關鍵詞：制藥用水微生物限度控制、純化水、注射用水、需氧菌總數(shù)微生物指標、醫(yī)藥純水系統(tǒng)菌落總數(shù)超標控制、不可接受微生物、生物膜徹底去除、洋蔥伯克霍爾德菌、BCC、皮氏羅爾斯頓菌、純化水系統(tǒng)清洗消毒方案、生物制藥、細胞、疫苗、非無菌藥品、醫(yī)療器械、化妝品、中藥企業(yè)、實驗室、殺孢子劑、殺芽孢劑、潔凈區(qū)霉菌控制等
摘要：
在制藥、醫(yī)療器械以及化妝品等眾多生產(chǎn)領域，制藥用水的重要性不言而喻。它猶如生產(chǎn)流程中的“生命之水”，其質(zhì)量直接關乎最終產(chǎn)品的品質(zhì)與安全性。2025版藥典、FDA等文件均明確指出了洋蔥伯克霍爾德菌群、羅爾斯通氏菌等不可接受微生物以及生物膜污染防控。
隨著 2025 年新版藥典的10月即將正式實施，對制藥用水的微生物指標提出了更為嚴格和全面的要求，生物膜和不可接受微生物這兩個概念成為行業(yè)關注的焦點。今天，就讓我們一同深入探討制藥用水微生物污染，生物膜和不可接受微生物兩大重點控制。
一、制藥用水類型與微生物限量指標
制藥用水主要分為飲用水、純化水、注射用水和滅菌注射用水四種類型，每種類型都有其特定的微生物限量指標。
飲用水作為制藥用水的源頭之一，大多來源于市政自來水。在正常情況下，其微生物指標通常能夠符合標準要求，為后續(xù)的制藥用水制備提供相對穩(wěn)定的基礎。
純化水則是通過反滲透等工藝對飲用水進行深度處理得到的。然而，純化水的微生物狀況卻波動較大。由于其應用范圍廣泛，是注射用水的原料水，且在生產(chǎn)過程中容易受到多種因素的影響，因此菌落總數(shù)超標以及檢出不可接受微生物的情況時有發(fā)生。
根據(jù) 2025 版中國藥典 - 0261 制藥用水規(guī)定，純化水微生物限度標準為不大于 100cfu/ml，通常表述為菌落總數(shù)或需氧型細菌總數(shù)。同時，像洋蔥伯克霍爾德菌群(Burkholderia cepacian complex)、羅爾斯通菌(Ralstonia spp.)、寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas spp.) 、鞘氨醇單胞菌(Sphingomonas spp.) 等不可接受微生物，是純化水微生物控制的重點防范對象。
注射用水經(jīng)蒸餾制備而成，水溫基本維持在 70℃以上。較高的溫度在一定程度上抑制了微生物的生長繁殖，因此產(chǎn)生的微生物問題相對較少。但在一些極端情況下，如設備故障、操作不當?shù)?，仍可能出現(xiàn)微生物污染或檢出不可接受微生物的情況。
滅菌注射用水在生產(chǎn)過程中經(jīng)過嚴格的滅菌處理，生產(chǎn)系統(tǒng)基本不存在活菌問題，此時主要關注的是內(nèi)毒素指標。
二、2025版藥典微生物限度標準（不同藥品及藥用輔料）
(中國藥典》2025版微生物限度標準對不同藥品及藥用輔料等規(guī)定了詳細且產(chǎn)格的微生物限量要求。
2.1非無菌藥品微生物限度標準：
1.需氧茵總數(shù)、霉茵和酵母菌總數(shù)。
用于表皮或粒展不完整的合藥材原粉的局部給藥制劑,腎氧曾總數(shù)每克不得過105cfu，每器升不得過104cfu，霉菌和酵母菌總數(shù)每完或每落升不得過102cfu,不得檢出大腸埃希菌。
用于表皮或粘展充整的合藥材原粉的局部給藥制劑,氯菌總救每克不得過106cfu，每毫升不得過105,需氧和酵母菌總數(shù)每克或每毫升不得過102cfu，不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。
眼用制劑、開用制劑、集用制劑、呼吸道玻入制州及陰運、尿道給藥制劑,筒氧菌總數(shù)每克或每毫升不得過103cfu，需菌和酵母菌總數(shù)每克或每毫升不得過102cfu，不得檢出大所換希菌、金黃色葡茵球菌、銅綠假單施菌。
口服給藥制劑,帶氧曾總救等完不得過106cfu，每毫升不得過105cfu，霧菌和降得曾總救每克成每毫升不得過102cfu，不得檢出大腸換希菌。合臟器提取物的制劑還不得檢出沙門氏菌(10g或10m)
2.控制菌。
合動物組織(包括提取物)的口服給藥制劑,每10g或10ml還應檢室核菌,不得檢出。
直所給藥制劑,腎氣圖總救等克不得過105cfu，等毫升不得過104cfu，常菌和辟母曾總數(shù)等克成等毫升不得過10²cfu,不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌。
2.2藥用輔料微生物限度標準：
1.需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)。
用于非無窗前品生產(chǎn)的前用輔料,筒氧菌地救每克不得過106 cfu，等毫升不得過105cfu，器菌和臍母菌總救每克或每毫升不得過102cfu。
2.控制菌。
用于口服給藥制劑生產(chǎn)的藥用輔料,不得檢出大腸埃希菌。
用于局部給藥制劑生產(chǎn)的前用端料,不得檢出金黃色葡萄球窗、銅綠假單胞窗、大腸埃希菌
(用于表皮或黏服不完整的藥用輔料還不得檢出梭菌)。
這些做生物限度標準旨在確保藥品及筋用輔料的質(zhì)量和安全性,保障患者用前的有效性和可靠性,嚴格控制做生物污染水平,防止因微生物超標引發(fā)的藥品變質(zhì)及潛在的感染風險等間題。
三、2025藥典不可接受微生物：制藥用水的“重點對象”
不可接受微生物（objectionable microorganisms）是指那些能夠在非無菌產(chǎn)品中生存或繁殖，對產(chǎn)品理化特性產(chǎn)生不利影響、破壞其功能及療效，或經(jīng)特定給藥途徑對患者健康造成損害的潛在危害微生物。在制藥用水系統(tǒng)中，常見的不可接受微生物包括洋蔥伯克霍爾德菌群(Burkholderia cepacian complex)、羅爾斯通菌(Ralstonia spp.)、寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas spp.) 、鞘氨醇單胞菌(Sphingomonas spp.) 等。2025 版藥典、FDA 等文件均明確指出了這些微生物的危害性，強調(diào)了對其進行嚴格控制的必要性。
這些不可接受微生物一旦進入制藥用水系統(tǒng)，不僅會影響產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性，還可能對患者健康造成潛在威脅。例如，洋蔥伯克霍爾德菌群具有較強的耐藥性，能夠在惡劣的環(huán)境中生存和繁殖，一旦污染產(chǎn)品，可能導致患者感染，增加治療難度和風險。
3.1、純化水系統(tǒng)中皮氏羅爾斯頓菌反復污染的問題，原因分析：
皮氏羅爾斯頓菌（Ralstonia pickettii）
是一種非發(fā)酵的革蘭陰性需氧桿菌，1995年前該菌一直歸于伯克霍爾德菌屬，后重新分類歸于羅爾斯頓菌屬。由于羅爾斯頓菌和伯克霍爾德菌的相似度很高，所以不排除以往鑒定出的許多伯克霍爾德菌實際上可能為羅爾斯頓菌。
羅爾斯頓菌是一類需氧、不產(chǎn)芽孢、直或微彎曲的革蘭陰性桿菌，長1~5μm,寬0.5~1.0μm，存在于水、土壤、根際及植物（包括水果和蔬菜）中的環(huán)境微生物，在全球均有分布，是公認的植物病原菌，由于它能在含水的環(huán)境中生存，可通過污染血液制品、無菌水、生理鹽水、氯己定溶液、呼吸道治療液、靜脈導管等導致患者感染，因此這類細菌作為院內(nèi)感染機會致病菌，目前已成為醫(yī)院及衛(wèi)生保健機構中非常棘手的問題。
現(xiàn)今羅爾斯頓菌屬包含5個菌種，屬于人類病原菌的包括皮氏羅爾斯頓菌（Ralstonia pickettii）、解甘露羅爾斯頓（R.mannitolilytica)和危險羅爾斯頓菌（R.insidiosa),其他有效命名的羅爾斯頓菌屬菌種如今已分類為貪銅菌屬。
純化水系統(tǒng)污染原因分析
1、生物膜形成：皮氏羅爾斯頓菌易在管道、儲罐等表面形成生物膜，常規(guī)巴氏消毒難以徹底清除。
2、消毒不徹底：巴氏消毒可能無法有效殺滅耐藥菌，尤其是隱藏在死角或生物膜中的細菌。
3、系統(tǒng)設計問題：可能存在死角、低流速區(qū)域或盲管，導致消毒不充分。
4、外部污染源：空氣、人員操作或維護過程中可能引入污染。
3.2洋蔥伯克霍爾德菌群（Burkholderia cepacia Complex，Bcc）
隸屬于伯克霍爾德菌屬，該屬共有122個種，將其中表型近似、基因型存在差異的菌種進行劃分，命名為洋蔥伯克霍爾德菌群（Bcc）。對于某些水性基質(zhì)非無菌化學藥品，Bcc 是不可接受微生物。特別是出口到美國、歐盟的醫(yī)藥產(chǎn)品、化妝品、衛(wèi)生用品等將洋蔥伯克霍爾德列為不可接受微生物。
Bcc為革蘭氏陰性桿菌，對營養(yǎng)要求不高，最適合生長溫度為30℃，在4℃不生長。藥企的水系統(tǒng)可以促進生物膜的生成，也有利于Bcc生長。Bcc極容易形成生物膜。
例如BCC一類在土壤、水中普遍存在的革蘭陰性桿菌，技術上來講抗逆性并不算高，正常狀態(tài)下多數(shù)消毒方式都可以將其殺滅。但是在純化水系統(tǒng)中出現(xiàn)就是一個難題，那就是BCC菌株可以形成生物膜，很難徹底清除和剝離。
生物被膜是微生物分泌的胞外組織，是一種黏性凝膠類物質(zhì)。生物膜會包裹微生物，保護微生物免受外界消殺方式的危害并為生物生長繁殖提供營養(yǎng)，可以將生物膜認為是微生物的“基地”。生物膜是水系統(tǒng)中反復出現(xiàn)BCC菌群且難以被消除的原因。
3.3 Biofilm生物膜對純化水系統(tǒng)的典型危害：
污堵：生物膜在RO膜、罐體、管道等位置都會出現(xiàn)，會污堵RO膜，致使RO膜產(chǎn)水量下降，也會降低管道供水能力下降。
持續(xù)性的微生物污染：生物膜會向水體中持續(xù)釋放微生物，造成水體微生物數(shù)量劇增。
腐蝕管道：生物膜會釋放腐蝕產(chǎn)物，腐蝕罐體、管道。
皮氏羅爾斯頓菌、BBC菌群常見于水系統(tǒng)中且易于形成生物膜，所以定期使用生物膜清洗劑（Oxytech）對管道系統(tǒng)清洗消毒是十分必要的。
四、純化水微生物污染是制藥用水出現(xiàn)頻率最高的類型，分析排查：重點與難點
純化水在制藥用水中的用途最為廣泛，同時其微生物污染出現(xiàn)幾率也相對較高，因此成為制藥用水微生物控制的重點。純化水微生物污染的來源主要分為外部輸入型污染和內(nèi)部交叉污染兩部分。
外部輸入型污染主要來自原水和空氣。原水中可能含有各種微生物，盡管經(jīng)過反滲透等處理，但仍有可能有部分微生物殘留或穿透處理系統(tǒng)?？諝庵械奈⑸镆部赡芡ㄟ^管道、儲罐等開口進入純化水系統(tǒng)，尤其是在系統(tǒng)維護、檢修等過程中，更容易受到空氣污染的影響。
內(nèi)部交叉污染則主要源于細菌生物膜（EPS）。生物膜是細菌分泌的胞外聚合物（EPS）附著于物體表面而形成的三維結構化群落。在純化水系統(tǒng)的存儲分配系統(tǒng)中，如罐體內(nèi)壁、管道內(nèi)壁、過濾材料表面等，都容易形成和附著生物膜。生物膜的發(fā)展過程包括黏附、表面聚集、增長、釋放四個階段。一旦生物膜形成，就會成為持續(xù)性的微生物污染源，不斷釋放浮游菌到水體中，導致微生物污染難以徹底清除。
此外，真菌與細菌類似，也具有形成生物膜的能力，例如念珠菌屬、曲霉屬等。真菌生物膜為胞外基質(zhì)（ECM），主要以剛性多糖和脂類為主，功能側重于抗藥性。病毒雖然缺乏代謝能力，無法自主形成生物膜，但可能通過與宿主或環(huán)境的相互作用，形成類似生物膜的聚集結構或保護性群體，也可以與生物膜共存以促進傳播。
五、制藥用水/純化水系統(tǒng)微生物污染難點剖析
制藥用水/純化水的微生物污染之所以較難徹底解決，主要有以下幾個方面的原因：
（一）系統(tǒng)性問題
制藥用水系統(tǒng)環(huán)節(jié)眾多，從原水采集、處理、儲存到分配使用，每一個環(huán)節(jié)都可能成為微生物污染的源頭。任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都有可能導致整個系統(tǒng)污染，造成終端用水微生物超標。例如，管道連接處的密封不嚴、儲罐的清洗消毒不徹底等，都可能為微生物的滋生提供條件。
（二）微生物抗逆性
水系統(tǒng)中常出現(xiàn)的銅綠假單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌屬等嗜水微生物具有一定的抗逆性。它們能夠在一定程度上抵抗紫外線、臭氧、常規(guī)消毒藥劑等方式的殺滅作用。這使得傳統(tǒng)的消毒方法在面對這些微生物時效果不佳，難以徹底清除污染。
（三）生物膜的頑固性
水系統(tǒng)中細菌易形成生物膜，而生物膜對內(nèi)部的細菌有強大的保護作用。生物膜的胞外聚合物能夠阻擋消毒劑的滲透，降低消毒劑的殺菌效果。目前除了極少的精細試劑能夠有效清除生物膜，多數(shù)常規(guī)清洗劑和消毒液對生物膜作用不理想。
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