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嘉峪檢測網(wǎng) 2025-11-12 21:31
摘 要： 建立頂空氣相色譜法同時測定醋酸阿比特龍原料藥中甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲苯8種有機溶劑殘留量。采用DB-624毛細管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm）分離，程序升溫，載氣為氮氣，流量為1.0 mL/min，進樣口溫度為200 ℃，氫火焰離子化檢測器溫度為250 ℃，頂空平衡溫度為80 ℃，平衡時間為20 min，分流比為10∶1，進樣體積為1.0 mL。8種有機溶劑的質(zhì)量濃度在各自范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均不小于0.997，檢出限為1.008～12.668 μg/mL。樣品的平均加標回收率為92.44%～99.18%，測定結(jié)果的相對標準偏差為1.34%～3.06%（n=6）。3批樣品檢出甲醇和丙酮，殘留量低于國家標準限度，其余溶劑均未檢出。該方法靈敏度高、準確度好、操作簡單，可用于醋酸阿比特龍原料藥中8種殘留溶劑的檢測與分析，為有效控制醋酸阿比特龍原料的質(zhì)量提供了參考。
關(guān)鍵詞： 醋酸阿比特龍； 殘留溶劑； 頂空氣相色譜法； 頂空進樣
藥品中的殘留溶劑是指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑。原料藥中的殘留溶劑往往具有毒性和致癌性，最終可能會進入藥品產(chǎn)品中，危害使用者的健康[1]，因此控制藥物中的殘留溶劑是保證上市藥品安全的重要研究內(nèi)容之一，尤其在原料藥質(zhì)量研究中，殘留溶劑的監(jiān)測和控制已成為關(guān)鍵的質(zhì)控項目。人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）頒布指導原則《雜質(zhì)：殘余溶劑的指導原則Q3C》”，明確規(guī)定了藥品中殘留溶劑的使用要求[2]。
醋酸阿比特龍是一種高選擇性、不可逆的CYP17酶抑制劑，是治療轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌（mCRPC）和高危轉(zhuǎn)移性內(nèi)分泌治療敏感性前列腺癌（mHSPC）的首選藥物[3?5]，于2011年在美國批準上市。醋酸阿比特龍多以脫氫表雄酮為原料，進行羥基保護后，與格氏試劑發(fā)生加成反應，脫水脫保護生成阿比特龍，最后與乙酰氯反應生成醋酸阿比特龍[6?7]，合成過程中使用多種二類三類溶劑。對國內(nèi)醋酸阿比特龍的合成工藝調(diào)研發(fā)現(xiàn)，當前其生產(chǎn)和存儲過程中需進行研究的殘留溶劑可能有甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲苯等。醋酸阿比特龍尚未收載于《中華人民共和國藥典》2020年版，雖在《美國藥典》47版有收錄，但缺少殘留溶劑項目，同時測定這幾種殘留溶劑的方法未見報道。
目前常見的殘留溶劑測定方法主要有氣相色譜法[8?10]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[11?12]等，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法儀器昂貴且操作復雜，相比之下，氣相色譜法具有操作簡單、快速的優(yōu)點。在節(jié)約時間、降低成本的基礎(chǔ)上，筆者參考文獻[13?15]建立頂空氣相色譜法，實現(xiàn)了醋酸阿比特龍原料藥中甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲苯8種溶劑殘留量的同時測定，為有效控制醋酸阿比特龍原料藥的質(zhì)量提供了新方法。
1 實驗部分
1.1 主要儀器與試劑
氣相色譜儀：7890B型，美國安捷倫科技有限公司。
頂空進樣器：7697 型，美國安捷倫科技有限公司。
電子天平：XS105 型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多有限公司。
醋酸阿比特龍樣品：批號分別為03200601 N，03200602 N，03200603 N，某藥廠。
甲醇、乙醇、乙酸乙酯、環(huán)己烷：均為分析純，質(zhì)量分數(shù)分別為99.5%、99.7%、99.5%、99.7%，國藥集團化學試劑有限公司；
丙酮、異丙醇、二氯甲烷、甲苯：均為分析純，質(zhì)量分數(shù)分別為99.5%、99.7%、99.5%，99.5%，天津市科密歐化學試劑有限公司；
N，N-二甲基甲酰胺（DMF）：色譜純，美國費希爾公司；
O，乙腈：色譜純，德國默克公司；
P，實驗用水為純化水。
1.2 色譜條件
色譜柱：DB-624型毛細管柱（30 m×0.32 mm，1.8 μm，美國安捷倫科技有限公司）；升溫方式：程序升溫，起始溫度為40 ℃，保持5 min，以5 ℃/min的速率升溫至120 ℃，再以30 ℃/min的速率升溫至210 ℃，保持10 min；載氣：氮氣，流量為1.0 mL/min；進樣口溫度：200 ℃；頂空瓶平衡溫度：80 ℃；平衡時間：20 min；分流比：10∶1；檢測器溫度：250 ℃；進樣體積：1.0 mL。
1.3 溶液制備
混合對照品儲備溶液：分別精密稱取甲醇150 mg、乙醇250 mg、丙酮250 mg、異丙醇250 mg、二氯甲烷30 mg、乙酸乙酯250 mg、環(huán)己烷380 mg、甲苯40 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加入DMF溶液使溶解并稀釋至標線，搖勻，配制成各組分質(zhì)量濃度均分別為1.5、2.5、2.5、2.5、0.3、2.5、3.8、0.4 mg/mL的混合對照品儲備溶液。混合對照品溶液：精密量取混合對照品儲備溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，用DMF溶液稀釋至標線，搖勻，精密量取2 mL置于頂空瓶中，密封。系列混合標準工作溶液：精密量取混合對照品貯備溶液0.1、0.2、0.5、1、1.5、3 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用DMF溶液稀釋至標線，搖勻，配制成系列混合標準工作溶液，8種組分的質(zhì)量濃度見表1。
表1 系列標準工作溶液中8種組分的質(zhì)量濃度
Tab. 1 The mass concentration of 8 components in a series of standard working solutions
空白溶液：精密量取2 mL DMF溶液于20 mL頂空瓶中，加蓋密封。樣品溶液：精密稱取醋酸阿比特龍100 mg于頂空瓶中，加入2ml DMF溶液，加蓋密封。
1.4 樣品測定
取空白溶液、樣品溶液、混合對照品溶液，在1.2色譜條件下依次進樣分析，記錄色譜圖，以外標法計算各溶劑的殘留量。
2 結(jié)果與討論
2.1 升溫方式的優(yōu)化
8種有機溶劑均為小分子化合物且沸點較低，但極性不同，甲醇、乙醇、異丙醇極性均較強，二氯甲烷、甲苯、丙酮和乙酸乙酯為中等極性，環(huán)己烷 為弱極性，采用程序升溫可縮短分析時間，提高分離效率。
2.2 進樣方式的優(yōu)化
頂空進樣技術(shù)可以避免繁瑣的樣品處理過程，避免有機溶劑對分析造成的干擾，減少對色譜柱及進樣口的污染。與直接進樣色譜系統(tǒng)相比較，采用頂空進樣系統(tǒng)的色譜峰響應值較高，故采用頂空進樣法測定。
2.3 頂空平衡溫度和平衡時間的優(yōu)化
雖然平衡溫度越高靈敏度越高，但也會引發(fā)儀器的氣密性和頂空瓶爆裂的情況?？疾祉斂掌胶鉁囟确謩e為70、80、90、100 ℃時對測定結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)各溶劑的色譜峰面積隨著溫度升高逐漸變大，但考慮到平衡溫度過高可能導致目標組分的不穩(wěn)定，選擇80 ℃作為頂空平衡溫度。樣品溶液的氣-液兩相需要有足夠的時間才能達到平衡，但頂空平衡時間過長時可能引起頂空瓶的氣密性變差，導致定量準確性降低。考察在頂空溫度為80 ℃時，頂空平衡時間分別為10、20、30、40 min對測定結(jié)果的影響。結(jié)果表明，頂空溫度為80 ℃，平衡時間為20 min時，色譜峰面積趨于穩(wěn)定，在保證定量準確性滿足要求的前提下，選擇頂空平衡時間為20 min。
2.4 分流比的優(yōu)化
適當?shù)姆至鞅瓤梢詼p少樣品的損失，確保檢測結(jié)果的準確性，提高檢測器的靈敏度?？疾旆至鞅确謩e為5∶1、10∶1、15∶1、20∶1時，混合對照品溶液中各溶劑的峰面積，結(jié)果顯示，分流比為10∶1時，各溶劑的色譜峰面積最大，靈敏度較高，故選擇分流比為10∶1。
2.5 方法專屬性
在1.2色譜條件下，分別取空白溶液、混合對照品溶液、加標樣品溶液，依次進樣分析，色譜圖如圖1所示。
圖1 空白溶液、混合對照品溶液和加標樣品溶液的氣相色譜圖
Fig. 1 Gas chromatograms of blank solution， mixed reference solution， and spiked sample solution
1—甲醇； 2—乙醇； 3—丙酮； 4—異丙醇； 5—二氯甲烷；6—乙酸乙酯； 7—環(huán)己烷； 8—甲苯； 9—DMF
從圖1中可以看出，各溶劑色譜峰之間的分離度良好，空白溶劑對測定無干擾，說明方法具有較高的專屬性。
2.6 線性關(guān)系、檢出限及定量限
精密量取系列混合標準工作溶液2 mL，置于頂空瓶中，密封，進樣測定，記錄色譜峰面積，以各目標成分的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標，對應的色譜峰面積（y）為縱坐標，繪制標準工作曲線。取混合對照品溶液，用DMF溶液逐級稀釋，測定并記錄色譜峰面積，以信噪比為3時對應的溶液質(zhì)量濃度作為檢出限，以信噪比為10時對應的溶液質(zhì)量濃度作為定量限。8種溶劑質(zhì)量濃度的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表2。由表2可知，8種溶劑的質(zhì)量濃度在各自范圍內(nèi)與色譜峰面積具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.995，檢出限為1.008～12.668 μg/mL，定量限為3.025～38.004 μg/mL。
表2 8種有機溶劑質(zhì)量濃度的線性范圍和線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限
Tab. 2 Linear ranges, linear equations, correlation coefficients, detection limits, and quantification limits of 8 organic solvent mass concentrations
2.7 樣品加標回收與精密度試驗
取醋酸阿比特龍樣品0.1 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，精密加入對照品儲備溶液1.0 mL，加入DMF溶液稀釋制成加標樣品溶液。精密量取2.0 mL，置于頂空瓶中，加蓋密封，搖勻，平行制備6份。在1.2 色譜條件下進樣測定，記錄色譜峰面積并計算平均回收率及測定結(jié)果的相對標準偏差。樣品加標回收及精密度試驗結(jié)果見表3，由表3可知，各溶劑的平均回收率為92.44%～99.18%，測定結(jié)果的相對標準偏差（RSD）為1.34%～3.06%（n=6）。
表3 樣品加標回收與精密度試驗結(jié)果
Tab. 3 Results of sample spiked recovery and precision test
2.8 穩(wěn)定性試驗
精密量取混合對照品溶液，分別于室溫下放置0、1、2、4、8、12 h，在1.2色譜條件下進樣測定，記錄色譜峰面積，穩(wěn)定性試驗結(jié)果見表4。由表4可知，混合標準溶液中甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲苯的色譜峰面積的RSD分別為0.9%、2.7%、0.8%、1.9%、3.0%、1.6%、1.4%、1.2%，加標樣品溶液中8種溶劑色譜峰面積的RSD分別為1.5%、1.1%、0.9%、2.0%、2.9%、1.1%、0.3%、1.2%，表明樣品溶液在室溫下放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
表4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果
Tab. 4 Results of stability
3 結(jié)語
建立了頂空氣相色譜法同時測定醋酸阿比特龍中甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲苯8種有機溶劑殘留量，該方法準確度好、靈敏度高，可用于醋酸阿比特龍原料藥中8種殘留溶劑的檢測與分析，為加強醋酸阿比特龍質(zhì)量的科學監(jiān)管提供了參考。因檢測數(shù)據(jù)有限，在制定合理的限度方面該方法有一定局限性。在國家藥品監(jiān)督管理局頒布的《化學藥物殘留溶劑研究的技術(shù)指導原則》中，已明確建議通過積累多批中試和工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模樣品的檢測數(shù)據(jù)后確定如何控制殘留溶劑[16]。下一步的研究應充分積累檢測數(shù)據(jù)，從更好地控制生產(chǎn)過程和產(chǎn)品質(zhì)量的角度出發(fā)，盡量降低溶劑的控制限度，必要時修訂質(zhì)量標準。另外，應繼續(xù)研究并優(yōu)化醋酸阿比特龍的合成工藝，減少二類三類溶劑的使用，從源頭上提高醋酸阿比特龍的安全性。
參考文獻
1 高家敏，曹進.化妝品和藥品殘留溶劑測定方法差異的探討［J］.中國藥師，2017，20（9）： 1 643.
GAO Jiamin，CAO Jin. Differences in Various Detection Methods for Ｒesidual Solvents in Cosmetics and Drugs［J］. China Pharmacist，2017，20（9）： 1 643.
2 周海鈞.藥品注冊的國際技術(shù)要求：質(zhì)量部分［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000： 343.
ZHOU Haijun. International technical requirements for drug registration［M］. Beijing：People's Health Publishing House，2000： 343.
3 劉敏，石亞飛，樂凱迪，等.仿制與原研阿比特龍治療晚期前列腺癌的療效和安全性比較研究中國醫(yī)院用藥評價與分析［J］. 2023，23（6）： 696.
LIU Min，SHI Yafei，LE Kaidi，et al. Comparative study on the efficacy and safety of imitation and original abiraterone in the treatment of advanced prostate cancer［J］. 2023，23（6）： 696.
4 吳明亮，李春茂，張杰，等.醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松對mCRPC患者尿流動力學指標及PNI、NLR水平的影響［J］.臨床和實驗醫(yī)學雜志，2024，23（2）： 169.
WU Mingliang LI Chunmao，ZHANG Jie，et al. Effects of abiraterone acetate combined with prednisone on urodynamic index，PNI and NLR levels in patients with mCRPC［J］. Journal of Clinical and Experimental Medicine，2024，23（2）： 169.
5 謝騏同，陳惠萍，溫碧恒.醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松治療轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌的效果［J］.醫(yī)學理論與實踐，2023，36（13）： 2 234.
XIE Qitong，CHEN Huiping，WEN Biheng. The effect of abiraterone acetate in combination with prednisone on metastatic castration-resistant prostate cancer［J］. The Journal of Medical Theory and Practice， 2023，36（13）： 2 234.
6 陳娜，吉慶，黃震洲，等.醋酸阿比特龍合成路線圖解［J］.中國藥物化學雜志，2022，32（3）： 245.
CHEN Na，JI Qing，HUANG Zhenzhou. Schematic diagram of abiraterone acetate synthesis［J］. Chinese Journal of Medicinal Chemistry，2022，32（3）： 245.
7 褚定軍，張毅，謝曉強.醋酸阿比特龍合成工藝改進［J］.浙江化工，2019，50（8）： 5.
CHU Dingjun，ZHANG Yi，XIE Xiaoqiang. Improvement in the synthesis process of abiraterone acetate ［J］. Zhejiang Chemical Industry，2019，50（8）： 5.
8 劉姣，滿彥汝，董娟，等.頂空氣相色譜法測定頭孢他啶原料藥中的殘留溶劑［J］.食品與藥品，2024，26（5）： 439.
LIU Jiao，MAN Yanru，DONG Juan，et al. Determination of residual solvents in ceftazidime bulk drug by headspace gas chromatography［J］. Food and Drug，2024，26（5）： 439.
9 顏立毅，鄭麗斯.頂空氣相色譜法測定食用植物油中苯、甲苯和二甲苯［J］.化學分析計量，2023，32（9）： 84.
YAN Liyi，ZHENG Lisi.Determination of benzene，toluene and xylene in edible vegetable oil by headspace gas chromatography［J］. Chemical Analysis and Meterage，2023，32（9）： 84.
10 王文昌，張曉芳，吳娟娟，等.氣相色譜法測定7-氨基-3-（丙烯-1-基）-3-頭孢烯-4-羧酸中溶劑殘留量［J］.化學分析計量，2023，32（7）： 21.
WANG Wenchang，ZHANG Xiaofang，WU Juanjuan，et al. Determinition of solvents residues in 7-amino-3-（propen-1-yl）-3-cefenm-4-carboxylic acid by gas chromatography［J］. Chemical Analysis and Meterage，2023，32（7）： 21.
11 付蒙，陳曉莉，周姝，等.頂空氣相色譜-質(zhì)譜法測定藥品包裝材料中40種有機溶劑殘留量［J］.中國藥品標準，2023，24（1）： 96.
FU Meng，CHEN Xiaoli，ZHOU Zhu，et al. Simultaneous determination of 40 kinds of residual organic solvents in pharmaceutical packaging materials by headspace gas chromato-graphy-mass spectrometry［J］. Drug Standards of China，2023，24（1）： 96.
12 胡琳珊.吹掃捕集氣相色譜-質(zhì)譜法測定水中59種揮發(fā)性有機物［J］.化學分析計量，2022，31（7）： 33.
HU Linshan. Determination of 59 volatile organic compounds in water by gas chromatography-mass spectrometry with purge and trap sampling［J］. Chemical Analysis and Meterage，2022，31（7）： 33.
13 牛水蛟，李啟艷，王維劍，等.頂空-氣相色譜法測定依克多因原料中11種殘留溶劑［J］.化學研究與應用，2024，36（9）： 2 179.
NIU Shuijiao，LI Qiyan，WANG Weijian，et al. Determination of 11 residual solvents in Ectoine raw materials by HS-GC［J］. Chemical Research and Application，2024，36（9）： 2 179.
14 于宗琴，李子靜，唐敏芳，等.頂空氣相色譜法測定醋酸阿比特龍中8種溶殘留溶劑［J］ .山東醫(yī)學高等?？茖W校學報，2021，43（2）： 144.
YU Zongqin，LI Zijing，Tang Minfang，et al. Determination of residual solvents in abiraterone acetate by headspace gas chromatography［J］. Journal of Shandong Medical University，2021，43（2）： 144.
15 鄭美玲，張明麗，胡欣怡，等.頂空氣相色譜法同時測定兒童藥品中8種殘留溶劑［J］.化學分析計量，2024，33（7）： 18.
ZHENG Meiling，ZHANG Mingli，HU Xinyi，et al. Simultaneous determination of 8 residual solvents in children's drugs by headspace gas chromatography［J］. Chemical Analysis and Meterage，2024，33（7）： 18.
16 許真玉.藥品審評過程中殘留溶劑檢查常見問題分析［J］.中國藥科大學學報，2009，40（5）： 471.
XU Zhenyu. Problem ananlysis of residual solvents control in drug evaluation［J］，Joural of China Pharmaceutical University，2009，40（5）： 471
來源：化學分析計量
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