在生物制藥快速發(fā)展的今天，抗體藥物已成為治療腫瘤、自身免疫疾病等重大疾病的重要手段。然而，抗體藥物的研發(fā)并非一蹴而就，其生產(chǎn)工藝的每一次變更，都可能影響藥物的安全性、有效性甚至免疫原性。如何確保變更后的藥物與原產(chǎn)品“質(zhì)量相當(dāng)”？這背后是一套嚴(yán)謹(jǐn)、系統(tǒng)的可比性評(píng)估策略。
表1：比較性評(píng)估類(lèi)別
第一關(guān)：理化屬性比對(duì)
在抗體藥物的研發(fā)與生產(chǎn)過(guò)程中，當(dāng)生產(chǎn)工藝出現(xiàn)變更時(shí)，確保變更前后產(chǎn)品的高度相似性是保障患者用藥安全和療效的關(guān)鍵。
抗體藥物的理化屬性涵蓋多個(gè)關(guān)鍵方面，包括分子量、純度、電荷異質(zhì)性和高級(jí)結(jié)構(gòu)等 ，這些屬性反映了其分子層面的特征。為了精確解析這些屬性，研究人員需借助一系列先進(jìn)的分析技術(shù)。
高效液相色譜（HPLC）是其中的重要手段之一，它能夠根據(jù)不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差異，對(duì)抗體藥物的成分進(jìn)行分離和分析，從而精準(zhǔn)測(cè)定其純度。通過(guò) HPLC 分析，我們可以清晰地了解到藥物中各種成分的含量，判斷是否存在雜質(zhì)以及雜質(zhì)的種類(lèi)和含量是否在可接受范圍內(nèi)。例如，在檢測(cè)某抗體藥物時(shí)，HPLC 圖譜能夠顯示出主峰以及可能存在的雜峰，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)比，就可以確定該藥物的純度是否符合要求。
質(zhì)譜（MS）技術(shù)則憑借其高靈敏度和高分辨率的優(yōu)勢(shì)，在確定抗體藥物的分子量和結(jié)構(gòu)信息方面發(fā)揮著不可或缺的作用。將液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用（LC - MS），更能如虎添翼，獲取藥物與抗體的連接位點(diǎn)、偶聯(lián)聚合度等詳細(xì)信息。比如，在分析抗體 - 藥物偶聯(lián)物（ADC）時(shí)，LC - MS 可以精確地確定藥物與抗體的連接位置，以及每個(gè)抗體分子上連接的藥物數(shù)量，這對(duì)于了解藥物的作用機(jī)制和藥效發(fā)揮至關(guān)重要。
圓二色譜（CD）常用于探測(cè)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，通過(guò)測(cè)量蛋白質(zhì)對(duì)左旋和右旋圓偏振光的吸收差異，從而推斷其 α - 螺旋、β - 折疊等結(jié)構(gòu)的含量和分布情況，為研究抗體藥物的高級(jí)結(jié)構(gòu)提供重要依據(jù)。如果抗體藥物的高級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可能會(huì)影響其與靶點(diǎn)的結(jié)合能力，進(jìn)而影響藥效。
這些技術(shù)對(duì)確保藥物質(zhì)量一致性意義重大。若生產(chǎn)工藝變更后，藥物的理化屬性發(fā)生顯著變化，那么其安全性和有效性可能會(huì)受到威脅。某抗體藥物在生產(chǎn)工藝改進(jìn)后，通過(guò)理化屬性分析發(fā)現(xiàn)其電荷異質(zhì)性超出了正常范圍，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)這導(dǎo)致了藥物與靶點(diǎn)的結(jié)合力下降，從而影響了藥效。因此，只有當(dāng)變更后的產(chǎn)品在理化屬性上與原產(chǎn)品高度一致，通過(guò)這一嚴(yán)格的 “身份認(rèn)證”，才能進(jìn)入后續(xù)的功能驗(yàn)證環(huán)節(jié)，為后續(xù)的研發(fā)和臨床應(yīng)用奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
第二關(guān)：生物學(xué)功能驗(yàn)證
抗體藥物的治療效果，歸根結(jié)底依賴(lài)于其獨(dú)特的生物學(xué)功能， 在這一關(guān)鍵階段，科學(xué)家們主要通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估抗體藥物的各項(xiàng)關(guān)鍵活性，其中結(jié)合能力和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)是最為常見(jiàn)且重要的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型。
以靶向 PD - 1 的抗體為例，驗(yàn)證其與 PD - 1 結(jié)合力很關(guān)鍵。PD - 1 是免疫檢查點(diǎn)蛋白，靶向 PD - 1 的抗體通過(guò)與 PD - 1 結(jié)合阻斷其與配體 PD - L1 作用，激活 T 細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞。科研人員利用表面等離子共振（SPR）技術(shù)測(cè)結(jié)合常數(shù)，其能反映結(jié)合強(qiáng)度，為評(píng)估抗體活性提供依據(jù)，結(jié)合力弱則難以阻斷信號(hào)通路、激活免疫系統(tǒng)。
依賴(lài) ADCC 效應(yīng)的抗體需在細(xì)胞模型中驗(yàn)證殺傷能力。ADCC 效應(yīng)即抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用，抗體 Fab 段與靶細(xì)胞抗原結(jié)合，F(xiàn)c 段與 NK 細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞表面受體結(jié)合，激活 NK 細(xì)胞釋放物質(zhì)致靶細(xì)胞凋亡。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)常用表達(dá)特定抗原的腫瘤細(xì)胞為靶細(xì)胞，與抗體、NK細(xì)胞共培養(yǎng)，通過(guò)鉻 51 釋放法、熒光標(biāo)記檢測(cè)法檢測(cè)靶細(xì)胞死亡情況評(píng)估 ADCC 活性，兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。
生物學(xué)功能驗(yàn)證在篩選有效抗體藥物中起關(guān)鍵作用，體外實(shí)驗(yàn)?zāi)芸焖俸Y選活性良好的抗體藥物，為后續(xù)研究提供支持，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題可及時(shí)調(diào)整策略。如某抗體因結(jié)合力弱、ADCC 活性低，經(jīng)分析是結(jié)構(gòu)問(wèn)題，優(yōu)化后篩選出高活性抗體。只有經(jīng)嚴(yán)格生物學(xué)功能驗(yàn)證，抗體藥物才能進(jìn)入體內(nèi)研究階段。
第三關(guān)：體內(nèi) PK/PD 研究
當(dāng)抗體藥物在理化屬性比對(duì)和生物學(xué)功能驗(yàn)證階段順利通過(guò)后，并不意味著它已經(jīng)完全具備進(jìn)入臨床應(yīng)用的資格。如果在前面的分析中發(fā)現(xiàn)了一些細(xì)微但可能對(duì)藥物療效產(chǎn)生影響的差異，那么就需要進(jìn)入到體內(nèi) PK/PD 研究這一關(guān)鍵環(huán)節(jié)，預(yù)測(cè)其在人體中的表現(xiàn) 。
PK 即藥代動(dòng)力學(xué)，主要研究藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）過(guò)程。藥物吸收是發(fā)揮作用第一步，不同給藥途徑影響吸收速度和程度，如靜脈注射起效快，口服給藥受多種因素影響且可能有首過(guò)效應(yīng)。藥物進(jìn)入血液循環(huán)后分布到全身組織器官，其分布受多種因素制約。代謝和排泄是藥物在體內(nèi)的 “清除” 過(guò)程，代謝主要在肝臟，排泄主要通過(guò)腎臟等途徑，排泄速度影響藥物在體內(nèi)停留時(shí)間和血藥濃度。
PD 即藥效學(xué)，關(guān)注藥物對(duì)機(jī)體的治療作用和不良反應(yīng)，研究藥物劑量與效應(yīng)關(guān)系及作用機(jī)制。藥物與靶點(diǎn)相互作用是藥效學(xué)核心，多數(shù)藥物與特定靶點(diǎn)結(jié)合發(fā)揮作用，結(jié)合有特異性和親和力，藥物與靶點(diǎn)結(jié)合后引發(fā)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生治療效果，但也可能與非靶標(biāo)分子作用產(chǎn)生不良反應(yīng) ，像化療藥物會(huì)損傷正常細(xì)胞引發(fā)副作用。
在實(shí)際研究中，PK 和 PD 并不是孤立的，而是相互關(guān)聯(lián)、相互影響的 。藥物在體內(nèi)的濃度變化會(huì)直接影響其藥效的發(fā)揮，而藥效的產(chǎn)生也可能反過(guò)來(lái)影響藥物的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程 。當(dāng)藥物在體內(nèi)的濃度達(dá)到一定水平時(shí)，才能產(chǎn)生有效的治療效果，但如果藥物濃度過(guò)高，可能會(huì)導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生 。因此，通過(guò) PK/PD 研究，我們可以建立藥物濃度 - 效應(yīng)關(guān)系模型，確定藥物的最佳給藥劑量和給藥間隔，以達(dá)到最佳的治療效果和最小的不良反應(yīng) 。
以治療癌癥的抗體藥物為例，在進(jìn)行體內(nèi) PK/PD 研究時(shí)，科研人員會(huì)給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如小鼠、大鼠或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物）注射變更前后的抗體藥物，然后在不同時(shí)間點(diǎn)采集血液、組織等樣本，通過(guò)各種分析技術(shù)（如液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法等）測(cè)定藥物在體內(nèi)的濃度變化 。同時(shí)，觀察動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)情況、生存率等藥效指標(biāo)，以及是否出現(xiàn)不良反應(yīng) 。通過(guò)對(duì)這些數(shù)據(jù)的分析，建立 PK/PD 模型，從而預(yù)測(cè)藥物在人體中的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特征 。如果在研究中發(fā)現(xiàn)變更后的抗體藥物在體內(nèi)的代謝速度加快，導(dǎo)致血藥濃度降低，進(jìn)而影響了其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果，那么就需要進(jìn)一步優(yōu)化生產(chǎn)工藝或調(diào)整給藥方案，以確保藥物的有效性 。
體內(nèi) PK/PD 研究對(duì)于指導(dǎo)藥物研發(fā)和臨床應(yīng)用具有不可替代的重要作用 。在藥物研發(fā)階段，它可以幫助研究人員優(yōu)化藥物的劑型、給藥途徑和給藥劑量，提高藥物的療效和安全性 。在臨床應(yīng)用中，PK/PD 研究結(jié)果可以為醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案提供依據(jù)，根據(jù)患者的個(gè)體差異（如年齡、體重、肝腎功能等）調(diào)整藥物的使用，以實(shí)現(xiàn)最佳的治療效果 。例如，對(duì)于兒童和老年人，由于其生理功能與成年人存在差異，藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特征也會(huì)有所不同，通過(guò) PK/PD 研究可以確定適合他們的藥物劑量和給藥方式，避免藥物過(guò)量或不足導(dǎo)致的不良反應(yīng)或治療失敗 。
表2：抗體的過(guò)程變化和 PK/PD 可比較性研究實(shí)例
第四關(guān)：臨床安全性與有效性
經(jīng)過(guò)了理化屬性比對(duì)、生物學(xué)功能驗(yàn)證以及體內(nèi) PK/PD 研究的層層考驗(yàn)后，抗體藥物距離成為真正造?；颊叩闹委熓侄嗡坪鮾H一步之遙，但這最后一步，卻是最為關(guān)鍵且嚴(yán)苛的，即臨床安全性與有效性研究，這里堪稱(chēng)藥物的 “終極試煉場(chǎng)” 。
當(dāng)通過(guò)前面的非臨床研究仍無(wú)法確鑿地證明變更前后抗體藥物的可比性時(shí)，開(kāi)展臨床研究就成為了必然選擇。臨床研究直接以人體為研究對(duì)象，能夠最真實(shí)地反映藥物在實(shí)際使用中的療效和安全性，是對(duì)藥物綜合性能的全面檢驗(yàn) 。
臨床研究主要有小規(guī)模橋接試驗(yàn)和上市后監(jiān)測(cè)兩種重要類(lèi)型。小規(guī)模橋接試驗(yàn)通常在藥物研發(fā)關(guān)鍵生產(chǎn)過(guò)程變化時(shí)進(jìn)行，利用原地區(qū)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)，在新地區(qū)或新條件下做小規(guī)模附加試驗(yàn)，驗(yàn)證藥物在新環(huán)境的安全性和有效性。比如國(guó)外研發(fā)的抗體藥物在國(guó)內(nèi)注冊(cè)審批，因人種等差異需做此試驗(yàn)，通過(guò)選特定受試者分組用藥，觀察比較各項(xiàng)指標(biāo)判斷藥物性能是否改變。
上市后監(jiān)測(cè)是藥物獲批上市廣泛使用后，對(duì)其安全性和有效性持續(xù)跟蹤評(píng)估的過(guò)程。臨床試驗(yàn)人數(shù)有限、時(shí)間短，罕見(jiàn)或長(zhǎng)期使用才出現(xiàn)的副作用可能未被發(fā)現(xiàn)，上市后監(jiān)測(cè)可捕捉潛在風(fēng)險(xiǎn)，了解藥品在更廣泛患者群的表現(xiàn)。其采用主動(dòng)監(jiān)測(cè)（患者或醫(yī)療人員主動(dòng)報(bào)告不良事件）和被動(dòng)監(jiān)測(cè)（醫(yī)療機(jī)構(gòu)、患者自發(fā)報(bào)告不良反應(yīng)）等多種方法，結(jié)合電子健康記錄和藥物警戒數(shù)據(jù)庫(kù)提高監(jiān)測(cè)效率與數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，經(jīng)對(duì)多渠道數(shù)據(jù)深入分析識(shí)別潛在風(fēng)險(xiǎn)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)藥物安全隱患。
臨床研究數(shù)據(jù)對(duì)于評(píng)估藥物的安全性和有效性意義重大 。在評(píng)估藥物安全性方面，這些數(shù)據(jù)能夠提供關(guān)于藥物不良反應(yīng)的詳細(xì)信息，包括不良反應(yīng)的類(lèi)型、發(fā)生率、嚴(yán)重程度、發(fā)生時(shí)間等 。通過(guò)對(duì)這些信息的分析，可以判斷藥物的安全性是否在可接受范圍內(nèi)，是否需要采取進(jìn)一步的措施，如修改藥品說(shuō)明書(shū)、調(diào)整用藥劑量、甚至?xí)和；虺肥兴幬?。某抗體藥物在上市后監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)，部分患者出現(xiàn)了嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)，通過(guò)進(jìn)一步調(diào)查和數(shù)據(jù)分析，確定該不良反應(yīng)與藥物的特定成分有關(guān)，監(jiān)管部門(mén)隨即要求藥企修改說(shuō)明書(shū)，增加相關(guān)警示信息，并對(duì)藥物的生產(chǎn)工藝進(jìn)行改進(jìn)，以降低過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn) 。
臨床研究數(shù)據(jù)能直接反映藥物有效性，通過(guò)觀察患者用藥后的癥狀改善、疾病指標(biāo)變化、生存期延長(zhǎng)等指標(biāo)，可判斷藥物是否達(dá)到治療目標(biāo)，對(duì)醫(yī)生、患者、藥企都有重要參考作用，如治療癌癥的抗體藥物，能延長(zhǎng)患者生存期、提高生活質(zhì)量，為醫(yī)生提供治療手段依據(jù)，增加患者對(duì)藥物的信任和接受度，提升藥企競(jìng)爭(zhēng)力。
基于臨床研究數(shù)據(jù)做決策嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)，研究人員和監(jiān)管機(jī)構(gòu)會(huì)綜合考慮多方面因素。先審查數(shù)據(jù)質(zhì)量和可靠性，確保符合科學(xué)規(guī)范；再評(píng)估藥物風(fēng)險(xiǎn) - 效益比，權(quán)衡治療效果和不良反應(yīng)關(guān)系，依此決定藥物是否繼續(xù)使用、擴(kuò)大適用范圍或限制使用、撤市；監(jiān)管機(jī)構(gòu)還會(huì)參考藥物作用機(jī)制、非臨床研究結(jié)果、同類(lèi)藥物情況等信息，做出全面客觀決策。
最后
抗體藥物作為生物醫(yī)藥領(lǐng)域的重要組成部分，其藥效評(píng)估從實(shí)驗(yàn)室到臨床的 “層層把關(guān)” 過(guò)程，是確保藥物質(zhì)量、安全性和有效性的關(guān)鍵。從最初的理化屬性比對(duì)，確保藥物在分子層面的一致性；到生物學(xué)功能驗(yàn)證，檢驗(yàn)其在體外發(fā)揮治療作用的能力；再到體內(nèi) PK/PD 研究，深入了解藥物在生物體內(nèi)的行為和作用機(jī)制；最后到臨床安全性與有效性研究，將藥物置于 “終極試煉場(chǎng)”，在人體中全面檢驗(yàn)其實(shí)際效果和安全性 。每一關(guān)都緊密相連、不可或缺，任何一個(gè)環(huán)節(jié)的疏漏都可能導(dǎo)致藥物研發(fā)的失敗或給患者帶來(lái)潛在風(fēng)險(xiǎn)。
參考：《抗體藥物研發(fā)》，上海交通大學(xué)出版社；公開(kāi)資料整理
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