的耐藥基因blaKPC。

1.2明確試劑不同樣本類型的臨床意義，如直腸拭子樣本用于碳青霉烯抗生素耐藥菌院內(nèi)感染的預(yù)防和控制；痰液用于結(jié)合其他實驗室檢測等輔助診斷碳青霉烯抗生素耐藥菌感染；分離菌落樣本用于臨床需進行培養(yǎng)檢測的疑似碳青霉烯抗生素耐藥菌感染患者的輔助診斷。

1.3簡要介紹靶基因特征，包括亞型情況的描述，所檢測的耐藥基因與相應(yīng)藥物的相關(guān)性。

1.4強調(diào)該試劑檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為治療藥物調(diào)整的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情及其他實驗室檢測指標等因素對患者治療進行綜合判斷。

2.【檢驗原理】

詳述核酸提取純化及試劑檢測原理，說明檢測的耐藥基因位點信息，明確內(nèi)標名稱。介紹引物及探針設(shè)計、不同樣品反應(yīng)體系（管）組合、對照品（質(zhì)控品）設(shè)置及熒光信號標記等。如采用了防污染措施，應(yīng)進行簡要描述。

3.【主要組成成分】

3.1說明試劑盒所包含組分的名稱、數(shù)量、裝量等信息，如含有人源組分，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性；說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

3.2試劑中不包含但該項檢測必需的組分，如樣本保存液及其他配套使用的材料，應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、注冊證號或備案號（如有）及其他相關(guān)信息。

3.3如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)驗證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的注冊人（備案人）、貨號及其注冊證編號（備案編號）等詳細信息。

4.【儲存條件及有效期】

明確試劑的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性（如適用）、凍融次數(shù)（如適用）要求，應(yīng)標明具體的儲存條件及效期。明確生產(chǎn)日期、使用期限/失效日期/有效期至見標簽。

5.【樣本要求】

明確適用的樣本類型，詳述樣本采集、保存、運輸和處理方式。

針對痰液樣本，應(yīng)包括采樣步驟、采樣量、消化液用量及消化時間等。

針對直腸拭子樣本，應(yīng)包括采樣步驟、保存液用量、拭子頭、拭子桿材質(zhì)等。

針對分離菌落樣本，應(yīng)包括采樣步驟、菌落培養(yǎng)、混懸液制備等。

如有臨床公認推薦的采樣要求，應(yīng)遵循，并引用相應(yīng)的技術(shù)規(guī)范或指南。明確樣本及核酸提取液（如適用）的保存穩(wěn)定性。

6.【適用機型】

注明所有適用的儀器型號。

7.【檢驗方法】

7.1試劑準備及配制方法、注意事項。

7.2詳述待測樣本、對照品（質(zhì)控品）的核酸提取/純化條件（包括樣本體積、洗脫體積）、步驟及注意事項。對照品（質(zhì)控品）應(yīng)與待測樣本同步進行核酸提取。

7.3擴增反應(yīng)前準備：各組分加樣體積、順序等。

7.4明確各適用機型的反應(yīng)參數(shù)設(shè)置（包括PCR各階段的溫度、時間設(shè)置、循環(huán)設(shè)置及相關(guān)注意事項），基線、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法，以及各檢測靶標對應(yīng)的熒光通道。

7.5校準方法的描述。

7.6實驗的有效性判斷：明確內(nèi)標、質(zhì)控品檢測結(jié)果Ct值范圍。

8.【陽性判斷值】

簡要說明陽性判斷值研究、統(tǒng)計方法及結(jié)論，明確基本信息，包括樣本量、人群特征（如性別、年齡等）。

9.【檢驗結(jié)果的解釋】

以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)，結(jié)合陰、陽性質(zhì)控品及內(nèi)標檢測結(jié)果，對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合（如陰性、陽性、灰區(qū)/復(fù)測、無效等）及相應(yīng)的解釋進行詳述。

10.【檢驗方法局限性】

10.1本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進行綜合分析，不得單獨作為患者管理的依據(jù)。

10.2導(dǎo)致假陰性/假陽性結(jié)果的可能性分析：

10.2.1不合理的樣本采集、處理、運輸及保存條件，樣本中目標物濃度過低，可能導(dǎo)致假陰性。

10.2.2待測目標基因序列的變異或其他原因?qū)е碌男蛄懈淖?，可能?dǎo)致假陰性。

10.2.3未經(jīng)驗證的其他干擾或PCR抑制因子等，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

10.2.4不當?shù)膶嶒灢僮骱蛯嶒灜h(huán)境，可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。

10.3耐藥基因型與表型可能存在一定程度的不一致性。本產(chǎn)品檢測陰性不能排除存在其他耐藥機制。

10.4明確該試劑僅限于規(guī)定的樣本類型及適用機型。

11.【產(chǎn)品性能指標】

簡述試劑性能指標和研究情況，包括試驗方法和結(jié)果，建議包含參考品符合性、準確度、檢出限、包容性、精密度、分析特異性、臨床試驗等。

12.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑盒內(nèi)校準品、質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已通過乙肝炎表面抗原（HbsAg）、人類免疫缺陷病毒抗體（抗-HIV1/2）、丙型肝炎抗體（抗-HCV）等項目的檢測為陰性，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。提示對于潛在傳染源的處理方式。

12.2臨床實驗室應(yīng)嚴格按照《臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范》配備設(shè)備及操作人員，應(yīng)嚴格按照說明書要求進行操作。

12.3強調(diào)實驗操作人員應(yīng)接受過基因擴增或分子生物學(xué)方法檢測的專業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實驗操作資格，實驗室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護程序。

三、參考文獻

[1] 國家藥品監(jiān)督管理局. 關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告: 國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號[Z].

[2] 國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則: 國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第17號[Z].

[3] 國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心.定性檢測試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則: 國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心公告2022年第36號[Z].