PD-L1抗體試劑及檢測試劑盒注冊審查指導原則
本指導原則旨在指導注冊申請人對PD-L1抗體試劑及檢測試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門進行技術審評提供參考。
本指導原則是對基于免疫組織化學方法的PD-L1抗體試劑及檢測試劑盒的一般要求，注冊申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。
本指導原則是對注冊申請人和技術審評人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究和驗證資料，相關人員應在遵循法規(guī)的前提下使用指導原則。
本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善以及科學技術的不斷發(fā)展，相關內容也將適時進行調整。
一、適用范圍
本指導原則適用于利用免疫組織化學法，對病理組織切片中PD-L1進行檢測的試劑。此類試劑為特異性單克隆或多克隆抗體，或抗體與顯色系統(tǒng)、對照試劑、質控片（如有）及其它輔助試劑一同包裝成試劑盒形式的檢測試劑，用于免疫檢查點抑制劑的伴隨診斷或補充診斷。
對于采用其他方法學的PD-L1檢測試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內容不夠全面，申請人應參照本指導原則，根據產品特性對適用部分進行評價，并補充其他的評價資料。
本指導原則適用于PD-L1抗體試劑或PD-L1檢測試劑盒注冊申請和變更注冊申請的情形。本指導原則僅針對注冊申報資料中的部分內容進行撰寫，其他未盡事宜應當符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》等相關法規(guī)要求，同時建議參考《定性檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導原則》等適用的技術文件。
二、注冊審查要點
（一）監(jiān)管信息
1.產品名稱及分類編碼
產品名稱應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關法規(guī)的要求，如PD-L1抗體試劑（免疫組織化學法）和PD-L1檢測試劑盒（免疫組織化學法）。根據《體外診斷試劑分類規(guī)則》（國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第129號），該產品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。
2.其他信息還包括產品列表、關聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機構的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。
（二）綜述資料
綜述資料主要包括概述、產品描述、預期用途、申報產品上市歷史及其他需說明的內容。其中，預期用途中應描述用于免疫檢查點抑制劑的伴隨診斷或補充診斷；產品描述中應詳述檢測原理、產品主要研究結果的總結和評價、參加國內外質控機構的質控活動情況、與同類和/或前代產品的比較等。
建議以列表的方式進行與同類和/或前代產品的比較分析，比較境內外已批準上市試劑和注冊申報產品的克隆號、抗體的性質（如單克隆抗體，IgG1型）、適用的腫瘤組織類型、預期用途、判讀方式、產品主要性能等方面的主要區(qū)別。
（三）非臨床資料
1.產品技術要求
產品技術要求應主要包括以下性能指標：外觀、符合性、批內重復性、批間重復性等。其中“符合性”和“重復性”指標，應明確采用包含不同表達水平的預期適用腫瘤組織類型組織片進行檢測。“重復性”指標建議每種不同表達水平的病理組織類型切片不少于3張。申報試劑如有適用的國家標準、行業(yè)標準，則產品技術要求不得低于上述標準要求。另外，產品技術要求中應以附錄形式明確主要原材料及生產工藝的要求。
2.分析性能研究
注冊申請人應采用在符合質量管理體系的環(huán)境下生產的試劑盒進行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、試驗數據、統(tǒng)計分析等詳細資料。
分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本類型、組織類型、細胞片的制備與稀釋方式（如適用）、表達水平及確定方法等。分析性能評估用樣本應為組織切片、組織芯片，應提供商業(yè)化組織芯片相關信息（如生產商、貨號等）。
2.1樣本穩(wěn)定性
此部分應至少包括所有適用的組織類型切片在不同儲存條件下的實時穩(wěn)定性研究，研究樣本應包含不同表達水平PD-L1陽性樣本和陰性樣本。研究所用切片的制備應采用與說明書一致的方法，如切片的保存溫度范圍覆蓋冷藏和室溫，應分別進行穩(wěn)定性研究，其中室溫研究應在聲稱的最高溫度條件下進行。
申請人可通過提交文獻或進行實時穩(wěn)定性研究的方式，支持說明書中蠟塊穩(wěn)定性的聲稱。
2.2免疫反應性
2.2.1正常組織：對30種正常人體組織（見表1），每種組織類型不少于3例，進行特異性評價，同時對著色位置及染色特點進行描述。
表1 正常組織列表
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中樞神經系統(tǒng)
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腦、大腦（灰質與白質神經元、膠質等）
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腦、小腦
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內分泌系統(tǒng)
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腎上腺（皮質與髓質）
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卵巢
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胰腺（胰島與外分泌胰腺）
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甲狀旁腺
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垂體（腺垂體與神經垂體）
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睪丸
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甲狀腺（濾泡上皮、濾泡旁細胞、膠體等）
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乳 腺
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乳腺（乳腺小葉、乳腺管、肌上皮細胞等）
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造血組織
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脾
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扁桃體
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胸腺（幼兒）
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骨髓（淋巴細胞、單核細胞/巨噬細胞、粒細胞、紅系祖細胞、巨核細胞、肥大細胞、破骨細胞、成骨細胞）
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呼吸系統(tǒng)
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肺（支氣管、細支氣管、肺泡等）
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心 血 管
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心臟
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消化系統(tǒng)
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食管
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胃
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小腸（回腸、空腸或十二指腸）
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結直腸
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肝臟（門靜脈、肝細胞等）
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唾液腺
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泌尿生殖系統(tǒng)
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腎
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前列腺
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子宮（宮體、宮頸）
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膀胱
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骨骼肌肉
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骨骼肌
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皮 膚
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皮膚 （表皮、 附件、真皮）
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外周神經系統(tǒng)
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外周神經
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間皮細胞
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胸壁、腹壁、心包膜或胃腸、心臟與/或肺樣本表面內層細胞
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2.2.2非正常組織：對相關良性、惡性病變組織（示例見表2）進行特異性評價。如有采用申報產品為試驗材料進行研究的相關文獻資料，也可提交文獻資料作為抗體試劑或檢測試劑盒與非正常組織的免疫反應性的支持資料。
表2 非正常組織列表
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脊索瘤
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胚胎瘤
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惡性室管膜瘤
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膠質母細胞瘤
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肝母細胞瘤
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肝細胞癌
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胰島細胞瘤
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間質瘤
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平滑肌肉瘤
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淋巴瘤
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淋巴瘤（間變性大細胞、彌漫B細胞、霍奇金和非霍奇金）
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髓母細胞瘤
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髓樣癌
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黑色素瘤
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腦膜瘤
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間皮瘤
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神經母細胞瘤
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纖維神經瘤
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骨肉瘤
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嗜鉻細胞瘤
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原始神經外胚層
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腎腫瘤（乳頭狀、透明細胞）
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橫紋肌肉瘤
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精原細胞瘤
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印戒細胞癌
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鱗狀細胞癌（宮頸、頭頸、肺等）
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滑膜肉瘤
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胸腺瘤
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過渡細胞癌
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腺癌（乳腺、胃、結直腸等）
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腎上腺皮質癌
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星形細胞癌
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基底細胞癌
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軟骨肉瘤
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2.3特異性
2.3.1交叉反應研究
應進行PD-L1與PD-L2的交叉反應研究，可利用免疫印跡法、免疫組織化學方法對表達不同蛋白的細胞/組織檢測，驗證抗體的特異性。也可利用其它合理的方法進行交叉反應研究。
2.3.2特異性識別研究
采用免疫印跡法或酶聯(lián)免疫法等方法驗證檢測試劑可特異性檢測PD-L1的性能。通過添加PD-L1抗原進行檢測或檢測PD-L1基因敲除腫瘤細胞等方法，驗證檢測試劑的特異性。
2.4精密度
精密度研究應采用隨機盲法進行，樣本應為消除識別信息的預期樣本（未染色樣本），包括陰性、陽性及一定數量陽性判斷值附近的陰性和陽性樣本（建議合計不少于總樣本量的10%），研究數據應包含評分結果及著色位置，采用合理的統(tǒng)計方法（如Wilson Score法）進行判讀一致性評價。如陰性一致率百分比（Negative Percent Agreement，NPA）、陽性一致率百分比（Positive Percent Agreement，PPA）、總體一致率（Overall Percent Agreement, OPA）及雙側95%置信區(qū)間。研究應制定適當的接受標準，建議一致率95%置信區(qū)間下限均不低于85%。
2.4.1內部重復性
2.4.1.1檢測內精密度：對連續(xù)切片的預期組織類型樣本，進行檢測重復性研究。
2.4.1.2檢測間精密度
對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，包括不同批次間（不少于3批次）、不同儀器間、日間、操作者間和閱片者間（不少于3人）。同一閱片者兩次閱片之間應設置合理的記憶清除期（脫敏期），此段時間一般不少于兩周。
2.4.2外部重復性
在至少3個外部獨立檢測實驗室進行研究，研究應包含對非連續(xù)日間、不同閱片者間、不同外部實驗室間的評價。
2.5靈敏度
研究對不同分期、預期組織類型樣本的檢出能力。研究樣本應包含不同表達水平（如：0-100%）和染色強度（如適用），并計算所有樣本檢測的陽性率和不同染色強度的陽性樣本比例（如適用）。
2.6提供企業(yè)內部質控片驗證資料：根據主要原材料研究資料中的企業(yè)內部質控片設置情況，采用三批產品對企業(yè)內部質控片進行檢驗并提供詳細的試驗數據。
2.7反應體系
2.7.1樣本采集和處理
簡述樣本的固定、包埋的要求，包括但不限于固定劑的選擇、固定時間和溫度要求、包埋條件等。上述條件要求可引用規(guī)范性操作手冊，也可通過研究確定。
建議申請人對切片厚度、載玻片的要求進行研究，或提交相關文獻資料，確定適用的切片厚度范圍和載玻片類型。
2.7.2抗原修復
詳述抗原修復方法和參數條件，包括方法、時間、溫度、pH值的確定依據。如抗原修復液可重復使用，應提交重復使用次數限定的研究資料。
2.7.3最適抗體滴度/濃度確定的研究。
2.7.4檢測體系反應條件確定
申請人應考慮脫蠟水化、酶阻斷、抗體孵育、顯色、復染等步驟對產品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。常規(guī)免疫組織化學檢測步驟的確定，可引用行業(yè)和企業(yè)內部規(guī)范性操作手冊或文獻，但應對確定后的檢測步驟進行性能驗證。
2.7.5質量控制
申報產品應建立可有效監(jiān)測染色過程的質量控制方法，明確推薦用作質控的組織類型和制備方法，提交染色結果可接受標準確定的研究資料。明確同型對照試劑染色結果的可接受標準，并提交研究資料。
3.穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、運輸穩(wěn)定性、開瓶（開封）穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性和稀釋穩(wěn)定性（如適用）研究，注冊申請人可根據實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實施方案、詳細的研究數據以及結論。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批產品在實際儲存條件下保存至聲稱有效期后的研究資料。
4.陽性判斷值研究
此類產品的陽性判斷值，部分來源于藥物臨床試驗的療效數據。典型的陽性判斷值研究包含建立和驗證兩部分，兩部分研究樣本應相互獨立。
建立陽性判斷值使用的樣本應滿足藥物臨床試驗設計并考慮到不同的地理區(qū)域、民族（種族）、性別、年齡、不同病理分期等因素?？刹捎没谠u價指標如客觀緩解率（ORR）的最佳總體反應繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve, ROC）的分析方式，綜合其他臨床應用考量，來選擇確定合理的陽性判斷值。提交不同評分方法（如TPS、CPS）選擇的研究資料。
申請人也可參考既往經驗或已上市同類產品，通過ROC等分析方式來擬定申報產品的陽性判斷值，該陽性判斷值應與參考的同類產品的陽性判斷值一致。參考建立的陽性判斷值招募受試者直接進入藥物主要療效臨床試驗，并對陽性判斷值進行驗證（如適用）。
5.其他資料
5.1主要原材料研究資料
此產品的主要原材料包括第一抗體、顯色系統(tǒng)、封閉液、同型對照抗體、質控片、企業(yè)內部質控片等。應提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質量控制標準等相關研究資料?？紤]到產品注冊單元的不同，申請人應根據產品注冊單元的實際情況，遞交相應原材料資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應提供其詳細制備過程；如主要原材料源于外購，應提供資料包括：選擇該原材料的依據及對比篩選試驗資料、生產商提供的質量標準、出廠檢驗報告，以及該原材料到貨后的質量檢驗資料，供應商應固定，不得隨意更換。
5.1.1第一抗體
5.1.1.1克隆選擇研究
應提交克隆篩選試驗資料，包括試驗方法、篩選原則、與公認抗體的比較研究等。應明確抗體所針對的抗原表位、抗體制備所用免疫原。
5.1.1.2抗體性質鑒定
應提交抗體性質鑒定研究資料，包括：抗體的特異性、親和常數及效價、抗體的類型及亞型等的驗證。提供抗體識別位點的驗證。申請人可通過放射性免疫分析法、雙向瓊脂擴散法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫印跡法、凝膠電泳等方法進行研究。
5.1.2酶標第二抗體系統(tǒng)的選擇及驗證
檢測試劑盒中的第二抗體系統(tǒng)一般均為外購，應詳述酶標第二抗體系統(tǒng)的確定依據，明確外購方名稱，提交外購方出具的檢驗證書，詳述申請人對酶標第二抗體系統(tǒng)相關主要原材料的技術指標。
5.1.3質控片（如適用）
建議在試劑盒中設置質控片，質控片可以為已知表達的陰、陽性細胞（系）或組織樣本。應提交質控片細胞或組織類型選擇的依據、質控片PD-L1表達情況確定的研究資料和質控片染色接受標準確定資料。
5.1.4同型對照抗體（如適用）
為有效識別檢測過程中可能出現(xiàn)的非特異性染色，建議試劑盒（配套）包含同型對照抗體。簡述同型抗體的動物源性、亞型、濃度、純度等基本信息。
5.1.5封閉液
封閉液應能夠封閉非特異結合、內源性酶活性或內源性生物素等。
5.1.6其他主要原輔料的選擇及驗證資料，如牛血清白蛋白、抗原修復液、抗菌劑等。
該類主要原輔料一般均為外購，應說明有生物活性的原輔料的外購方名稱，提交外購方出具的檢驗證書，詳述申請人對每一種原輔料的質量要求。
5.1.7企業(yè)內部質控片
詳述企業(yè)內部質控片的組成，包括組織類型、例數和表達水平。應提供對企業(yè)內部質控片組織類型和表達水平的確定依據，建議采用臨床上普遍認為質量較好的同類試劑進行確認。企業(yè)內部質控片，應包含所有適用的腫瘤組織類型、不同表達水平和染色強度。
（四）臨床評價資料
該類試劑應通過臨床試驗路徑進行臨床評價，臨床試驗包括產品臨床檢測性能研究和臨床意義研究兩部分。臨床試驗應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《醫(yī)療器械臨床試驗質量管理規(guī)范》和《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，如相關法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應符合更新后的要求。下面僅說明該類產品臨床試驗中應關注的重點問題。
1.臨床檢測性能研究
1.1產品臨床試驗結果重現(xiàn)性研究
基于免疫組化法的PD-L1檢測試劑操作程序和結果判讀較為復雜，該類檢測試劑臨床應用的重復性是產品重要的臨床性能，產品臨床試驗應按照《PD-L1檢測試劑臨床試驗—結果重現(xiàn)性研究注冊審查指導原則》要求開展結果重現(xiàn)性研究。
1.2與已上市同類產品的對比試驗
如原研伴隨診斷試劑在境內已經上市，針對該藥物的非原研PD-L1檢測試劑，應開展試驗體外診斷試劑與原研伴隨診斷試劑的一致性比對，確認產品臨床檢測性能。
1.2.1臨床試驗機構
應選擇具備相應條件且按照規(guī)定備案的醫(yī)療器械臨床試驗機構開展臨床試驗。臨床試驗機構數量應不少于3家，且具有免疫組織化學相關專業(yè)優(yōu)勢，試驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個試驗中，試驗體外診斷試劑和對比方法均應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數據的準確性及可重復性。
1.2.2臨床試驗方法
臨床試驗應選擇已上市的原研伴隨診斷試劑作為對比試劑，評價申報產品與原研伴隨診斷試劑檢測結果的一致性。
1.2.3臨床試驗受試人群的選擇
臨床試驗的受試人群應來自產品的預期適用人群。如待評價產品PD-L1檢測試劑盒預期用途為定性檢測中性福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）的食管鱗狀細胞癌（ESCC）組織中的PD-L1蛋白表達，則入組病例應為臨床明確診斷為食管鱗狀細胞癌的病例。
為了更加科學的評價產品性能，臨床試驗應入組部分PD-L1表達陽性閾值（用于指導抗腫瘤藥物使用的閾值）臨近范圍內病例。
1.2.4.臨床試驗樣本類型
PD-L1檢測試劑臨床試驗研究的樣本類型為中性福爾馬林固定石蠟包埋的病理組織樣本（FFPE樣本）。臨床樣本的采集建議按照相關實驗室檢測技術規(guī)范要求執(zhí)行。
1.2.5臨床試驗樣本量
臨床試驗主要評價指標為試驗體外診斷試劑與原研伴隨診斷試劑檢測結果的一致性。臨床試驗陽性樣本和陰性樣本數量應分別滿足統(tǒng)計學要求，可采用目標值法公式分別估算最低陽性和陰性樣本例數。
樣本量估算公式如下：
公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標準正態(tài)分布的分數位，P0為評價指標的臨床可接受標準，PT為申報產品評價指標預期值。
其中陽性符合率和陰性符合率的臨床可接受標準（P0）建議不低于85%。臨床試驗結果中，相關評價指標的95%置信區(qū)間下限應不低于預設的臨床可接受標準。
1.2.6臨床試驗結果的統(tǒng)計分析
臨床試驗結果一般以四格表的形式進行總結，并據此計算試驗體外診斷試劑與對比方法的陽性符合率、陰性符合率、總符合率及其95%置信區(qū)間。
臨床試驗建議對不同染色強度或不同評分的樣本數量進行描述性統(tǒng)計分析，產品臨床試驗入組樣本應涵蓋不同的染色強度或不同評分。
2.臨床意義研究
該類產品臨床意義包括伴隨診斷和補充診斷兩種。本文重點介紹伴隨診斷臨床意義的研究，該部分研究應滿足《與抗腫瘤藥物同步研發(fā)的原研伴隨診斷試劑臨床試驗注冊審查指導原則》和《抗腫瘤藥物的非原研伴隨診斷試劑臨床試驗注冊審查指導原則》要求。原研伴隨診斷試劑與非原研伴隨診斷試劑臨床意義的研究存在差異，以下進行分別介紹。關于補充診斷臨床意義的研究建議參照伴隨診斷試劑臨床意義研究。
2.1原研伴隨診斷試劑
原研伴隨診斷試劑為參與藥物臨床試驗的伴隨診斷試劑，包括直接參與藥物臨床試驗或與藥物臨床試驗中所用CTA（Clinical Trial Assay,以下簡稱“CTA”）進行橋接試驗。針對原研伴隨診斷試劑，藥物臨床試驗作為其伴隨診斷臨床意義的支持性證據，相關臨床試驗資料應滿足《與抗腫瘤藥物同步研發(fā)的原研伴隨診斷試劑臨床試驗注冊審查指導原則》要求。以下僅針對PD-L1檢測試劑產品特點，對該類產品臨床試驗需特別關注的問題進行闡述。
2.1.1關于原研PD-L1檢測試劑在藥物臨床試驗中的伴隨診斷作用，建議在藥物臨床試驗方案及報告中明確，如作為受試者入選標準，或作為后續(xù)病例不同PD-L1表達狀態(tài)的人群藥效學分析。關于PD-L1檢測，可根據藥物臨床試驗方案的要求，使用前瞻性收集的樣本或使用留存樣本進行檢測。
2.1.2 支持原研PD-L1檢測試劑臨床意義的藥物臨床試驗應包括相關抗腫瘤藥物療效的全部關鍵性臨床試驗。如支持藥物上市的臨床試驗為境內與境外開展的臨床試驗，則原研伴隨診斷試劑的臨床試驗應包括境內與境外開展的臨床試驗，僅境內臨床試驗不足以支持產品上市。
2.1.3藥物臨床試驗方案或報告中應明確伴隨診斷試劑的基本信息及配套使用試劑、適用機型信息，根據方案或報告中提供的伴隨診斷試劑信息應能夠對應至申報的伴隨診斷試劑。臨床試驗資料應明確申報產品在藥物臨床試驗過程中的判讀方法及陽性判斷值，上述陽性判斷值應與申報產品臨床前研究及結果重現(xiàn)性研究所用陽性判斷值一致。
2.2非原研伴隨診斷試劑
針對非原研伴隨診斷試劑，可采用橋接試驗或已上市抗腫瘤藥物療效的觀察性研究兩種臨床評價路徑確認其伴隨診斷臨床意義。相關臨床試驗資料應滿足《抗腫瘤藥物的非原研伴隨診斷試劑臨床試驗注冊審查指導原則》要求。以下僅針對PD-L1檢測試劑產品特點，對該類產品臨床試驗需特別關注的問題進行闡述。
2.2.1橋接試驗
若采用橋接試驗確認其伴隨診斷臨床意義，在研究過程中應嚴格控制偏倚，因該類產品臨床試驗所用樣本為福爾馬林固定石蠟包埋樣本，臨床試驗中樣本穩(wěn)定性應滿足試驗體外診斷試劑要求，應盡量控制試驗體外診斷試劑與原研伴隨診斷試劑（如涉及）所用樣本的差異，應不對臨床試驗產生顯著影響。臨床試驗應嚴格按照申報產品及原研伴隨診斷試劑（如涉及）說明書進行操作。如納入了非藥物臨床試驗的病例，則該部分病例的入組標準應與藥物臨床試驗保持一致。申報產品的檢測應滿足盲法的原則。
2.2.2已上市抗腫瘤藥物療效的觀察性研究
針對非原研PD-L1檢測試劑，如無法通過橋接試驗確認其伴隨診斷臨床意義，亦可在完成臨床檢測性能研究的基礎上，在不少于3家臨床試驗機構進行已上市抗腫瘤藥物療效的觀察性研究，證明其臨床意義。該臨床試驗過程中申報產品的檢測結果不能影響受試者正常的診療流程。
2.2.2.1入組人群
臨床試驗入組人群應為原研伴隨診斷試劑適用人群，應明確病例的入選與排除標準，臨床試驗入組的人群應盡量接近申報產品臨床應用真實情況。臨床試驗應注意入組病例的用藥情況，如單藥治療或與化療藥物聯(lián)合治療等，臨床試驗中入組病例的用藥情況應與原研伴隨診斷試劑批準的用藥情況保持一致。
2.2.2.2臨床試驗藥效學評價
抗腫瘤藥物療效評價有多個評價指標，如客觀緩解率（ORR）、無進展生存期（PFS）及總生存期（OS）等。臨床試驗應選擇合理的評價指標，并提供充分的依據?？鼓[瘤藥物療效評價指標的選擇，可參考相關抗腫瘤藥物臨床試驗主要評價指標。
2.2.2.3樣本量估算
已上市抗腫瘤藥物療效的觀察性研究臨床評價目的包括申報產品與原研伴隨診斷試劑篩選人群的藥物療效比較，基于此目的，建議選擇合理的統(tǒng)計學假設檢驗類型，進而完成相應的樣本量估算。針對不同的適應證，建議針對相應的統(tǒng)計學檢驗假設設置合理的檢驗界值。該試驗樣本量估算過程中，可參考相應原研伴隨診斷試劑參與的藥物臨床試驗樣本量。
2.2.2.4統(tǒng)計分析
臨床試驗的統(tǒng)計分析主要分為三個方面：病例人口學及臨床特征基線分析、申報產品與原研伴隨診斷試劑的一致性分析、藥物療效分析。藥物療效分析的結果應表明申報產品所選擇人群藥物療效滿足臨床需求。
3.補充診斷產品相關考慮
產品預期用途為補充診斷的PD-L1檢測試劑，其臨床試驗建議參考伴隨診斷用途研究的臨床試驗設計。針對提交藥物臨床試驗資料作為產品補充診斷臨床意義的，應在藥物臨床試驗報告或相關文件中針對不同PD-L1的人群進行藥效學分層分析，分層分析的結果應支持產品補充診斷的臨床意義。
4.接受境外臨床試驗的考慮
針對產品臨床檢測性能研究部分，基于境內外相關產品臨床使用環(huán)境及人員的差異，不能接受境外臨床試驗數據。
針對伴隨診斷試劑臨床意義研究，如相關抗腫瘤藥物接受境外臨床試驗數據，且有證據證明境外人群PD-L1表達及相關人群抗腫瘤藥物療效無顯著差異的前提下，原研伴隨診斷試劑及非原研伴隨診斷試劑的伴隨診斷臨床意義研究可接受境外臨床試驗數據。
（五）產品說明書和標簽樣稿
產品說明書格式應滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求。產品說明書的所有內容均應與注冊申請人提交的注冊申報資料的相關研究結果保持一致。如某些內容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關信息。
1.【預期用途】
應至少包括以下內容：
1.1試劑盒用于體外檢測中性福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）的xxxx組織中的PD-L1蛋白表達。輔助鑒別可使用xxx藥物治療的xxx患者，用作xxx藥物的伴隨診斷。如申報產品為補充診斷預期用途，應在說明書中明確檢測結果可能提示XXX藥物的療效。
1.2 PD-L1陽性表達判讀規(guī)則（TPS、CPS等）。
1.3簡單介紹PD-L1的生物學特征，如基本結構和信號轉導途徑。
1.4簡單介紹PD-L1檢測的臨床用途和藥物臨床試驗相關內容。
1.5明確說明對任何陽性或陰性結果的解讀，應由病理醫(yī)生結合病理形態(tài)學、臨床表現(xiàn)及其它檢測方法進行，不作為單獨的診斷指標。
2.【檢測原理】
簡述免疫組織化學的基本原理，并對申報試劑的抗原修復方法、第一抗體、放大系統(tǒng)、顯色系統(tǒng)及結果觀察等進行簡要介紹。
3.【主要組成成分】
3.1說明試劑盒包含組分的名稱、數量、比例或濃度等信息；質控片（如有）的組織名稱。
3.2對檢測中使用的抗體信息進行簡單介紹，包括抗體的克隆性質（單克隆或多克?。⒖贵w的類型（如IgG1)、抗體的種屬性、克隆號、抗體制備形式（如細胞培養(yǎng)上清液）、免疫源。
3.3試劑盒中不包含但對該項檢測必需的組份，企業(yè)應列出相關試劑的名稱、貨號、注冊證號/備案號及其他相關信息。
4.【儲存條件及有效期】
對試劑的儲存條件、有效期、開封穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性（如適用）和凍融次數限制等信息做詳細介紹。
5.【樣本要求】
重點明確以下內容：
5.1應明確對適用樣本的取材、固定、包埋的具體要求。
5.2明確樣本的穩(wěn)定性。
6.【檢測方法】
詳細說明操作的各個步驟：
6.1明確檢測需要的儀器、設備。如預處理儀、染色儀等。
6.2試劑配制方法、注意事項，試劑開封、配制后使用方法及注意事項等。
6.3手工操作應詳述脫蠟和水化、組織抗原修復、第一抗體孵育、顯色等各操作步驟。描述應盡量細化，需明確各步驟處理時間及pH值等內容。如第一抗體為濃縮型抗體，還需明確抗體工作液的濃度或比例及稀釋液的詳細信息。
6.4質量控制：明確每一批次檢測樣本均應同時進行內、外陽性/陰性質控染色及待測樣本的同型對照抗體的染色。質控應包含陽性、陰性不同PD-L1濃度水平的細胞系細胞或不同PD-L1表達水平（染色強度）的組織切片。為用戶提供可作為陽性和陰性，內（如適用）、外對照的組織名稱。詳述質控片制備的要求及質控結果的要求（試驗有效性的判斷），以及質控結果不符合要求的處理方式。
7.【檢驗結果的解釋】
7.1配合彩色圖片對染色特點進行說明。
7.2對可能出現(xiàn)的異常情況，如非特異染色、染色過淺等，進行說明，并明確提出出現(xiàn)該情況后的處理方法。
7.3評分方法
列明評分標準，包括對觀察方法、讀取細胞個數的要求、計數細胞性質（如腫瘤細胞、免疫細胞）、染色特點、評分規(guī)則等。
8.【檢測方法的局限性】
綜合產品的預期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進行相關說明，主要包括以下描述，請申請人選擇適用的條款在產品說明書中予以闡述。
8.1免疫組織化學檢測是一種需通過多個檢測步驟完成的診斷過程。在試劑的選擇、取材、固定、處理、切片的制備和染色結果的解釋上需要進行專門的培訓。
8.2任何陽性或陰性結果的解讀，應由病理科醫(yī)生結合病理形態(tài)學、臨床表現(xiàn)及其它檢測方法進行，不作為單獨的診斷指標。
8.3復染過度或不足都可能影響結果的判讀。
8.4不恰當的染色前組織的處理過程直接影響染色效果，造成假陽性、抗體定位不準確或假陰性結果。結果不一致可能是由樣本固定和包埋方法不同或組織樣本內固有差異造成的。
8.5陰性結果表示未檢出抗原，不一定表示樣本中無該抗原存在。待測抗原編碼基因變異、抗原低表達或抗原修復不當等，都會造成抗原無法檢出。
8.6已知可能引起非特異性染色的情形。如感染乙型肝炎病毒并含有乙肝病毒表面抗原的人體組織，可能表現(xiàn)出辣根過氧化酶的非特異性染色；由于蛋白質或底物反應產物的非免疫結合等。
8.7本試劑僅對經10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進行了驗證（如適用），不得用于其它樣本類型或流式細胞檢測等其他用途。
9.【產品性能指標】
簡述免疫反應性、精密度、特異性、靈敏度等各項性能指標和臨床試驗數據總結，列明研究方法和研究結果。
10.【注意事項】
應至少包括以下內容：
10.1 有關試劑盒內人源組份（如有）生物安全性的警告。
10.2 有關試驗操作中涉及試劑的安全性提示，包括對有毒有害物質的防護及危險物品的處理方法等。
三、參考文獻
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[2]周彩存,王寶成,程穎,等.中國非小細胞肺癌免疫檢查點抑制劑治療專家共識(2020年版)[J].中國肺癌雜志, 2021, 24(4):19.
[3]中華醫(yī)學會腫瘤學分會.中華醫(yī)學會肺癌臨床診療指南(2025版)[J].中華醫(yī)學雜志, 2025, 105(34):2918-2959.
[4]中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會.原發(fā)性肺癌診療指南(2022年版)[J].中國合理用藥探索, 2022, 19(9):28.
[5]國家藥品監(jiān)督管理局.關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告：國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號[Z].
[6]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術審評中心.定性檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導原則：國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術審評中心通告2022年第36號[Z]
[7]國家市場監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊與備案管理辦法：國家市場監(jiān)督管理總局令第48號[Z].
[8]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑分類規(guī)則：國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第129號[Z].
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