動物實驗是指在受控的條件下，以動物為模型研究生物機制、疾病機理、評估藥物安全性和效果而開展的實驗操作。
動物實驗的數(shù)據(jù)為新藥研發(fā)、疾病治療甚至基礎(chǔ)理論探索提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)支撐，就比如前幾天發(fā)生的神舟二十一號火箭，上面就攜帶了4只實驗小鼠，它們在太空環(huán)境中的活動和實驗數(shù)據(jù)將成為后續(xù)人類探索太空的準備提供數(shù)據(jù)支持。
圖：央視新聞
常見的動物實驗操作包括了動物喂養(yǎng)繁殖、動物標記、樣本采集、行為監(jiān)測和人道終點處理。今天的文章，會以講解性別區(qū)分、編號、抓拿固定、樣本采集和處死幾個方面的操作為主。
1 性別區(qū)分
小鼠和大鼠的性別區(qū)分主要依據(jù)生殖器官與肛門之間的距離、有無毛發(fā)覆蓋以及乳頭的明顯程度等特征。以下分別講解：
a 生殖器與肛門的距離：雄性小鼠和大鼠的生殖器與肛門之間的距離較長，而雌性則較短。這一特征在幼齡仔鼠中尤為明顯，因為它們的外生殖器未成熟，需要通過觀察這些部位的距離來判斷性別。
b 毛發(fā)覆蓋情況：雄性小鼠和大鼠在生殖器與肛門之間通常會有毛發(fā)生長，而雌性則沒有毛發(fā)覆蓋，兩者之間可以見到一條縱行的溝。
c 乳頭的明顯程度：雌性小鼠和大鼠的乳頭比雄性更為明顯。
d 生殖器官：雄性陰莖朝頭的方向突出，可輕輕擠壓包皮使其露出而確認。雌性較小時可見閉合的陰道口，擠壓亦可張開。
e 外觀：在某些情況下，雄鼠可能比雌鼠體型稍大，但這并不是絕對的，因為體型大小還受到品種、年齡和營養(yǎng)狀況等多種因素的影響。此外，新生小鼠和大鼠與成年鼠的性別區(qū)分可以參考以下建議：
新生仔鼠：新生仔鼠的性別鑒定主要依靠外生殖器與肛門之間的距離。近者為雌性，遠者為雄性。
成年鼠：成年雄鼠的陰囊明顯可見；雌鼠可見陰道開口且乳頭明顯。
需要注意的是，不同文獻對具體細節(jié)描述略有差異，但總體上一致認為生殖器與肛門之間的距離是最重要的鑒別標志。
2 編號
小鼠與大鼠的編號方法主要分為染色法、耳孔法和剪趾法等。以下是詳細說明：
a 染色法：
使用毛筆或棉簽蘸取不同顏色的化學藥品（如苦味酸或中性紅）涂染在小鼠特定部位的毛發(fā)上，以代表不同的編號。
編號次序采用九分法原則：先左后右、由前至后。
此方法適用于短期實驗的小鼠，因為時間長了染料易退掉。
b 耳孔法：
使用專用的打孔器在小鼠耳朵上打孔或剪不同的缺口，用位置和孔數(shù)進行標記。一般右耳表示個位數(shù)，左耳表示十位數(shù)。
具體操作包括：右耳緣內(nèi)側(cè)的小孔表示1、2、3，耳緣外側(cè)的單缺口表示4、5、6；左耳則相反。
對于黑色或棕色小鼠及裸鼠，可以采取特殊的編號方法，例如雙耳無孔為1號，左耳打孔為2號，右耳打孔為3號，雙耳打孔為4號。
適用于短期實驗的大小老鼠，并且需要保證編號不對動物生理或?qū)嶒灧磻?yīng)產(chǎn)生影響。
c 剪趾法：
斷趾法是最常見的編號方法之一，根據(jù)對新生小鼠前肢4趾和后肢5趾的切斷位置來進行編號。應(yīng)切斷其一段趾骨，不能只斷趾尖，防止傷口痊愈后辨別不清楚。
此方法常用于出生7天內(nèi)的小鼠，并且需要在小仔5-7日齡內(nèi)進行斷趾。
3 抓拿固定
a 小鼠： 習慣用右手的同學，建議使用右手抓住小鼠尾部，將其提起并放在鼠籠鐵紗網(wǎng)上或粗糙物上。在小鼠向前掙脫時，用左手的拇指和食指抓住其頸部皮膚，并以左手的小指和掌部夾住其尾部?？粘龅挠沂诌M行后續(xù)實驗，習慣用左手的同學則相反操作。
b 大鼠：習慣用右手的同學，建議戴上防護手套，用右手抓住大鼠尾巴中部提起，左手按住背部皮膚?？墒褂檬中g(shù)臺固定，將大鼠四肢放入手術(shù)臺松緊環(huán)內(nèi)，收緊環(huán)扣以固定。空出的右手進行后續(xù)實驗，習慣用左手的同學則相反操作。
c 注意事項：
在整個過程中應(yīng)保證人身和動物的安全，避免粗暴動作，防止動物咬傷或造成應(yīng)激反應(yīng)。捉拿和固定時要膽大心細，不可粗暴對待動物。
小鼠尾巴的尾端容易斷裂，抓小鼠應(yīng)抓尾巴中部或根部。
大鼠的門齒很長，在抓取方法不當而受到驚嚇或激怒時易將操作者手指咬傷，所以，取用時應(yīng)輕輕抓住其尾巴后提起。
4 采血
實驗動物的采血是動物實驗中常見的操作，其方式多種多樣，應(yīng)根據(jù)具體實驗需求和動物福利原則選擇合適的采血方式。以下以小鼠、大鼠為例講述實驗動物的采血方式：
a 尾尖采血：這是最常用且操作簡便的方法之一。首先將小鼠固定并暴露其尾巴，通常將其浸泡在40-50℃的溫水中幾分鐘或用酒精棉球擦拭鼠尾，使血管充盈。然后用無菌手術(shù)刀快速剪去尾尖1-2 mm，血液會自然流出。
b 摘眼球采血：用左手拇指、食指和中指抓取小鼠的頸部頭皮，小指和無名指固定尾巴。輕壓需要摘取的眼部皮膚，使眼球充血突出。用眼科剪剪去小鼠的胡須，防止血從胡須處留下引起溶血。用眼科彎鑷夾取眼球并快速摘取，并使血液從眼眶內(nèi)流入0.5 mL EP管中。
c 眼眶靜脈叢采血：此方法適用于多次重復采血，具有成功率高、死亡率低的優(yōu)點。但需要注意的是，該方法不能采集到無菌的血樣，因為血液中可能混有眼窩內(nèi)的組織液和腺體分泌物。采血后需要一定的組織修復時間，一般兩次采血間隔應(yīng)為10-14天。
d 心臟采血：這種方法較為復雜，需要將小鼠麻醉后仰臥固定于動物臺上，剪去胸前區(qū)被毛，皮膚消毒。使用4-5號針頭的注射器在左側(cè)第3-4肋間心搏動最強處進針刺入心臟，緩慢回抽針筒以獲取血液樣本。
e 頸靜脈采血：無需麻醉，直接從穿刺點進針采集血液。此方法要求操作者技術(shù)嫻熟，并且由于動物未麻醉和相應(yīng)的器械固定，動物容易掙扎，增加進針難度。
f 隱靜脈采血：常用于少量血液采集，無需麻醉。待動物固定后，在后腿外側(cè)區(qū)域剃毛后暴露采血點，用采血針刺入即可獲得血液樣本。
g 頜下靜脈叢采血：這是一種快速、簡單且人性化的小鼠采血方法，通過面部進針點采集血液。該方法保證順利采集實驗血樣的基礎(chǔ)上將對動物的影響降到最低。
h 注意事項：操作迅速、輕柔，避免對動物造成不必要的傷害。確保每次采血前后都進行適當?shù)闹寡胧?，以防止出血過多。尾尖在長期反復取血的情況下，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向近心端穿刺。盡量在滿足實驗要求的基礎(chǔ)上選擇簡單易行且對動物傷害較小的采血方法。
5 處死
小鼠與大鼠的處死方法多種多樣，但主要可以歸納為以下幾種：
a 頸椎脫臼法：
這是大鼠和小鼠最常用的處死方法。即使用外部力量使動物的頸椎脫臼，從而導致脊髓與腦髓斷開，使動物迅速失去生命體征。詳細步驟如下：
先將大、小鼠麻醉。
用右手抓住鼠尾根部并將其提起，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上。用左手固定枕寰關(guān)節(jié)。
右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，快速使枕寰關(guān)節(jié)脫臼。
脊髓與腦干斷離，動物立即死亡。
b 二氧化碳窒息法：
將小鼠或大鼠放入盛有二氧化碳氣體的容器中，通過替換氧氣達到窒息效果。
因其使用簡便、危害小、低成本等優(yōu)點被廣泛應(yīng)用于小型動物的安樂死。對于犬、豬等大型動物，暴露于不斷增加濃度的二氧化碳下會引發(fā)嚴重的掙扎和痛苦，因此不適用于這些動物。詳細步驟如下：
準備干凈、透明的裝有通氣孔的密閉盒及二氧化碳鋼瓶。
提供空氣或氧氣使大鼠或小鼠適應(yīng)低氧的環(huán)境。
持續(xù)增加CO?濃度，直到達到100%。AVMA（美國獸醫(yī)協(xié)會）要求CO?置換率為每分鐘30%-70%容器體積，以確保在引起疼痛之前，動物已失去意識。
給藥后，觀察小鼠或大鼠反應(yīng)。若出現(xiàn)呼吸或心跳停止，則二氧化碳量足夠。在動物失去生命體征后，可以通過物理方法（如氣管穿孔）確認死亡。
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