雞蛋是優(yōu)質(zhì)蛋白的極佳來(lái)源，作為人類(lèi)日常主要食物之一，其含有豐富的維生素、磷脂和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分，被譽(yù)為“理想的營(yíng)養(yǎng)庫(kù)”。近年來(lái)，隨著食品安全問(wèn)題日益受到社會(huì)的關(guān)注，雞蛋中農(nóng)藥殘留問(wèn)題引發(fā)的“毒雞蛋”事件頻頻出現(xiàn)。長(zhǎng)期食用農(nóng)藥超標(biāo)的雞蛋可能引發(fā)健康風(fēng)險(xiǎn)（包括致病、致癌、致畸等），這對(duì)雞蛋中農(nóng)藥殘留監(jiān)管提出了更高要求。雞蛋的農(nóng)藥殘留主要通過(guò)飼料、飼養(yǎng)環(huán)境富集在蛋雞體內(nèi)，最終導(dǎo)致畜禽產(chǎn)品污染。然而，雞蛋中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法較少，且檢測(cè)項(xiàng)目單一，缺少系統(tǒng)性檢測(cè)方法，特別是對(duì)煙堿類(lèi)、雙酰肼類(lèi)、苯甲酰脲類(lèi)等新型殺蟲(chóng)劑；國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中針對(duì)雞蛋中殺蟲(chóng)劑限量的規(guī)定較為有限，需要補(bǔ)充大量檢測(cè)數(shù)據(jù)，為雞蛋中殺蟲(chóng)劑殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供充分依據(jù)。
QuEChERS具有操作簡(jiǎn)便、快速、回收率好、環(huán)境污染小、經(jīng)濟(jì)節(jié)約等特點(diǎn)，通過(guò)吸附劑與樣品中雜質(zhì)的相互作用達(dá)到凈化目的。雞蛋具有高蛋白、高脂肪等特點(diǎn)，基質(zhì)干擾大，選擇有效的 QuEChERS前處理方法尤為重要。在前處理后，常采用氣相色譜法、液相色譜法、氣相色譜- 質(zhì)譜法和液相色譜- 質(zhì)譜法測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥的含量。與其他方法相比，高效液相色譜- 質(zhì)譜法具有要求低、靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，但是存在復(fù)雜樣品基質(zhì)可能產(chǎn)生干擾以及目標(biāo)物含量較低或定性離子缺失/信號(hào)響應(yīng)弱時(shí)可能輸出假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果等缺點(diǎn)。三重四極桿復(fù)合線(xiàn)性離子阱質(zhì)譜法因具有分辨率高、抗干擾能力強(qiáng)等特點(diǎn)而定性能力卓越，利用其多反應(yīng)監(jiān)測(cè)- 信息依賴(lài)性采集- 增強(qiáng)子離子（MRM-IDA-EPI）掃描模式，一次進(jìn)樣即可同時(shí)得到MRM色譜圖和離子阱富集的增強(qiáng)二級(jí)碎片離子，通過(guò)與二級(jí)碎片離子數(shù)據(jù)庫(kù)匹配，有效避免了假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生。本工作通過(guò)優(yōu)化 QuEChERS條件，建立了QuEChERS結(jié)合超高效液相色譜- 三重四極桿復(fù)合線(xiàn)性離子阱質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋中多種新型殺蟲(chóng)劑含量的快速檢測(cè)方法，可為農(nóng)產(chǎn)品中殺蟲(chóng)劑的檢測(cè)提供可靠的技術(shù)支撐。
PART.1、試驗(yàn)方法
1.1 樣品制備
取鮮雞蛋，去殼，充分勻漿，攪拌均勻后放入帶蓋的聚乙烯瓶中冷藏保存，備用。
1.3.2 樣品提取和凈化
稱(chēng)量上述樣品置于離心管中，加入乙腈，再加入無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉，渦旋振蕩，離心取上清液，待凈化。
移取上清液，置于離心管中，加入C18、PSA、GCB和無(wú)水硫酸鎂，渦旋振蕩，離心取上清液過(guò)有機(jī)濾膜，按照儀器工作條件測(cè)定。
1.3.3 數(shù)據(jù)處理
通過(guò)SCIEX Analyst Software軟件對(duì)樣品進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和定性分析，SCIEX OS軟件對(duì)樣品進(jìn)行定量處理，Excel 2016軟件完成數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和繪圖。
PART.2、結(jié)果與討論
2.1 流動(dòng)相的選擇
試驗(yàn)以100μg·L−1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液為研究對(duì)象，比較了分別以甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙酸銨溶液、乙腈-乙酸銨溶液體系為流動(dòng)相時(shí)各目標(biāo)物的測(cè)定效果。結(jié)果顯示，以乙腈-水體系為流動(dòng)相時(shí)，目標(biāo)物色譜峰峰形及定量離子響應(yīng)值普遍優(yōu)于其他3組流動(dòng)相的。
為增強(qiáng)目標(biāo)物的電離效率，向乙腈- 水體系中加入體積分?jǐn)?shù)為0.05％，0.1％，0.2％的甲酸，發(fā)現(xiàn)隨著甲酸體積分?jǐn)?shù)的增大，氟蟲(chóng)脲和氟啶脲定量離子響應(yīng)值升高，而其余目標(biāo)物定量離子響應(yīng)值均逐漸降低。因此，試驗(yàn)選擇乙腈-水體系為流動(dòng)相。
以乙腈-水體系為流動(dòng)相，試驗(yàn)進(jìn)一步優(yōu)化了流動(dòng)相的梯度洗脫程序，發(fā)現(xiàn)以梯度洗脫程序分離時(shí)，各目標(biāo)物在15min內(nèi)可得到較好的色譜分離效果，總離子流色譜圖見(jiàn)圖1。
2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化
將100μg·L−1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液通過(guò)蠕動(dòng)泵直接注入質(zhì)譜儀，根據(jù)34種殺蟲(chóng)劑的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，采用ESI＋、ESI−模式電離，在全掃描（Q1 Scan）模式下確定各目標(biāo)物的最佳母離子，再對(duì)母離子進(jìn)行子離子掃描（Product Ion Scan），選擇兩個(gè)響應(yīng)值高且干擾小的子離子作為定性、定量離子（特征子離子），在MRM模式下優(yōu)化去簇電壓、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)?；谏鲜鲑|(zhì)譜條件，采用 MRM-IDA-EPI 掃描模式，設(shè)置IDA觸發(fā)閾值（5000cps），在 20，35，50V碰撞能量下對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行掃描，得到各目標(biāo)物的二級(jí)質(zhì)譜圖，并建立含有特征子離子及其豐度等信息的標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜庫(kù)；當(dāng)采集的信號(hào)強(qiáng)度超過(guò)IDA觸發(fā)閾值時(shí)，系統(tǒng)自動(dòng)切換到離子阱模式并采集EPI碎片質(zhì)譜，從而確保定量結(jié)果準(zhǔn)確，有效降低假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果產(chǎn)生的概率。
2.3 凈化劑的選擇
根據(jù)雞蛋高蛋白、高脂肪、高含水量的特點(diǎn)，選擇PSA、C18、GCB和無(wú)水硫酸鎂為凈化劑。其中，PSA可以去除雞蛋中極性脂肪酸、脂類(lèi)等干擾物，C18可以去除長(zhǎng)鏈脂肪等非極性干擾物，GCB可以去除色素、類(lèi)固醇等干擾物，無(wú)水硫酸鎂可以有效去除水分。
稱(chēng)取空白樣品，按照試驗(yàn)方法制備空白樣品提取液，作為稀釋介質(zhì)配制25μg·L−1基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于分別含有0，50，200，400，600，800mgC18的凈化管中，凈化后計(jì)算各目標(biāo)物的回收率。結(jié)果顯示：當(dāng)C18用量不大于200mg時(shí)，各目標(biāo)物的回收率均在 70.0％～120％內(nèi)；當(dāng)C18用量不小于400 mg 時(shí)，氟啶脲回收率明顯下降，小于60.0％，因此試驗(yàn)選擇的C18用量為 200mg。固定C18用量為200mg，進(jìn)一步比較了不同PSA用量（0，200，400，600，800，1000mg）下上述基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各目標(biāo)物的回收率。結(jié)果顯示：當(dāng)PSA用量不大于600mg時(shí)，各目標(biāo)物的回收率在80.0％～120％內(nèi)；當(dāng)PSA用量為不小于800mg時(shí)，吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒、氯蟲(chóng)酰胺、噻蟲(chóng)嗪、噻蟲(chóng)胺、噻蟲(chóng)啉、烯啶蟲(chóng)胺、吡蚜酮的回收率明顯下降（30.0％～70.0％）。綜合比較后試驗(yàn)選擇的PSA用量為600mg。固定C18用量為 200mg，PSA用量為600mg，進(jìn)一步比較了不同GCB用量（0，5，10，20，30，40mg）下上述基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各目標(biāo)物的回收率。結(jié)果顯示：當(dāng)GCB用量不大于10mg時(shí)，各目標(biāo)物的回收率在75.0％～120％內(nèi)；當(dāng)GCB用量不小于20mg時(shí)，除蟲(chóng)脲、氟苯脲、滅幼脲回收率明顯下降，在26.6％～66.3％內(nèi)。綜合比較后試驗(yàn)選擇的GCB用量為 10mg。固定C18用量為200mg，PSA用量為600mg，GCB用量為10mg，進(jìn)一步比較了不同無(wú)水硫酸鎂用量（0，200，400，600，800，1000mg）下上述基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各目標(biāo)物的回收率。結(jié)果顯示，當(dāng)無(wú)水硫酸鎂用量為 800mg時(shí)，各目標(biāo)物的回收率整體較大（基本在80.0％～110％內(nèi)），因此試驗(yàn)選擇的無(wú)水硫酸鎂用量為800mg。
2.4 基質(zhì)效應(yīng)
基質(zhì)效應(yīng)（ME）是影響結(jié)果準(zhǔn)確度的重要因素之一。分別以空白樣品溶液和甲醇配制基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列和混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，按照儀器工作條件測(cè)定并分別繪制工作曲線(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，基于工作曲線(xiàn)斜率k1和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)斜率k2，以（k1/k2−1）×100％計(jì)算ME值，結(jié)果見(jiàn)圖2。當(dāng)ME值大于20％時(shí)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，在−20％～20％內(nèi)時(shí)為弱基質(zhì)效應(yīng)，可以忽略，小于−20％時(shí)為基質(zhì)抑制效應(yīng)。
結(jié)果表明，有17種目標(biāo)物表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，7種目標(biāo)物表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。為降低基質(zhì)效應(yīng)，試驗(yàn)采用基質(zhì)匹配法進(jìn)行定量分析。
2.5 工作曲線(xiàn)、檢出限和測(cè)定下限
按照儀器工作條件測(cè)定基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，以各目標(biāo)物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)繪制工作曲線(xiàn)，相關(guān)系數(shù)不小于0.9950，線(xiàn)性范圍如表2所示。
表1 線(xiàn)性參數(shù)、檢出限和測(cè)定下限
以不小于 3，10倍信噪比對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度作為檢出限和測(cè)定下限，結(jié)果見(jiàn)表1。
2.6 精密度和回收試驗(yàn)
按照試驗(yàn)方法對(duì)空白樣品進(jìn)行低、中、高等3個(gè)濃度水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算回收率和測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果如表2所示。
表2 精密度和回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）
結(jié)果顯示，各目標(biāo)物的回收率為71.9％～119％，測(cè)定值的RSD為1.3％～14％，表明該方法的準(zhǔn)確度和精密度較好，滿(mǎn)足試驗(yàn)要求。
2.7 樣品分析
隨機(jī)抽取90批樣品，按照試驗(yàn)方法測(cè)定，在1批樣品中同時(shí)檢測(cè)出氟蟲(chóng)雙酰胺、氟鈴脲、氟苯脲、環(huán)溴蟲(chóng)酰胺，檢出量分別為24.3，12.6，9.54，25.8μg·kg−1。將陽(yáng)性樣品中這4個(gè)目標(biāo)物的二級(jí)質(zhì)譜信息、MRM色譜信息與標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜庫(kù)進(jìn)行比對(duì)（圖3），發(fā)現(xiàn)檢出的目標(biāo)物與標(biāo)準(zhǔn)品的匹配度分別為 73.532％，85.659％，78.168％，93.822％，說(shuō)明本方法的定性結(jié)果較為準(zhǔn)確。
PART.3、試驗(yàn)結(jié)論
研究人員基于QuEChERS結(jié)合超高效液相色譜-三重四極桿復(fù)合線(xiàn)性離子阱質(zhì)譜法，構(gòu)建了一種針對(duì)雞蛋中34種新型殺蟲(chóng)劑的快速檢測(cè)方法。該方法具備操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)高效、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，尤其適用于大批量樣品的快速篩查，能夠?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)提供強(qiáng)有力的技術(shù)支撐，對(duì)于加強(qiáng)農(nóng)藥使用管控、科學(xué)實(shí)施農(nóng)藥殘留監(jiān)測(cè)以及保障公眾飲食安全具有重要現(xiàn)實(shí)意義。
作者：羅景陽(yáng)1，王巖松1，李巧蓮1，關(guān)健2，宣彤3
單位：1. 沈陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所；
2. 遼寧省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證中心；
3. 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院 公共衛(wèi)生學(xué)院
來(lái)源：《理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)》2025年第9期
京公網(wǎng)安備11010802046783號(hào)
