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摘 要： 建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定抗菌消炎片/膠囊中24種農(nóng)藥殘留。樣品經(jīng)乙腈提取，用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱分離，以甲醇（含體積分?jǐn)?shù)為0.1%的甲酸）-2 mmol/L甲酸銨溶液（含體積分?jǐn)?shù)為0.01%的甲酸）作為流動(dòng)相，在電噴霧正離子模式下，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)，外標(biāo)法定量。24種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度在0.5～500 ng/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.998，方法檢出限為0.004～0.005 mg/kg。樣品平均回收率為75.00%～112.18%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.56%～9.95%（n=6）。134批樣品農(nóng)藥殘留檢出率達(dá)91.8%，涉及吡蟲啉、啶蟲脒和烯酰嗎啉等9種農(nóng)藥，但殘留量極低，無(wú)重大健康風(fēng)險(xiǎn)。該方法簡(jiǎn)便快捷、穩(wěn)定靈敏，可實(shí)現(xiàn)快速定性和精準(zhǔn)定量，適合大批量抗菌消炎片/膠囊樣品多農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

 

關(guān)鍵詞： 抗菌消炎片/膠囊； 農(nóng)藥殘留； 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法； 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

 

抗菌消炎片始載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第七冊(cè)，具有清熱、瀉火、解毒的功效，臨床上常用于治療風(fēng)熱感冒、咽喉腫痛和實(shí)火牙痛，抗菌消炎膠囊與抗菌消炎片僅是劑型不同，在處方、制法、功能主治等方面基本一致[1-2]?？咕灼?膠囊處方由金銀花、百部、大黃、大青葉、黃芩、知母、金錢草組成，其中金錢草、金銀花、黃芩、大黃均為粉碎后直接入藥[3]。近年來(lái)，中成藥的農(nóng)藥殘留問題日益凸顯。一方面，在中藥材的人工種植過(guò)程中，土壤中的農(nóng)藥殘留、廢水灌溉和空中沉積的農(nóng)藥可能富集至藥材植物株內(nèi)，且種植戶可能存在濫用、替代等不合理使用農(nóng)藥的行為[4-6]；另一方面，《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）0212“藥材和飲片檢定通則”中僅規(guī)定了33種禁用農(nóng)藥的殘留限量[7]，對(duì)于常用農(nóng)藥暫無(wú)相關(guān)規(guī)定，并且部分中成藥生產(chǎn)廠家未對(duì)原藥質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格把控，導(dǎo)致藥材中的農(nóng)藥殘留極有可能經(jīng)加工積蓄到成藥中。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，農(nóng)藥殘留污染有48.56%集中在藥材的根及根莖中[8]。在抗菌消炎片/膠囊處方中，生粉入藥的黃芩和大黃均為根及根莖類藥材，容易積累有機(jī)磷、有機(jī)氯及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留[9-10]，金錢草曾檢出多菌靈以及六六六、滴滴涕等多種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留[11-12]，金銀花甚至存在部分禁用農(nóng)藥殘留超標(biāo)的現(xiàn)象[13-15]，故有必要對(duì)抗菌消炎片/膠囊中的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

 

目前暫未有關(guān)于抗菌消炎片/膠囊中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的報(bào)道。基于QuEChERS原則的樣品處理方法在農(nóng)藥多殘留成分檢測(cè)中應(yīng)用廣泛[16-18]，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，可一次完成多種農(nóng)藥殘留的痕量分析[19-21]。筆者建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定抗菌消炎片/膠囊中24種農(nóng)藥殘留，優(yōu)化了提取、凈化和儀器分析條件。該方法快速簡(jiǎn)便、穩(wěn)定高效、定性定量可靠，可用于抗菌消炎片/膠囊樣品農(nóng)藥殘留的批量檢測(cè)。

 

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

三重四級(jí)桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：Agilent1290-G6470B型，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

超純水機(jī)：Milli-Q型，美國(guó)密理博有限公司；

離心機(jī)：TGL-17型，四川蜀科儀器有限公司；

電子天平：PL602E/02型，感量為0.01g，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；

多管渦旋混合器：SMW-MV2500型，湖北賽默威智能科技有限公司。

乙酰甲胺磷、吡蟲啉、多菌靈、倍硫磷、倍硫磷砜、倍硫磷亞砜、烯酰嗎啉、戊唑醇、吡唑醚菌酯、阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度均為1 000 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)分別為CDAA-S-412006-JD、CDAA-S-415006-JD、CDAA-S-420003-AD、CDAA-S-412072-TD、CDAA-S-412061-JD、CDAA-S-412060-JD、CDAA-S-420028-JD、CDAA-S-420006-JD、CDAA-S-420 097-JD、CDAA-S-420222-JD，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

噻蟲胺、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度均為1 000 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)分別為1ST20351-1000A、1ST20124-1000A、1ST201 23-1000A、1ST21259-1000A、1ST24004-1000A，天津阿爾塔科技有限公司。

甲基異柳磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度為1 000 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)為BW900180-1000-D，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

苯醚甲環(huán)唑、敵敵畏、水胺硫磷、腈苯唑、毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度均為100 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)分別為CDAA-S-420005-JA、CDAA-S-412003-TA、CDAA-S-412007-TA、CDAA-S-420031-JA、CDAA-S-412010-JA，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

啶蟲脒、噻蟲嗪、氧樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度均為100 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)分別為1ST20297-100A、1ST20350-100M、1ST20167-100A，天津阿爾塔科技有限公司。

乙腈、甲醇：均為色譜純，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司。

無(wú)水硫酸鎂：分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。樣品處理凈化鹽包（含無(wú)水硫酸鎂4 g，氯化鈉1 g，檸檬酸鈉二水合物1 g和檸檬酸二鈉倍半水合物無(wú)水乙酸鈉0.5 g）、N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）、石墨化碳黑（GCB）：均為分析純，蘇州納譜分析技術(shù)有限公司。

抗菌消炎片/膠囊樣品：均為2024年國(guó)家藥品評(píng)價(jià)性抽檢樣品，涉及13家生產(chǎn)企業(yè)，共計(jì)134批次，其中膠囊劑89批，片劑45批。

實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜儀

液相色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm，美國(guó)安捷倫科技有限公司）；柱溫：40℃；進(jìn)樣體積：2 μL；流動(dòng)相：A相為2 mmol/L甲酸銨溶液（含體積分?jǐn)?shù)為0.01%的甲酸），B相為甲醇（含體積分?jǐn)?shù)為0.1%的甲酸）；流量：0.3 mL/min；洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序見表1。

表1   梯度洗脫程序

Tab. 1   Gradient elution program

 

1.2.2 質(zhì)譜儀

離子源：電噴霧正離子源（ESI+）；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式；噴霧電壓：3.5 kv；離子傳輸管溫度：300 ℃；霧化氣：氮?dú)?，壓力?76 kPa。24種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2   24種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

Tab. 2   Mass spectrometric parameters of 24 pesticides

注：*表示定量離子。

 

1.3 樣品處理

針對(duì)不同劑型采用不同的樣品處理方法。對(duì)于糖衣片，先用水洗至黑色內(nèi)容物將要露出，再用單面刀片進(jìn)行刮片以完全除去糖衣，將內(nèi)容物放入研缽研細(xì)；對(duì)于薄膜衣片，使用單面刀片直接刮片以完全除去薄膜衣，再將內(nèi)容物放入研缽研細(xì)；對(duì)于膠囊，取膠囊內(nèi)容物直接放入研缽研細(xì)，即得各劑型的樣品粉末。

稱取1 g樣品粉末（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加9 mL水渦旋混勻，靜置30 min。然后加入10 mL乙腈及1顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈振蕩1 min后，加入樣品處理凈化鹽包，立即搖散，劇烈振蕩1 min使充分混勻，于4 200 r/min下離心5 min。吸取上層有機(jī)相至內(nèi)含凈化材料的離心管中，1 mL提取液使用150 mg無(wú)水MgSO4、25 mg PSA、2.5mg GCB，渦旋混勻1 min，于4 200 r/min離心5min，吸取上層有機(jī)相過(guò)0.22 μm濾膜，作為樣品溶液待測(cè)定。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確移取乙酰甲胺磷、吡蟲啉、多菌靈、倍硫磷、倍硫磷砜、倍硫磷亞砜、烯酰嗎啉、戊唑醇、吡唑醚菌酯、阿維菌素、噻蟲胺、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、氯吡脲、甲基異柳磷標(biāo)準(zhǔn)溶液各10 μL，苯醚甲環(huán)唑、敵敵畏、水胺硫磷、腈苯唑、毒死蜱、啶蟲脒、噻蟲嗪、氧樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液各100 μL至同一10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至標(biāo)線，配制成各組分質(zhì)量濃度均為1 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于4℃冰箱中儲(chǔ)存。

空白基質(zhì)溶液：取不含24種農(nóng)藥成分的抗菌消炎片/膠囊樣品，按1.3方法處理得空白基質(zhì)溶液。

系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確吸取一定量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用空白基質(zhì)溶液將其稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.5、1、2、10、20、50、100、200、500 ng/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.5 樣品測(cè)定

在1.2儀器工作條件下，對(duì)24種農(nóng)藥系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以保留時(shí)間和質(zhì)荷比定性，以各農(nóng)藥的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在相同條件下，測(cè)定樣品溶液，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到樣品溶液中各目標(biāo)化合物的含量。

 

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器分析條件的優(yōu)化

2.1.1 液相色譜柱的選擇

考察Waters ACQUITY UPLC BEH C18 Column(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)、Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)、Agilent ZORBAX RR Eclipse Plus C18(150 mm×2.1 mm，3.5 μm)、Shiseido HPLC Column CAPCELL PAK ADME(150 mm×4.6 mm，5 μm) 4種不同長(zhǎng)度、不同粒徑的C18色譜柱。不同色譜柱的24種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖如圖1所示，從圖1中可以看出，當(dāng)采用長(zhǎng)度100 mm、粒徑1.7 μm或1.8 μm的色譜柱時(shí)，24種農(nóng)藥的分離度較好。一般情況下，色譜柱越長(zhǎng)，粒徑越小，化合物間的分離效果越好，但粒徑越小的色譜柱價(jià)格越昂貴，對(duì)樣品處理的凈化程度要求也越高，并且整個(gè)液相系統(tǒng)的壓力也越大，影響儀器壽命，因此選擇Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18色譜柱，即可滿足檢測(cè)需求。

圖1   不同色譜柱的24種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖

Fig. 1   Total ion chromatograms of mixed standard solutions of 24 pesticides on different chromatographic columns

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

待測(cè)目標(biāo)物的色譜行為、離子化效率及檢測(cè)靈敏度受流動(dòng)相組成和配比的影響較大，比較了甲醇-0.1%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲酸、甲醇（含0.1%甲酸）-2 mmol/L甲酸銨溶液（含0.01%甲酸）、甲醇（含0.1%甲酸）-5 mmol/L甲酸銨溶液（含0.01%甲酸）、2 mmol/L甲酸銨甲醇溶液（含0.01%甲酸）-2 mmol/L甲酸銨溶液（含0.01%甲酸）等流動(dòng)相系統(tǒng)。結(jié)果表明，甲酸及甲酸銨的加入顯著改善了24種農(nóng)藥的離子化效果，提高了靈敏度，峰型拖尾現(xiàn)象得到明顯改善，這可能是因?yàn)樗岬募尤胗欣谠谡Ｊ较聻榛衔锾峁┵|(zhì)子。考慮到實(shí)驗(yàn)中靈敏度并未隨甲酸銨濃度的增大而提高，且較高的酸度和鹽類的使用可能會(huì)對(duì)色譜柱填料造成不可逆的化學(xué)破壞，因此采用甲醇（含0.1%甲酸）-2 mmol/L甲酸銨溶液（含0.01%甲酸）作為流動(dòng)相，24種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白基質(zhì)溶液和加標(biāo)樣品溶液總離子流色譜圖如圖2所示。

圖2   混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白基質(zhì)溶液及加標(biāo)樣品溶液總離子流圖

Fig. 2   Total ion current diagram of mixed standard solution，blank matrix solution and spiked sample solution

1—乙酰甲胺磷； 2—氧樂果； 3—噻蟲嗪； 4—吡蟲啉； 5—噻蟲胺； 6—多菌靈； 7—啶蟲脒； 8—敵敵畏； 9—倍硫磷亞砜； 10—倍硫磷砜；11—甲拌磷亞砜； 12—甲拌磷砜； 13—水胺硫磷； 14—氯吡脲；15—烯酰嗎啉； 16—腈苯唑； 17—倍硫磷； 18—甲基異柳磷； 19—戊唑醇； 20—甲拌磷； 21—吡唑醚菌酯； 22—苯醚甲環(huán)唑； 23—阿維菌素； 24-毒死蜱

2.2 提取溶劑的選擇

農(nóng)藥殘留檢測(cè)處理常用的提取劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈等，考慮到乙腈對(duì)乙酰甲胺磷等極性農(nóng)藥的提取效率較高，且敵敵畏、氧樂果等在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定。分別考察了乙腈、0.5%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙酸-乙腈、1%乙酸-乙腈、2%乙酸-乙腈溶液的提取效果。不同提取溶劑對(duì)24種農(nóng)藥回收率的影響如圖3所示，從圖3中可以看出，乙腈、0.5%乙酸-乙腈、1%乙酸-乙腈、2%乙酸-乙腈作為提取溶劑時(shí)24種農(nóng)藥的平均回收率分別為95.67%、91.86%、93.55%和96.48%。然而，使用2%乙酸-乙腈提取時(shí)造成了敵敵畏、甲拌磷、倍硫磷和倍硫磷亞砜4種農(nóng)藥的回收率高于120%，使用乙腈提取時(shí)24種農(nóng)藥的回收率為75.48%～110.04%，普遍較高且穩(wěn)定，因此選用乙腈作為提取溶劑。

圖3   不同提取溶劑對(duì)24種農(nóng)藥回收率的影響

Fig. 3   The effects of different extraction solvents on the recovery of 24 pesticides were studied.

2.3 凈化材料的選擇

為避免復(fù)雜的中藥材基質(zhì)對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)產(chǎn)生干擾，常用無(wú)水MgSO4、PSA、C18和GCB等對(duì)樣品進(jìn)行凈化。鑒于抗菌消炎片/膠囊處方中有大青葉、金錢草等色素含量較高的組分，考察以下6種組合的凈化效果，每毫升提取液使用：（1）150 mg MgSO4、25 mg PSA、2.5 mg GCB；（2）150 mg MgSO4、25 mg PSA、5 mg GCB；（3）150 mg MgSO4、25 mg PSA、10 mg GCB；（4）150 mg MgSO4、25 mg PSA、20 mg GCB；（5）150 mg MgSO4、50 mg PSA、50 mg C18和15 mg GCB；（6）150 mg MgSO4、50 mg PSA、50 mg C18和25 mg GCB。不同吸附凈化劑對(duì)24種農(nóng)藥和代表性農(nóng)藥回收率的影響如圖4所示，從圖4中可以看出，6組凈化材料處理下的平均回收率分別為108.13%、109.49%、107.06%、104.16%、80.08%和72.19%。當(dāng)選用組合（1）時(shí)，24種農(nóng)藥回收率為79.43%~118.46%。此外，多菌靈、氯吡脲、阿維菌素的農(nóng)藥回收率隨著GCB用量的增加明顯下降，這可能是因?yàn)镚CB的正六元環(huán)結(jié)構(gòu)會(huì)吸附平面結(jié)構(gòu)農(nóng)藥，而使用對(duì)非極性化合物有較強(qiáng)吸附作用的C18導(dǎo)致苯醚甲環(huán)唑等非極性農(nóng)藥回收率降至60%左右?？紤]到抗菌消炎片/膠囊處方中并不包含油脂、固醇和類胡蘿卜素等非極性干擾物，因此凈化材料中不添加C18，1 mL提取液采用150 mg MgSO4、25 mg PSA、2.5 mg GCB進(jìn)行吸附凈化。

圖4   不同吸附凈化劑對(duì)24種農(nóng)藥和代表性農(nóng)藥回收率的影響

Fig. 4   Effects of different adsorption purification agents on the recovery of 24 pesticides and representative pesticides.

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

通過(guò)向空白基質(zhì)與純?nèi)軇┲刑砑酉嗤瑵舛葮?biāo)樣的離子響應(yīng)強(qiáng)度比值來(lái)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)，用純乙腈分別配制10、20、50 ng/mL的溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液，同時(shí)稱取空白基質(zhì)樣品，按照1.3樣品處理方法，配制與溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度相同的空白基質(zhì)溶液。24種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果見表3，有13種化合物基質(zhì)效應(yīng)相對(duì)強(qiáng)度在0.8～1.2之間，基質(zhì)效應(yīng)不明顯。噻蟲嗪、氧樂果、倍硫磷亞砜、乙酰甲胺磷、倍硫磷砜、氯吡脲等有基質(zhì)減弱效應(yīng)，苯醚甲環(huán)唑有基質(zhì)增強(qiáng)作用。為減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果帶來(lái)的誤差，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，在實(shí)際樣品的檢測(cè)中采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行校正。

表3   24種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)、線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

Tab. 3   The matrix effect，linear range，linear equation，correlation coefficient，limit of detection and limit of quantitation of 24 pesticides

 

2.5 線性關(guān)系及檢出限

在1.2儀器工作條件下，依次測(cè)定24種農(nóng)藥系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以各農(nóng)藥的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算線性方程和相關(guān)系數(shù)。向空白基質(zhì)樣品中添加適量混合標(biāo)準(zhǔn)工作液制成空白加標(biāo)樣品溶液，分別以3倍信噪比和10倍信噪比對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度作為方法檢出限和定量限，根據(jù)稱樣質(zhì)量和定容體積換算成樣品中的含量，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示。24種農(nóng)藥質(zhì)量濃度的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限結(jié)果見表3，24種農(nóng)藥在0.5～500 ng/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)均大于0.998，表明線性關(guān)系良好，檢出限為0.004～0.005 mg/kg，定量限為0.008～0.01 mg/kg。

2.6 樣品加標(biāo)回收及精密度試驗(yàn)

向空白基質(zhì)樣品中添加適量系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別制成0.01，0.02及0.10 mg/kg 3個(gè)水平的空白加標(biāo)樣品溶液，每個(gè)添加水平平行制備6個(gè)樣品，考察目標(biāo)檢測(cè)物的加標(biāo)回收率及方法精密度，結(jié)果見表4。由表4可知，24種農(nóng)藥的加標(biāo)回收率為75.00%～112.18%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.56%～9.95%(n=6)，表明該方法的精密度、準(zhǔn)確度較高，可以滿足多種農(nóng)藥殘留分析要求和實(shí)際檢測(cè)需要。

表4   加標(biāo)回收及精密度試驗(yàn)結(jié)果

Tab. 4   Results of 24 pesticide spiked recovery test

 

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

向空白基質(zhì)樣品中添加適量系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，并按1.3樣品處理方法制備樣品溶液，分別于第0、4、8、12、16、20、24 h，在1.2儀器工作條件下進(jìn)樣測(cè)定。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見表5，由表5可知，24種農(nóng)藥色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.28%～2.58%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表5   穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

Tab. 5   Results of stability test

 

2.8 樣品測(cè)定

按照所建方法對(duì)134批次抗菌消炎片/膠囊進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見表6。13個(gè)廠家所生產(chǎn)的抗菌消炎片/膠囊均有多種農(nóng)藥殘留檢出，134批次樣品中有123批次存在農(nóng)藥殘留檢出情況，檢出率為91.8%，檢出農(nóng)藥殘留種類有9種。檢出率排名前三的農(nóng)藥依次為吡蟲啉、啶蟲脒和烯酰嗎啉，檢出率分別達(dá)到61.94%、51.49%和42.54%，其他農(nóng)藥殘留檢出率在20.90%~32.84%之間。

表6   抗菌消炎片/膠囊樣品檢測(cè)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果

Tab. 6   Results of sample detection and risk assessment of Kangjun Xiaoyan Tablets/Capsules

 

2.9 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

目前暫未有中成藥農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的指導(dǎo)原則出臺(tái)，故參照《中國(guó)藥典》2020版四部9302“中藥有害殘留物限量制定指導(dǎo)原則”建立農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型，按式(1)計(jì)算最大限量理論值L。中成藥一般為100%。根據(jù)藥品說(shuō)明書，抗菌消炎片/膠囊最大服用劑量為每日口服一次6粒，一日3次，每粒為0.4 g，因此每日人均可服用的最大劑量M為7.2 g。

式中：L——最大限量理論值，mg/kg；ADI——每日允許攝入量，mg/kg bw；W——人體平均體重，一般按63kg計(jì)；M——每日人均可服用的最大劑量，kg；100——安全因子；AT——平均壽命天數(shù)，一般為365天/年×70年；EF——服用頻率，設(shè)為30天/年；ED——一生中服用的暴露年限，設(shè)為60年；t——農(nóng)藥轉(zhuǎn)移率，中成藥一般為100%。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果見表6，抗菌消炎片/膠囊中殘留農(nóng)藥含量極低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于《中國(guó)藥典》2020 版四部規(guī)定的限度，該方法可為廠家對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供參考。

 

3 結(jié)語(yǔ)

建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定抗菌消炎片/膠囊中24種農(nóng)藥殘留量。對(duì)提取溶劑、凈化材料、色譜柱及流動(dòng)相進(jìn)行優(yōu)化，該方法樣品處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)效率高，在藥品準(zhǔn)入和市場(chǎng)監(jiān)督中可用于大批量樣品檢測(cè)。此外，建立了中成藥農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型，結(jié)果表明抗菌消炎片/膠囊中農(nóng)藥殘留含量均低于規(guī)定限度，該模型可為其他中成藥的農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供參考。

 

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