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嘉峪檢測網(wǎng) 2025-11-27 11:55
剛剛，國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心發(fā)布《丙型肝炎病毒核酸基因分型檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2025年修訂版）（征求意見稿）》，全文如下：
丙型肝炎病毒核酸基因分型檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2025年修訂版）（征求意見稿）
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）核酸基因分型檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。
本指導(dǎo)原則是對丙型肝炎病毒核酸基因分型檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。如申請人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補充。
本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。
一、適用范圍
丙型肝炎病毒核酸基因分型檢測試劑是指利用包括分子生物學(xué)相關(guān)方法在內(nèi)的核酸檢測技術(shù)，以HCV基因序列為檢測靶標(biāo)，對人血清、血漿等樣本中的HCV不同基因型進行體外定性檢測的試劑。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實驗室指標(biāo)，可作為丙型肝炎感染者臨床診療的輔助指標(biāo)之一。
HCV屬于黃病毒科(flaviviridae)，其基因組為單股正鏈RNA。HCV 1b和2a基因型在我國較為常見，其次為2型和3型，基因4型和5型非常少見，6型相對較少。慢性HCV感染者的抗病毒治療已經(jīng)進入直接抗病毒藥物的泛基因型時代，但考慮到基因型特異性方案在中國的可負(fù)擔(dān)性優(yōu)于泛基因型方案，以及一些特殊人群（如腎損傷等的患者）,在今后一段時間內(nèi)，基因型特異性方案仍會推薦用于臨床。
本指導(dǎo)原則適用于基于實時熒光PCR（polymerase chain reaction）方法的HCV基因分型檢測試劑，其他方法學(xué)的定性檢測方法可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性確定其中具體內(nèi)容是否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇符合自身方法學(xué)特性的技術(shù)要求或評價方法。本指導(dǎo)原則適用于進行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求。
二、注冊審查要點
（一）監(jiān)管信息
1.產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如丙型肝炎病毒基因分型檢測試劑盒（熒光PCR法）。
2.分類依據(jù)
根據(jù)《6840體外診斷試劑分類子目錄》《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第Ⅲ類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。
3.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。
（二）綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品概述、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。應(yīng)詳細(xì)說明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及檢測流程。與已上市同類產(chǎn)品進行比較應(yīng)著重從方法學(xué)及不同基因型檢出能力等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別，比較內(nèi)容包括樣本類型，檢測原理，檢測靶基因，組成成分，內(nèi)標(biāo)，質(zhì)控品，判讀規(guī)則，分析性能和臨床性能等。
（三）非臨床資料
1. 產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告
注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料及生產(chǎn)工藝要求。
如已有相應(yīng)型別的國家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求。
如果有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。
2.分析性能研究
注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。
如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交采用不同機型進行性能評估的資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進行分析或驗證。
分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、采集和處理方式、稀釋方式、定值過程及數(shù)據(jù)等。研究中采用的丙型肝炎病毒陽性樣本，應(yīng)采用科學(xué)合理的方法確定其陰陽性和濃度水平，提交具體的試驗資料。分析性能評估用樣本一般應(yīng)為真實樣本，如涉及稀釋后檢測，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)。對于各項性能中采用的樣本，在下述各項性能研究資料中分別提供樣本信息列表。
2.1樣本穩(wěn)定性
應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括對不同樣本類型（血清、血漿）室溫保存、冷藏和冷凍條件下（如適用）的驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行性能驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。
如核酸提取液可不立即進行檢測，還需對核酸提取液的保存條件和穩(wěn)定性進行研究。
2.2適用的樣本類型
列明產(chǎn)品適用的樣本類型。對于具有可比性的樣本，應(yīng)提交對不同樣本類型一致性的驗證，包括不同抗凝劑的驗證或要求。
2.3準(zhǔn)確度
采用申報試劑與核酸測序或已上市產(chǎn)品，同時檢測臨床樣本，比較檢測結(jié)果之間的一致性程度，進行申報試劑的準(zhǔn)確度評價。
樣本應(yīng)選擇符合樣本穩(wěn)定性的預(yù)期人群樣本。研究應(yīng)納入一定數(shù)量的陰性和陽性樣本，應(yīng)覆蓋常見的基因型別。
2.4企業(yè)參考品驗證
根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進行檢驗并提供詳細(xì)的試驗數(shù)據(jù)。
2.5精密度
應(yīng)對精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。應(yīng)考慮運行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點等影響精密度的條件，設(shè)計合理的精密度試驗方案。
精密度評價試驗應(yīng)包含核酸提取步驟。設(shè)定合理的精密度評價周期。例如為期至少20天的檢測。對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，獲得重復(fù)性、實驗室內(nèi)精密度、實驗室間精密度、批間精密度等結(jié)果。
應(yīng)采用臨床樣本進行精密度評價，應(yīng)至少包含3個水平：陰性樣本、檢出限水平樣本、中/強陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?，例如?/span>
陰性樣本：不含待測物或待測物濃度為零時，陰性符合率應(yīng)為100%（n≥20）。
檢出限水平樣本：檢出限水平樣本陽性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。
中/強陽性樣本：待測物濃度呈中度到強陽性，陽性符合率為100%，且Ct值的CV≤5%（n≥20）。
2.6檢出限
2.6.1檢出限的確定
建議將丙型肝炎病毒樣本或病毒培養(yǎng)物分別梯度稀釋于與適用樣本一致的基質(zhì)中，進行檢出限的確定。每個濃度梯度重復(fù)檢測不少于20次，將具有95%陽性檢出率的濃度水平作為檢出限。
申請人應(yīng)對申報產(chǎn)品聲稱可檢測的丙型肝炎病毒所有基因型分別進行檢出限的確定。
2.6.2檢出限的驗證
另外選擇臨床樣本或病毒培養(yǎng)物在檢出限濃度水平進行驗證，進行至少20次重復(fù)檢測，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。
申請人應(yīng)對申報產(chǎn)品聲稱可檢測的丙型肝炎病毒所有基因型分別進行檢出限的驗證。
應(yīng)提供詳細(xì)的病毒滴度/濃度的確定方法，同時應(yīng)詳細(xì)描述病毒樣本的確認(rèn)方法及驗證結(jié)果。
2.7混合基因型的研究
該部分研究主要目的是考查申報試劑檢測混合型樣本的能力。申請人應(yīng)設(shè)置不同濃度比例的混合型樣本進行驗證。
因理想的不同濃度比例基因混合型樣本在臨床單位中難以收集，申請人可以使用臨床混合模擬樣本進行驗證。該部分樣本建議用核酸測序方法和/或其他已上市產(chǎn)品明確樣本中包含的所有基因型，同時應(yīng)使用核酸定量的方法確定不同基因型的濃度。
2.8分析特異性
2.8.1交叉反應(yīng)
用于丙型肝炎病毒基因分型檢測試劑交叉反應(yīng)驗證的病原體種類主要考慮以下幾方面可能性：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀（推薦種類見表1）。
建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進行交叉反應(yīng)的驗證。通常，細(xì)菌感染的水平為106 cfu/mL或更高，病毒為105 pfu/mL或更高。
申請人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗證的病毒和細(xì)菌的來源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗資料。有關(guān)交叉反應(yīng)驗證的信息應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項中有所體現(xiàn)。
表1 用于交叉反應(yīng)研究的微生物（推薦）
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微生物 |
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黃病毒科（如：西尼羅病毒等） |
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登革熱病毒 |
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人巨細(xì)胞病毒 |
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EB病毒 |
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人類免疫缺陷病毒1、2 |
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乙型肝炎病毒 |
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甲型肝炎病毒 |
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梅毒螺旋體 |
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人類皰疹病毒6型 |
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單純皰疹病毒1型 |
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單純皰疹病毒2型 |
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甲型流感病毒 |
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金黃色葡萄球菌 |
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白色念珠菌 |
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試劑盒聲稱可檢測型別外的其他型別丙型肝炎病毒 |
2.8.2競爭性干擾
申請人應(yīng)充分考慮臨床上常見的丙型肝炎病毒不同基因型混合感染情況，評價高濃度被測分析物對低濃度被測分析物檢測結(jié)果的影響。建議申請人結(jié)合申報試劑的反應(yīng)模式，使用一種基因型最低檢出限濃度的丙型肝炎病毒和另一種基因型高濃度的丙型肝炎病毒評估競爭性干擾，競爭性干擾的基因型別組合建議為同一反應(yīng)體系內(nèi)及常見混合感染的病毒。
2.8.3干擾物質(zhì)
潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性物質(zhì)（見表2）和常用的治療藥物如普通干擾素IFN-α、復(fù)合IFN和聚乙二醇干擾素α、利巴韋林、粒細(xì)胞刺激因子（GMCSF）、常見直接抗病毒藥物（DAAs）等。
使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物濃度進行驗證，另外，亦建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(最差條件)條件下進行評價。對于常見藥物干擾試驗，建議參照相應(yīng)藥物藥代動力學(xué)研究確定的治療藥物濃度添加相應(yīng)藥物進行干擾驗證。
建議在病毒的檢測臨界值水平對每種干擾物質(zhì)的干擾影響進行檢測。
表2 建議用于干擾研究的物質(zhì)（推薦）
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干擾物質(zhì) |
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膽紅素* |
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游離血紅蛋白* |
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甘油三酯* |
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系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血 |
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抗核抗體 |
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類風(fēng)濕因子 |
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總G型免疫球蛋白（IgG） |
同時應(yīng)使用HCV 核酸陰性樣本進行評估，評估試劑的特異性。
2.9核酸提取/純化性能
在進行核酸檢測之前，建議有核酸（RNA）提取/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的RNA外，還應(yīng)有相應(yīng)純化作用，盡可能去除PCR抑制物。
對配合使用的所有核酸提取試劑進行提取核酸純度、提取效率的研究，并與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進行平行比對。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測試劑進行抗干擾、精密度和檢出限的驗證。
2.10反應(yīng)體系
研究確定最佳核酸提取和反應(yīng)體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積、試劑用量、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)條件（各階段溫度、時間、循環(huán)數(shù)）、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法等。
提交不同適用機型基線和閾值循環(huán)數(shù)的確定資料。
不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗證資料。
3. 穩(wěn)定性研究
申報試劑的穩(wěn)定性主要包括實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性（如適用）及凍融次數(shù)限制等，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
4. 陽性判斷值研究
用于陽性判斷值研究的樣本需具有多樣性和代表性，應(yīng)考慮不同年齡、地域、不同感染階段等因素，盡量納入含有干擾物質(zhì)或其他易引起交叉反應(yīng)病原體的樣本。研究樣本應(yīng)包含所有試劑盒聲稱可檢測的丙型肝炎病毒基因型。如不同基因型的陽性判斷值有差異，應(yīng)分別建立陽性判斷值。建議申請人采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式對申報產(chǎn)品進行陽性判斷值研究。如存在判定值灰區(qū)，應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。如采用其他方法對陽性判斷值進行確認(rèn)研究，應(yīng)說明這種方法的合理性。
提交陽性判斷值研究所用樣本的背景信息列表，至少包括樣本來源機構(gòu)、臨床診斷信息、性別、年齡等信息。
提供內(nèi)標(biāo)檢測結(jié)果范圍的確定方法和研究資料。
5. 其他資料
5.1主要原材料研究資料
該類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品、參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值試驗資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗資料、生產(chǎn)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。生產(chǎn)商應(yīng)固定，不得隨意更換。
5.1.引物和探針：應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、靶序列的基因位點及兩者的對應(yīng)情況。建議每種基因型的病毒設(shè)計兩套或多套引物、探針以供篩選，通過序列比對和功能性試驗等方式，對病毒進行包容性和特異性（如交叉反應(yīng)）的評價，其中序列比對包括與已公布丙型肝炎病毒序列的比對，及與易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的序列比對；功能性試驗包括對不同來源、不同滴度/濃度的丙型肝炎病毒不同基因型別陽性樣本，和不同的近緣病原體的檢測。通過篩選確定最佳的引物和探針組合。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度、濃度及功能性試驗等。
5.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP，應(yīng)提供對其純度、濃度、功能性等的詳細(xì)驗證資料。
5.1.3酶：需要的酶主要包括逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、尿嘧啶糖基化酶等，應(yīng)分別對酶活性、功能性等進行評價和驗證。
5.1.4核酸分離/純化組分（如有）：應(yīng)提交核酸分離/純化組分主要組成、原理介紹及相關(guān)驗證資料。
5.1.5質(zhì)控品
試劑盒一般包含陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品。陽性質(zhì)控品應(yīng)包含試劑盒檢測的所有基因型別。質(zhì)控品需參與樣本處理、核酸的平行提取和檢測的全過程，以對整個提取和PCR擴增過程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進行合理質(zhì)量控制。提交試劑盒質(zhì)控品有關(guān)原料選擇、制備、定值過程、濃度范圍等試驗資料，對質(zhì)控品的檢測結(jié)果Ct值范圍做出明確的要求。
5.1.6內(nèi)標(biāo)
樣本反應(yīng)管應(yīng)設(shè)置合理的內(nèi)對照（內(nèi)標(biāo)）以對管內(nèi)抑制可能造成的假陰性結(jié)果進行質(zhì)控。申請人應(yīng)對內(nèi)標(biāo)的引物、探針和模板的濃度進行驗證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線，又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。明確內(nèi)標(biāo)檢測結(jié)果的Ct值范圍。申請人應(yīng)提交內(nèi)對照（內(nèi)標(biāo)）的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。
5.1.7企業(yè)參考品
該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和精密度參考品。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗證的實際需要設(shè)置企業(yè)參考品。
應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗證資料。建議使用臨床樣本/培養(yǎng)物制備企業(yè)參考品，如個別基因型難以獲得（如4、5型），可采用假病毒。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：
陽性參考品：陽性參考品應(yīng)包含申報產(chǎn)品聲稱能檢測的所有基因型，每個基因型應(yīng)設(shè)置不同濃度水平，至少設(shè)置兩個濃度水平（弱陽性、中或強陽性）。
陰性參考品：可采用經(jīng)確認(rèn)無目標(biāo)靶基因序列的樣本。陰性參考品可反映非特異擴增或檢測過程，當(dāng)不存在目標(biāo)序列時不會得到相關(guān)信號。
檢出限參考品：可采用95%陽性檢出水平或略高于檢出限的水平，如100%陽性檢出水平。檢出限參考品應(yīng)包括試劑盒聲稱可檢出的所有基因型。
精密度參考品：建議包括高、低兩個濃度的樣本，其中一個濃度應(yīng)為檢出限附近的濃度。如有必要，建議同時設(shè)置陰性參考品進行驗證。
5.2生產(chǎn)工藝研究資料
介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述并標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料?；旧a(chǎn)工藝主要包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對關(guān)鍵參數(shù)進行有效控制。
（四）臨床評價資料
臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床試驗機構(gòu)的選擇
應(yīng)選擇不少于3家（含3家）已備案的臨床試驗機構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗。建議申請人在選擇臨床試驗機構(gòu)時，應(yīng)考慮試驗機構(gòu)之間的地域代表性，臨床試驗機構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉臨床試驗方案。在整個實驗中，試驗體外診斷試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
2.臨床試驗方法
2.1如已有同類產(chǎn)品上市，應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗體外診斷試劑與之進行比較研究，評價試驗體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品之間的一致性。應(yīng)充分了解產(chǎn)品方法學(xué)、臨床預(yù)期用途、主要性能指標(biāo)、陽性判斷值、基因型選擇等，已上市同類試劑應(yīng)包含試驗體外診斷試劑檢測的基因型，且對比試劑檢測結(jié)果可以區(qū)分不同基因型，確保試驗體外診斷試劑與對比試劑具有明確的可比性。
2.2如已上市分型試劑不能覆蓋試驗體外診斷試劑，可同時結(jié)合測序方法進行對比試驗，評價試驗體外診斷試劑檢測結(jié)果與測序結(jié)果之間的一致性情況，臨床試驗報告中應(yīng)對選用的測序方法作詳細(xì)介紹。
申請人應(yīng)提供以下關(guān)于測序部分的詳細(xì)試驗資料，需由臨床試驗機構(gòu)簽章確認(rèn)。
2.2.1測序方法原理、測序儀型號、測序試劑及消耗品的相關(guān)信息。
2.2.2測序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇，分子量、純度、功能性實驗等資料。引物設(shè)計應(yīng)能區(qū)分所有基因型但應(yīng)不同于試驗體外診斷試劑擴增的靶核酸區(qū)段，可以為試驗體外診斷試劑擴增片段區(qū)域外其他區(qū)域，也可以為與試驗體外診斷試劑擴增的片段存在交叉或直接包含試驗體外診斷試劑擴增片段，必要時應(yīng)以圖示方式明確測序片段和試驗體外診斷試劑擴增片段的位置關(guān)系。
2.2.3對所選測序方法的分析性能進行合理驗證，尤其是最低檢測限的確認(rèn)，建議將所選測序方法與試驗體外診斷試劑的相關(guān)性能進行適當(dāng)比對分析。
2.2.4測序方法應(yīng)建立合理的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品，對臨床樣本的檢測結(jié)果進行質(zhì)量控制。
2.2.5提交有代表性的樣本測序圖譜及結(jié)果分析資料。
3.臨床試驗受試者選擇
3.1基因型方面的考慮
HCV病毒為RNA病毒，其基因具有顯著的多樣性，不同的地區(qū)和民族，HCV流行的基因型不同。因此，在選擇HCV感染者病例時，首先應(yīng)根據(jù)HCV流行的情況，選擇能代表我國不同地區(qū)流行基因型的HCV感染者病例，以對試劑檢測我國流行的HCV病毒的能力進行客觀科學(xué)的評價。
3.2病例選擇及樣本量
臨床試驗的入組病例應(yīng)為確診的丙型肝炎病毒感染患者，涵蓋試驗體外診斷試劑所聲稱的所有基因型。每種常見基因型陽性病例數(shù)應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義，建議不少于150例（例如1b型及2a型），少見型別建議不少于30例（如3a型、3b型、6型），對于3a、3b不區(qū)分的分型試劑，則3a、3b的總例數(shù)滿足統(tǒng)計學(xué)要求即可，臨床樣本應(yīng)來源于丙型肝炎病毒核酸陽性患者。
因HCV病毒核酸4型和5型基因型感染病例多見于輸入性病例，試驗體外診斷試劑中如包含HCV核酸4型和/或5型，也應(yīng)進行適當(dāng)驗證，考慮到此類樣本的不易獲得性，樣本可來源于HCV核酸陽性患者，也可來源于經(jīng)過科學(xué)驗證的血清盤。血清盤檢測結(jié)果的評價，應(yīng)參考國內(nèi)、國際相關(guān)規(guī)定或文獻，并在產(chǎn)品說明書中對血清盤臨床驗證信息進行說明。
4.統(tǒng)計學(xué)分析
對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，對于試驗體外診斷試劑與對比方法的一致性評價，常選擇RXC表的形式總結(jié)兩種方法的各基因型檢測結(jié)果，評價指標(biāo)一般包括陽性符合率、陰性符合率，Kappa值等指標(biāo)，并計算相應(yīng)的95%置信區(qū)間。
5.不一致樣本分析
在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果有不一致的樣本，如有必要，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑或參考方法對結(jié)果進行確認(rèn)，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。
6.臨床試驗方案
臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗方案。各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由該實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報機構(gòu)的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
方案中臨床樣本信息應(yīng)明確以下信息：樣本類型、樣本采集、樣本保存條件、抗凝劑等要求，應(yīng)與產(chǎn)品說明書中規(guī)定的要求一致。
試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)以及剔除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被剔除的樣本都應(yīng)記錄在案并說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究機構(gòu)選用的對比試劑應(yīng)完全一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。
7.臨床試驗小結(jié)與報告的撰寫
根據(jù)《醫(yī)療器械臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，撰寫臨床試驗小結(jié)與報告，并且滿足簽章等要求。臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。
（五）產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，應(yīng)以規(guī)范格式進行標(biāo)注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。丙型肝炎病毒基因分型檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點關(guān)注以下內(nèi)容。
1.【預(yù)期用途】
應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
1.1試劑盒用于體外定性檢測已明確為丙型肝炎病毒核酸陽性患者的血清、血漿等樣本中的丙型肝炎病毒基因型。輔助醫(yī)療專業(yè)人員了解患者的丙型肝炎病毒基因型以確定適宜的治療方法。
1.2簡要介紹丙型肝炎病毒基因型的特征，包括不同基因型的特征、不同基因型常見亞型、不同基因型在地域及人群中的分布情況、不同基因型感染的臨床特點。
1.3強調(diào)該試劑盒檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為治療藥物調(diào)整的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情及其他實驗室檢測指標(biāo)等因素對患者治療進行綜合判斷。
2.【檢驗原理】
2.1對試劑盒檢測能夠覆蓋的所有基因型進行詳細(xì)描述（靶序列長度及來源區(qū)段、基因型及相關(guān)特征等），對引物及探針設(shè)計、不同樣品反應(yīng)管組合、對照品設(shè)置及熒光信號檢測原理等進行逐項介紹。
2.2核酸提取純化的方法、原理等。
2.3試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進行說明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對其作用機理作適當(dāng)介紹。
3.【主要組成成分】
明確試劑盒中各組分及具體成分。明確需要但未提供的材料，例如核酸提取試劑等的產(chǎn)品名稱，生產(chǎn)廠家，貨號或注冊證號、備案號等信息。
4.【適用儀器】
注明所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。
5.【儲存條件及有效期】
說明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲存條件及有效期。
6.【樣本要求】
6.1樣本收集要求：結(jié)合臨床需要并參照丙型肝炎防治指南（現(xiàn)行版）相關(guān)要求。
6.2血液樣本應(yīng)當(dāng)說明對采血管及抗凝劑的要求：明確樣本類型、采血管和抗凝劑，其他樣本應(yīng)說明樣本采集、處理及保存方式。
6.3樣本處理、運送及保存：對血液樣本離心條件的要求，核酸提取前的預(yù)處理、運送條件、保存條件及期限（短期、長期）等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。
7.【檢驗方法】
明確核酸提取用的體積、洗脫體積和PCR加樣體積，陰、陽性質(zhì)控品與待測樣本同步進行核酸提取操作。明確各適用機型的反應(yīng)參數(shù)設(shè)置。明確質(zhì)控品和內(nèi)標(biāo)品的檢測結(jié)果Ct值范圍，作為試驗有效性的標(biāo)準(zhǔn)。
8.【檢驗結(jié)果的解釋】
結(jié)合陽性對照、陰性對照和內(nèi)標(biāo)的檢測結(jié)果，通過樣本的擴增曲線和Ct值進行結(jié)果陰陽性的判斷，列明結(jié)果陰性、陽性、復(fù)測、無效等所有情形。
9.【檢驗方法的局限性】
描述該檢驗方法的局限性，例如：
9.1該產(chǎn)品僅用于丙型肝炎病毒核酸陽性患者的臨床樣本檢測。
9.2該產(chǎn)品僅用于不同基因型的定性檢測，不適用定量檢測。
9.3如丙型肝炎病毒核酸濃度過低，可能導(dǎo)致丙型肝炎病毒核酸基因型無法有效檢出。
9.4該產(chǎn)品僅用于產(chǎn)品說明書預(yù)期用途所包含的已知基因型的檢測，不適用其他基因型的檢測。當(dāng)本試劑盒檢測結(jié)果為陰性時，并不能排除被檢測者帶有丙型肝炎病毒的其他基因型。
9.5如申報產(chǎn)品因產(chǎn)品原理導(dǎo)致無法對丙型肝炎病毒不同基因型混合樣本進行區(qū)別，應(yīng)在產(chǎn)品說明書中進行注釋，幫助醫(yī)療專業(yè)人員對檢測結(jié)果進行客觀認(rèn)識。
9.6模板RNA質(zhì)量將影響該產(chǎn)品檢測結(jié)果。模板RNA的質(zhì)量可能受樣本來源、采集過程、運輸條件、樣本處理等因素影響，同時也受RNA提取方法、PCR儀類型、操作環(huán)境以及當(dāng)前分子生物學(xué)技術(shù)的局限性等的限制，可能導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性和假陰性的檢測結(jié)果。使用者須了解檢測過程中可能存在的潛在風(fēng)險。
9.7該產(chǎn)品以丙型肝炎病毒基因上的特定RNA片段為檢測靶標(biāo)，如試劑盒引物與探針結(jié)合區(qū)出現(xiàn)基因突變或基因型變異體等，導(dǎo)致檢測結(jié)果異常，建議在說明書中進行相關(guān)提示。
10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
詳述以下性能指標(biāo)：
10.1最低檢出限：說明試劑不同樣本類型及不同基因型的最低檢出限，應(yīng)包括產(chǎn)品聲稱的全部基因型/亞型，簡要介紹最低檢出限的確定方法。如不同基因型之間最低檢出限不同，應(yīng)分別列出。
10.2精密度：精密度參考品的組分、濃度及評價標(biāo)準(zhǔn)、評價結(jié)果。
10.3特異性
10.3.1交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體以及丙型肝炎病毒其他基因型的驗證情況，建議以列表的方式表示經(jīng)過交叉反應(yīng)驗證的病原體名稱、型別、濃度等信息。
10.3.2干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)及常用抗病毒藥物、干擾素等藥物對檢測結(jié)果的影響。如未進行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。
10.4臨床試驗：介紹試驗方法、受試者及樣本、試驗結(jié)果和結(jié)論等。
10.5不同基因型混合性能研究（如有）：簡要介紹不同基因型混合檢出研究結(jié)論；如未進行該部分研究，應(yīng)在【檢驗方法的局限性】中進行注明。
11.【注意事項】
應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
11.1如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。
11.2臨床實驗室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。
三、參考文獻
[1]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會.丙型肝炎防治指南（2022年版），《中華傳染病雜志》2023年1月第41卷第1期[J].
[2]國家市場監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊與備案管理辦法:國家市場監(jiān)督管理總局令第48號[Z].
[3]國家市場監(jiān)督管理總局.關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告:國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號[Z].
[4]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心.定性檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則:國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心2022年第36號[Z].
[5]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則:國家藥品監(jiān)督管理局2021年第72號[Z].
來源：中國器審
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