免疫治療已徹底改變癌癥治療格局，成為許多患者的標(biāo)準(zhǔn)治療方案之一。然而，傳統(tǒng)的基于免疫檢查點(diǎn)抑制（如靶向PD-1/PD-L1和CTLA-4通路）的免疫療法僅對(duì)部分患者有效。其局限性主要在于依賴患者體內(nèi)預(yù)先存在的、能識(shí)別腫瘤特異性非同義突變的腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞。因此，僅有少數(shù)患者能從這類治療中獲得持久療效。
T細(xì)胞銜接器（T cell engagers, TCEs）是一類前景廣闊的免疫治療藥物，其優(yōu)勢(shì)在于無需依賴T細(xì)胞對(duì)特定肽段抗原的識(shí)別，即可激活T細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。TCE通過同時(shí)結(jié)合T細(xì)胞表面的CD3/TCR復(fù)合物和腫瘤細(xì)胞表面的腫瘤相關(guān)抗原（TAAs），在T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間形成免疫突觸，從而觸發(fā)腫瘤細(xì)胞殺傷。這種“即用型”精準(zhǔn)療法有望擴(kuò)大可從免疫治療中獲益的患者群體。
2014年，靶向B細(xì)胞表面CD19的雙特異性T細(xì)胞銜接器（BiTE™）——blinatumomab（商品名BLINCYTO®）獲批上市，標(biāo)志著TCE領(lǐng)域的重要里程碑。此后，針對(duì)多種腫瘤相關(guān)靶點(diǎn)、適用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤和實(shí)體瘤的TCE研發(fā)迅速升溫。
目前有多種靶向不同免疫細(xì)胞類型的多特異性銜接器正在探索中，本文聚焦于靶向αβ T細(xì)胞的銜接器。當(dāng)前的研究重點(diǎn)在于通過優(yōu)化TCE分子結(jié)構(gòu)、精選更具腫瘤特異性的靶點(diǎn)，以提升其療效與安全性。此外，研究者還致力于精確調(diào)控T細(xì)胞活化過程，并利用腫瘤微環(huán)境（TME）的獨(dú)特特征來增強(qiáng)治療特異性。關(guān)鍵策略包括雙靶點(diǎn)設(shè)計(jì)、條件性激活機(jī)制以及引入共刺激信號(hào)。這些創(chuàng)新有望進(jìn)一步優(yōu)化TCE性能，并推動(dòng)其在實(shí)體瘤治療中的廣泛應(yīng)用。
影響TCE抗腫瘤效力與安全性的關(guān)鍵因素
1.TCE結(jié)構(gòu)的優(yōu)化
TCE的分子大小和整體結(jié)構(gòu)對(duì)其療效及藥代動(dòng)力學(xué)（PK）特性具有決定性影響。通常，TCE被設(shè)計(jì)為小而柔性的結(jié)構(gòu)，以促進(jìn)T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的緊密接觸，從而高效形成免疫突觸。典型的例子是BiTE™，其由兩個(gè)串聯(lián)的單鏈可變區(qū)片段（scFv）通過短柔性連接肽構(gòu)成。然而，由于缺乏抗體Fc段且分子量小，BiTE™在體內(nèi)清除迅速，需頻繁給藥。
為改善這一問題，研究者采用了多種策略延長(zhǎng)TCE半衰期，包括聚乙二醇化（PEGylation）、引入白蛋白結(jié)合域，或?qū)CE與抗體Fc片段融合。這些修飾可在不損害其結(jié)合能力和抗腫瘤活性的前提下顯著提升藥物暴露時(shí)間。
除了分子大小，TCE的空間構(gòu)型對(duì)T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間突觸距離的調(diào)控至關(guān)重要——該距離直接影響T細(xì)胞活化效率和腫瘤殺傷能力。研究表明，T細(xì)胞與抗原呈遞細(xì)胞間形成有效免疫突觸的最佳膜間距約為15納米，這與天然TCR–肽–MHC復(fù)合物的尺寸相當(dāng)，也接近IgG1抗體Fab臂的跨度。近期研究進(jìn)一步證實(shí)，這一距離同樣適用于TCE介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用。
當(dāng)TCE的抗腫瘤相關(guān)抗原（TAA）臂與抗CD3臂在空間上更靠近時(shí)，可增強(qiáng)T細(xì)胞激活并提升腫瘤殺傷效果；反之，若兩個(gè)結(jié)合域之間的間隔過長(zhǎng)，則TCE活性通常下降。靶向TAA上靠近細(xì)胞膜的表位有助于縮短突觸距離，從而改善T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的相互作用和治療效果。
此外，免疫突觸的信號(hào)強(qiáng)度還取決于能否有效排除T細(xì)胞表面的磷酸酶CD45（一種跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶，對(duì)TCR信號(hào)通路具有調(diào)控作用），并募集共刺激受體。若TCE構(gòu)型無法有效實(shí)現(xiàn)這兩點(diǎn)，則其效力降低，且需要更高的TAA表達(dá)密度才能觸發(fā)細(xì)胞毒反應(yīng)。
值得注意的是，最優(yōu)突觸距離的實(shí)現(xiàn)往往需通過經(jīng)驗(yàn)性調(diào)整，因?yàn)檫B接肽長(zhǎng)度、表位位置及TCE柔性等因素各自獨(dú)立地影響細(xì)胞毒性的發(fā)揮，使得設(shè)計(jì)變得復(fù)雜。
2.親和力與價(jià)態(tài)的精細(xì)調(diào)控
除結(jié)構(gòu)外，TCE對(duì)靶點(diǎn)的親和力（affinity）和價(jià)態(tài)（valency）也是優(yōu)化的關(guān)鍵維度。
提高TAA結(jié)合價(jià)態(tài)：通過引入多個(gè)TAA結(jié)合域（如雙價(jià)或更高），可顯著增強(qiáng)TCE的整體結(jié)合力（avidity），不僅提升腫瘤殺傷效力，還能在TAA表達(dá)水平低或異質(zhì)性強(qiáng)的腫瘤中保持活性。
降低單個(gè)結(jié)合域親和力：在雙價(jià)TAA結(jié)合設(shè)計(jì)中，即使單個(gè)TAA結(jié)合域的親和力較低，整體活性仍可維持，從而避免與可溶性抗原結(jié)合導(dǎo)致的“抗原沉降效應(yīng)”（sink effect），提高藥物系統(tǒng)暴露。
臨床上已有多個(gè)“2+1”格式TCE（即兩個(gè)抗TAA Fab+一個(gè)抗CD3 Fab）展現(xiàn)出良好前景，例如：靶向CD20的glofitamab（商品名COLUMVI™，羅氏）；靶向STEAP1的xaluritamig（安進(jìn)公司）；靶向DLL3的ZG006（澤璟制藥）。
此外，基于IgM的雙特異性銜接器因其五聚體或六聚體結(jié)構(gòu)可提供多價(jià)結(jié)合，理論上具備高avidity，但實(shí)際抗腫瘤效力仍顯不足。盡管增加價(jià)態(tài)可增強(qiáng)結(jié)合強(qiáng)度，但分子體積增大和結(jié)構(gòu)復(fù)雜化可能限制其在實(shí)體瘤中的組織滲透性和分布。
因此，在價(jià)態(tài)優(yōu)化過程中，必須在結(jié)合強(qiáng)度、腫瘤穿透能力與細(xì)胞毒性效力之間取得精細(xì)平衡，以實(shí)現(xiàn)最佳治療窗口。
3.CD3結(jié)合特性與細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）
越來越多的證據(jù)表明，TCE所結(jié)合的CD3復(fù)合物具體結(jié)構(gòu)域?qū)ζ銽細(xì)胞激活強(qiáng)度、信號(hào)傳導(dǎo)模式及整體治療特征具有顯著影響。CD3是由CD3ε、CD3δ、CD3γ和CD3ζ四個(gè)亞基組成的多聚體復(fù)合物，與TCR緊密關(guān)聯(lián)。各亞基在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中扮演不同角色，其空間可及性與取向也存在差異。
研究發(fā)現(xiàn)，不同抗CD3抗體（如OKT3、UCHT1、L2K、SP34）識(shí)別CD3ε鏈上的不同表位，由此引發(fā)的TCR信號(hào)強(qiáng)度和模式各異，進(jìn)而對(duì)細(xì)胞毒性和細(xì)胞因子釋放產(chǎn)生差異化影響。將這些具有不同特性的CD3結(jié)合域整合進(jìn)TCE設(shè)計(jì)中，可能優(yōu)化其治療窗口。
1）CD3親和力與CRS風(fēng)險(xiǎn)
TCE對(duì)CD3/TCR復(fù)合物的親和力是平衡療效與安全性（尤其是控制CRS）的關(guān)鍵因素。CRS是TCE治療中最常見的嚴(yán)重不良反應(yīng)，由T細(xì)胞過度活化引發(fā)，表現(xiàn)為大量促炎細(xì)胞因子（如IL-6、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF）釋放，導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)。
CRS的嚴(yán)重程度受多種因素影響，包括：腫瘤相關(guān)抗原（TAA）表達(dá)水平；腫瘤負(fù)荷；TCE給藥劑量與方案；PK和組織分布；患者基礎(chǔ)狀況及合并癥。
臨床上已采用多種策略緩解CRS，例如：預(yù)處理減瘤（如使用單抗清除腫瘤負(fù)荷）；逐步遞增給藥（step-up dosing）；使用糖皮質(zhì)激素；阻斷關(guān)鍵細(xì)胞因子（如IL-6受體拮抗劑托珠單抗）。
2）親和力調(diào)控：解耦細(xì)胞毒性與CRS
Faroudi等人的研究揭示了細(xì)胞毒性與細(xì)胞因子釋放存在兩個(gè)不同的激活閾值：細(xì)胞毒作用（如溶酶體胞吐、靶細(xì)胞殺傷）所需的T細(xì)胞激活閾值較低；細(xì)胞因子分泌則需要更強(qiáng)的刺激。
早期TCE多采用高親和力CD3結(jié)合域（KD<10nM），雖在臨床前模型中展現(xiàn)強(qiáng)效殺傷，但常伴隨嚴(yán)重CRS，治療窗狹窄。近年來，通過降低CD3結(jié)合臂親和力（affinity-attenuated CD3 binder）的設(shè)計(jì)策略，成功實(shí)現(xiàn)了保留強(qiáng)效、抗原特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷；顯著減少細(xì)胞因子釋放；改善安全性和耐受性。
臨床證據(jù)支持這一策略：
Surovatamig（AZD0486）：一種靶向CD19、攜帶新型低親和力CD3結(jié)合域的TCE，在復(fù)發(fā)/難治性濾泡性淋巴瘤患者中（n=27，劑量≥2.4mg）達(dá)到96%客觀緩解率（ORR）和85%完全緩解率（CR），且療效持久。采用雙階段遞增給藥后，最高劑量達(dá)15mg，無≥2級(jí)CRS或ICANS事件，僅45%患者出現(xiàn)1級(jí)CRS。
ABBV-383（TNB-383B）：靶向BCMA的TCE，在多發(fā)性骨髓瘤模型中有效殺傷原代瘤細(xì)胞，同時(shí)顯著減少T細(xì)胞因子分泌。I期臨床試驗(yàn)（n=124）顯示：CRS發(fā)生率為57%（多為1–2級(jí)），在≥40mg劑量下ORR為68%，部分緩解率達(dá)54%。
此外，降低CD3親和力還可改善TCE的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布。例如，一項(xiàng)HER2靶向TCE研究顯示：KD=50nM（低親和力）的CD3結(jié)合變體在腫瘤中富集更高；而KD=0.5nM（高親和力）版本則更多滯留于T細(xì)胞富集組織（如脾臟、淋巴結(jié)），腫瘤蓄積減少。
3）CRS并非僅由CD3親和力決定
值得注意的是，即使TCE具有相同分子結(jié)構(gòu)和CD3親和力，CRS發(fā)生率仍可能顯著不同。例如Acapatamab（靶向PSMA，用于mCRPC）的CRS發(fā)生率高達(dá)98%；Tarlatamab（靶向DLL3，用于小細(xì)胞肺癌）的CRS發(fā)生率僅為51%。
這提示其他因素同樣關(guān)鍵，如：TAA表達(dá)密度；腫瘤負(fù)荷與轉(zhuǎn)移狀態(tài)（高負(fù)荷常與更重CRS相關(guān)）；患者免疫基線狀態(tài)與T細(xì)胞功能。
因此，臨床上常采用預(yù)處理減瘤策略以降低CRS風(fēng)險(xiǎn)，例如在使用CD20靶向TCE前，先給予B細(xì)胞清除劑Obinutuzumab。
4）替代策略：靶向TCR而非CD3
除CD3外，直接靶向αβ TCR的TCE也正在探索中。例如：Sanofi開發(fā)的CD33/CD123納米抗體TCE，通過抗TCR αβ的VHH結(jié)構(gòu)域，在小鼠模型中有效清除急性髓系白血?。ˋML）細(xì)胞，并在非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中未引發(fā)系統(tǒng)性細(xì)胞因子升高或CRS相關(guān)毒性。該結(jié)果表明，繞過CD3、直接結(jié)合TCR可能是一種更安全的T細(xì)胞激活新路徑。
TCE在癌癥治療中的最新創(chuàng)新：靶向特定T細(xì)胞亞群
為提升TCE的治療指數(shù)、降低CRS等毒性，研究者正探索選擇性激活特定T細(xì)胞亞群的策略。該方法旨在減少被激活的T細(xì)胞總數(shù)，從而減輕過度免疫激活帶來的不良反應(yīng)。
1.優(yōu)先靶向CD8?細(xì)胞毒性T細(xì)胞
CD8?T細(xì)胞是介導(dǎo)抗腫瘤細(xì)胞毒作用的核心效應(yīng)細(xì)胞，能有效識(shí)別并殺傷表達(dá)突變或病毒來源肽段的腫瘤細(xì)胞。
體外研究表明，傳統(tǒng)雙特異性TCE可有效引導(dǎo)CD8?T細(xì)胞殺傷腫瘤。相比之下，CD4?輔助T細(xì)胞雖在某些情況下也具備細(xì)胞毒能力，并可支持CD8?T細(xì)胞功能，但其活化常伴隨大量細(xì)胞因子分泌，加劇CRS風(fēng)險(xiǎn)。此外，CD4?T細(xì)胞中包含調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs），后者可抑制CD8?T細(xì)胞的增殖與殺傷活性。臨床研究顯示，外周血中Treg比例較高與blinatumomab（BiTE™）療效降低顯著相關(guān)。
因此，提高TCE對(duì)CD8?T細(xì)胞的選擇性，有望減少CRS發(fā)生，避免Treg介導(dǎo)的免疫抑制，增強(qiáng)抗腫瘤效應(yīng)。
早期嘗試用抗CD8抗體替代抗CD3結(jié)構(gòu)域以實(shí)現(xiàn)CD8?選擇性靶向效果不佳。Michalk等人的研究發(fā)現(xiàn)，抗CD8抗體僅在預(yù)激活的CD8?T細(xì)胞中有效介導(dǎo)殺傷，而新鮮分離的靜息態(tài)CD8?T細(xì)胞仍需通過CD3/TCR提供“信號(hào)1”才能被有效激活。為此，新一代策略采用同時(shí)靶向CD3/TCR和CD8的多特異性抗體，兼顧激活效率與亞群選擇性。例如，阿斯利康開發(fā)的TITAN平臺(tái)（Target-Induced T cell Activating Nanobodies）將CD8導(dǎo)向模塊整合進(jìn)含TCR結(jié)合域的TCE中，顯著減少CD4?T細(xì)胞活化，在維持強(qiáng)效細(xì)胞毒作用的同時(shí)明顯降低細(xì)胞因子釋放。
2.基于TCRVβ鏈的精準(zhǔn)T細(xì)胞亞群激活
深入理解T細(xì)胞分化狀態(tài)及腫瘤微環(huán)境中T細(xì)胞組成，有助于識(shí)別更具治療潛力的特定亞群。Marengo Therapeutics開發(fā)的tri-STAR平臺(tái)（三特異性選擇性T細(xì)胞激活庫）包含一個(gè)腫瘤靶向結(jié)構(gòu)域，并通過識(shí)別特定TCRVβ鏈，選擇性激活在實(shí)體瘤中富集的T細(xì)胞亞群。該策略僅激活一小部分T細(xì)胞，即可實(shí)現(xiàn)腫瘤定向殺傷，大幅降低CRS風(fēng)險(xiǎn)。
3.靶向γδT細(xì)胞：利用先天樣T細(xì)胞降低毒性
盡管傳統(tǒng)CD3靶向TCE也能招募γδT細(xì)胞，但選擇性激活γδT細(xì)胞亞群（尤其是Vγ9Vδ2亞型）可能進(jìn)一步優(yōu)化安全性。γδT細(xì)胞在體內(nèi)比例較低，且具有天然抗腫瘤活性，其活化通常不依賴MHC，且較少誘導(dǎo)Treg擴(kuò)增或大量促炎因子釋放。目前已有多個(gè)靶向γδT細(xì)胞的TCE進(jìn)入臨床。LAVA-1207靶向PSMA，用于前列腺癌；LAVA-1223靶向EGFR，可特異性激活Vγ9Vδ2T細(xì)胞，介導(dǎo)腫瘤裂解并控制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)，同時(shí)激活下游T細(xì)胞和NK細(xì)胞，避免Treg共激活。在非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型中，LAVA-1223表現(xiàn)出良好的安全性與低細(xì)胞因子釋放水平，提示此類基于先天樣T細(xì)胞的療法有望在保持療效的同時(shí)顯著降低CRS風(fēng)險(xiǎn)。
4.肽-MHC復(fù)合物作為TCE的新型靶點(diǎn)
2022年1月，美國(guó)FDA批準(zhǔn)了ImmTAC雙特異性分子tebentafusp（商品名KIMMTRAK®，由Immunocore公司開發(fā)）用于治療葡萄膜黑色素瘤，這標(biāo)志著TCE在實(shí)體瘤治療領(lǐng)域取得重大突破。
1）ImmTAC技術(shù)：利用增強(qiáng)親和力的TCR靶向pMHC
Tebentafusp是一種TCR/抗CD3雙功能分子，屬于ImmTAC平臺(tái)。其結(jié)構(gòu)包含：一個(gè)親和力增強(qiáng)的可溶性TCRαβ可變區(qū)片段，特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面呈遞的gp100肽–MHC I類復(fù)合物（pMHC）；一個(gè)抗CD3 scFv，用于招募并激活多克隆T細(xì)胞。
該設(shè)計(jì)可引導(dǎo)T細(xì)胞殺傷表達(dá)gp100-pMHC的黑色素瘤細(xì)胞，無需T細(xì)胞本身具有g(shù)p100特異性，從而繞過對(duì)預(yù)存腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞的依賴。
這一成功驗(yàn)證了pMHC復(fù)合物作為治療靶點(diǎn)的可行性，即使其在腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)水平通常較低。
更重要的是，靶向pMHC使TCE能夠識(shí)別細(xì)胞內(nèi)抗原（如突變蛋白、癌睪抗原等），顯著拓展了免疫治療的靶點(diǎn)范圍，不再局限于傳統(tǒng)的細(xì)胞表面腫瘤相關(guān)抗原（TAAs）。
2）其他pMHC靶向平臺(tái)
Immatics公司的TCERs（T cell Engaging Receptors），由兩部分組成：識(shí)別HLA呈遞腫瘤抗原的TCR結(jié)構(gòu)域+激活T細(xì)胞的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域。靶向MAGEA4/A8的IMA401和靶向PRAME的IMA402在臨床前及早期臨床研究中展現(xiàn)出良好的安全性與顯著的腫瘤抑制效果。
TCR模擬抗體（TCR mimetics, TCRm）可模擬天然TCR對(duì)HLA-呈遞肽段的識(shí)別能力。在靶向突變型Ras和p53新抗原所形成的pMHC復(fù)合物方面，已顯示出有前景的臨床前結(jié)果。
3）挑戰(zhàn)與局限
盡管前景廣闊，pMHC靶向TCE仍面臨關(guān)鍵挑戰(zhàn)：
HLA限制性：每種pMHC復(fù)合物僅能被特定HLA等位基因（如HLA-A*02:01）呈遞，因此患者需具備相應(yīng)HLA類型才能獲益，限制了適用人群。
耐藥機(jī)制風(fēng)險(xiǎn)：腫瘤可能通過HLA-I類基因座雜合性缺失（LOH），或抗原加工通路突變（如TAP、β2M缺陷），導(dǎo)致pMHC無法正常呈遞，從而逃逸TCE識(shí)別。
工程化難度高：需設(shè)計(jì)既能高親和力結(jié)合pMHC、又不交叉識(shí)別自身正常肽段的分子，以避免“脫靶”毒性損傷健康組織。
4）新策略：?jiǎn)捂減MHC（scpMHC）融合抗體
為更精準(zhǔn)地激活特定T細(xì)胞并減少系統(tǒng)性毒性，研究者開發(fā)了一種創(chuàng)新方法：將腫瘤或病毒來源的抗原肽與β2-微球蛋白（β2m）及MHC-I重鏈共價(jià)連接，構(gòu)建成單鏈pMHC（scpMHC）；再將scpMHC與腫瘤靶向抗體（如抗IGF1R或抗EGFR）融合。該設(shè)計(jì)的優(yōu)勢(shì)在于僅在TME中激活特異性識(shí)別該肽段的CD8?T細(xì)胞，避免全身性T細(xì)胞廣泛激活，從而顯著降低CRS風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)繞過因HLA-ILOH導(dǎo)致的抗原呈遞缺失問題（因scpMHC自帶抗原呈遞結(jié)構(gòu)）。但該策略仍受限于患者的HLA類型，無法完全擺脫HLA限制性。
邏輯門控TCE：提升腫瘤特異性的新策略
為克服傳統(tǒng)TCE在實(shí)體瘤和血液瘤治療中面臨的抗原異質(zhì)性和on-target off-tumor毒性問題，研究者開發(fā)了雙靶點(diǎn)邏輯門控TCE（dual-targeting TCEs）。這類分子通過同時(shí)識(shí)別兩個(gè)腫瘤相關(guān)抗原（TAAs），以“OR”或“AND”邏輯門控方式調(diào)控T細(xì)胞激活，從而在提升療效的同時(shí)增強(qiáng)腫瘤選擇性。
一、OR門控TCE：應(yīng)對(duì)抗原異質(zhì)性，防止免疫逃逸
作用機(jī)制：只要腫瘤細(xì)胞表達(dá)任一靶抗原（A或B），即可觸發(fā)T細(xì)胞激活。
優(yōu)勢(shì)：有效覆蓋抗原表達(dá)不均的腫瘤群體；防止因單一抗原丟失（如CD19?克?。?dǎo)致的復(fù)發(fā)；特別適用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤（如B細(xì)胞淋巴瘤、白血病、多發(fā)性骨髓瘤），這些疾病中靶抗原常表達(dá)于可再生、非關(guān)鍵組織（如正常B細(xì)胞），允許一定程度的“脫靶”毒性。
代表性設(shè)計(jì)：靶向CD19/CD20、BCMA/CD19或CD33/CD123的雙特異性TCE。類似CAR-T療法中的雙靶點(diǎn)策略，可顯著增強(qiáng)抗腫瘤活性，延長(zhǎng)緩解時(shí)間。
局限性：OR門控?zé)o法像聯(lián)合用藥那樣靈活調(diào)整各靶點(diǎn)劑量；需精心設(shè)計(jì)兩個(gè)TAA結(jié)合臂的親和力與藥效動(dòng)力學(xué)，確保兩者在體內(nèi)均能達(dá)到有效劑量。
二、AND門控TCE：提升腫瘤特異性，降低脫靶毒性
作用機(jī)制：僅當(dāng)腫瘤細(xì)胞同時(shí)高表達(dá)兩個(gè)靶抗原（A且B）時(shí)，才有效激活T細(xì)胞。通常通過調(diào)節(jié)兩個(gè)TAA結(jié)合域的親和力或價(jià)態(tài)，使單抗原結(jié)合不足以觸發(fā)強(qiáng)信號(hào)，而雙抗原共結(jié)合則通過協(xié)同親合力（avidity）實(shí)現(xiàn)高效激活。
適用場(chǎng)景：尤其適用于實(shí)體瘤，因其缺乏真正腫瘤特異性表面抗原，多數(shù)TAAs也在健康組織中低水平表達(dá)。AND門控可顯著減少對(duì)僅表達(dá)單一抗原的正常細(xì)胞的誤傷。
臨床前與臨床實(shí)例：
tNY-aCD3/aEGFR：一種三特異性TCE，同時(shí)靶向?qū)嶓w瘤上的兩個(gè)抗原，展現(xiàn)出更強(qiáng)的療效與選擇性；
EpCAM/EGFR雙靶點(diǎn)TCE：對(duì)結(jié)直腸癌中雙陽性細(xì)胞的殺傷效力顯著高于單陽性細(xì)胞；
AMG305（BiTE™平臺(tái)）：靶向CDH3和MSLN（常在多種實(shí)體瘤中共表達(dá)），利用親合力依賴機(jī)制選擇性清除雙陽性腫瘤細(xì)胞，保護(hù)單抗原表達(dá)的正常組織；
ISB2001（Ichnos&Glenmark）：一種靶向BCMA和CD38的三特異性TCE，用于多發(fā)性骨髓瘤（MM）。相比單靶點(diǎn)藥物（如teclistamab或ABBV-383），ISB2001可增強(qiáng)對(duì)MM克隆的親合力；減少可溶性BCMA引起的“抗原沉降效應(yīng)”；降低因CD38廣泛表達(dá)帶來的毒性。目前正在進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)，評(píng)估其在復(fù)發(fā)/難治性MM患者中的安全性和療效。
影響AND門控效果的關(guān)鍵因素：兩個(gè)抗原的表達(dá)水平與共表達(dá)比例；腫瘤微環(huán)境中T細(xì)胞浸潤(rùn)程度；抗原的內(nèi)化速率；TCE分子的幾何構(gòu)型與結(jié)合動(dòng)力學(xué)。
因此，AND門控TCE對(duì)雙陽性細(xì)胞的選擇性需通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，不能僅憑理論預(yù)測(cè)。
基于TME因素的條件性TCE設(shè)計(jì)
為提升TCE在實(shí)體瘤治療中的腫瘤特異性并降低系統(tǒng)性毒性（如CRS、on-target off-tumor效應(yīng)），研究者開發(fā)了條件性激活型TCE（conditionally-active TCEs）。這類分子僅在TME特有的理化條件下被激活，從而實(shí)現(xiàn)“精準(zhǔn)打擊”。部分案例總結(jié)如下：
一、條件性激活的核心策略
條件性TCE利用TME中區(qū)別于正常組織的獨(dú)特特征進(jìn)行激活，主要包括：蛋白酶介導(dǎo)的激活（如MMPs、絲氨酸/半胱氨酸蛋白酶）；酸性pH響應(yīng)；高ATP濃度依賴性結(jié)合模塊；工程化分子互作開關(guān)。這些設(shè)計(jì)使TCE在血液循環(huán)或健康組織中保持“沉默”，僅在進(jìn)入腫瘤區(qū)域后才釋放活性，顯著提升治療指數(shù)，甚至可能支持更高劑量給藥以增強(qiáng)療效。
挑戰(zhàn)：TME特征在不同患者甚至同一腫瘤內(nèi)存在高度異質(zhì)性，且缺乏可靠的生物標(biāo)志物用于患者分層，限制了該策略的普適性。
二、蛋白酶介導(dǎo)的條件性激活（重點(diǎn)方向）
原理：腫瘤相關(guān)蛋白酶（如基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs）在TME中濃度顯著高于正常組織；TCE的CD3和/或TAA結(jié)合域被連接上可被蛋白酶切割的“掩蔽肽”（mask）；掩蔽肽在循環(huán)系統(tǒng)中阻止TCE與靶點(diǎn)結(jié)合，降低100–1000倍親和力；進(jìn)入腫瘤后，蛋白酶切除掩蔽肽，釋放活性TCE，觸發(fā)T細(xì)胞殺傷。
掩蔽對(duì)象選擇：所有策略均優(yōu)先掩蔽CD3結(jié)合域（防止全身T細(xì)胞激活）；是否掩蔽TAA結(jié)合域取決于該抗原在健康組織中的表達(dá)水平——若表達(dá)廣泛，則掩蔽可減少脫靶毒性及靶點(diǎn)介導(dǎo)的藥物處置（TMDD）導(dǎo)致的藥效損失。
三、主要掩蔽技術(shù)平臺(tái)比較
四、代表性臨床前與臨床進(jìn)展
1.JANX008（Janux Therapeutics）
雙掩蔽型抗EGFR TCE（CD3+EGFR均被掩蔽）。未激活狀態(tài)下，CD3結(jié)合力↓1000倍，EGFR結(jié)合力↓300倍，細(xì)胞毒活性極低。在非人靈長(zhǎng)類模型中，最大耐受劑量（MTD）從30mg/kg/天（非掩蔽TCE）提高至>600mg/kg/天，安全性顯著提升。
目前處于早期臨床試驗(yàn)，初步數(shù)據(jù)顯示良好安全性和抗腫瘤活性。
2.JANX007（Janux Therapeutics）
單掩蔽型PSMA靶向TCE。藥代動(dòng)力學(xué)顯著改善，前藥形式半衰期約120小時(shí)，而非掩蔽TCE僅2小時(shí)。
不過，2025年12月最新臨床數(shù)據(jù)顯示，在去勢(shì)抵抗性前列腺癌（CRPC）患者中，隨著樣本量從16例擴(kuò)大到104例，ORR從50%驟降至30%，PSA90響應(yīng)率從63%縮水至26%，安全性的表現(xiàn)也不及預(yù)期。
3.其他產(chǎn)品
CX-904（CytomX），EGFR靶向條件性TCE，2025年停止開發(fā)。
VIR-5818/VIR-5500（Vir Biotechnology）：分別靶向HER2和PSMA的條件性TCE。
五、其它策略
除了蛋白酶介導(dǎo)的激活外，研究者還利用TME中其他獨(dú)特的理化特征——如酸性pH、高ATP濃度以及工程化分子互作機(jī)制——開發(fā)新型條件性TCE，以實(shí)現(xiàn)更高精度的腫瘤靶向和更低的系統(tǒng)毒性。
1.pH依賴性激活：利用TME的酸性環(huán)境背景
正常組織pH約為7.2–7.4。腫瘤微環(huán)境因癌細(xì)胞“瓦伯格效應(yīng)”（Warburg effect）產(chǎn)生大量乳酸等代謝產(chǎn)物，pH降至6.5–6.9。
技術(shù)原理：通過在抗體互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）中引入組氨酸殘基（histidine spiking），使抗原結(jié)合域?qū)H敏感。在酸性TME中，組氨酸質(zhì)子化導(dǎo)致構(gòu)象變化，增強(qiáng)與靶點(diǎn)的親和力。在正常組織中（中性pH），結(jié)合能力顯著降低，TCE保持“沉默”。
代表分子如BF-588-Dual CAB，一款雙特異性抗體，同時(shí)靶向EpCAM和CD3。在pH6.0時(shí)，對(duì)EpCAM和CD3的親和力分別比pH 7.4時(shí)提高6倍和4倍。結(jié)果顯示強(qiáng)效殺傷腫瘤細(xì)胞，顯著降低系統(tǒng)毒性。另外，因減少TMDD，可改善PK。在非人靈長(zhǎng)類（NHP）模型中，MTD從<0.05mg/kg（非pH敏感型）提升至5mg/kg，半衰期從約15小時(shí)延長(zhǎng)至42小時(shí)。
挑戰(zhàn)：腫瘤內(nèi)pH存在高度異質(zhì)性，受血流灌注、壞死區(qū)域等因素影響；pH波動(dòng)可能影響TCE結(jié)合效率，進(jìn)而限制免疫突觸的充分形成。
2.利用TME中高ATP濃度進(jìn)行激活
腫瘤組織因高細(xì)胞更替和代謝應(yīng)激，胞外ATP濃度顯著升高。ATP可作為局部“激活信號(hào)”。
現(xiàn)有應(yīng)用（雖非TCE，但具啟發(fā)性）：STA551，一種抗CD137（4-1BB）激動(dòng)型抗體；工程化設(shè)計(jì)使其僅在高ATP環(huán)境下增強(qiáng)與CD137的結(jié)合；確保共刺激信號(hào)局限于腫瘤部位，避免全身免疫過度激活。
潛在拓展：尚無已報(bào)道的TCE直接利用ATP作為激活開關(guān)；但該策略理論上可用于設(shè)計(jì)ATP響應(yīng)型TCE，實(shí)現(xiàn)腫瘤局部T細(xì)胞激活，降低CRS等系統(tǒng)毒性風(fēng)險(xiǎn)。
3.創(chuàng)新工程化分子互作策略
1）PACE技術(shù)（Prodrug-Activating Chain Exchange）
原理：兩種互補(bǔ)的無活性前藥分別靶向腫瘤上共表達(dá)的兩個(gè)TAAs。當(dāng)兩者在腫瘤表面同時(shí)富集時(shí)，發(fā)生鏈交換反應(yīng)，重組形成具有完整CD3結(jié)合域的活性TCE。
優(yōu)勢(shì)：僅在雙抗原陽性腫瘤細(xì)胞上激活；可安全靶向在正常組織中單獨(dú)表達(dá)的抗原；不依賴蛋白酶或低pH等TME因子，適用性更廣。
挑戰(zhàn)：鏈交換效率可能存在個(gè)體差異；可能導(dǎo)致治療反應(yīng)異質(zhì)性，增加臨床轉(zhuǎn)化難度。
2）半抗體（Hemibodies）
設(shè)計(jì)：將傳統(tǒng)TCE“拆分”為兩個(gè)互補(bǔ)片段（hemibodies）。每個(gè)片段包含：一個(gè)抗腫瘤抗原的scFv；以及抗CD3抗體的VL或VH結(jié)構(gòu)域。比如半抗體A含抗原1的scFv+抗CD3的VL，半抗體B含抗原2的scFv+抗CD3的VH。每個(gè)半抗體單獨(dú)無法結(jié)合CD3，因?yàn)镃D3識(shí)別需要完整的VH-VL配對(duì)形成的抗原結(jié)合位點(diǎn)；只有當(dāng)兩個(gè)半抗體同時(shí)結(jié)合到同一腫瘤細(xì)胞上（該細(xì)胞必須共表達(dá)抗原1和抗原2），它們的VH和VL結(jié)構(gòu)域才能在空間上靠近，自發(fā)組裝成一個(gè)有功能的抗CD3結(jié)構(gòu)域。
激活機(jī)制：僅當(dāng)兩個(gè)hemibodies同時(shí)結(jié)合同一腫瘤細(xì)胞上的兩個(gè)不同抗原時(shí)，才能重構(gòu)功能性CD3結(jié)合位點(diǎn)，從而選擇性激活T細(xì)胞，殺傷雙抗原陽性細(xì)胞。
優(yōu)勢(shì)：實(shí)現(xiàn)嚴(yán)格的AND門控邏輯；極大減少對(duì)僅表達(dá)單一抗原的健康細(xì)胞的損傷；提升治療精準(zhǔn)度與安全性。
通過共刺激信號(hào)增強(qiáng)TCE療效
T細(xì)胞的完全活化不僅依賴于TCR/CD3介導(dǎo)的“第一信號(hào)”，還需要共刺激信號(hào)（第二信號(hào)）來支持其增殖、效應(yīng)功能獲得、分化及長(zhǎng)期存活。雖然早期嘗試通過激活共刺激通路（如CD28、CD137/4-1BB、CD2等）增強(qiáng)天然抗腫瘤免疫反應(yīng)的臨床效果有限，但將共刺激信號(hào)與TCE結(jié)合已成為提升癌癥免疫治療效果的新策略。
目前主要有兩類方法正在臨床前和臨床研究中探索，如下表所示。
一、聯(lián)合療法：TCE+腫瘤導(dǎo)向的共刺激雙特異性抗體
策略：將TCE與另一種雙特異性抗體聯(lián)用，后者一端靶向同一腫瘤上的另一TAA，另一端結(jié)合共刺激受體（如CD28、CD137L等）；
目標(biāo)：僅在TCE已結(jié)合的腫瘤部位提供共刺激信號(hào)，避免全身性T細(xì)胞過度激活，從而提高安全性。
代表性案例：REGN5837（Regeneron）——CD22×CD28雙抗；RG6333（Roche）——CD19×CD28雙抗。與CD20靶向TCE聯(lián)用，在B細(xì)胞淋巴瘤模型中顯著增強(qiáng)T細(xì)胞活化和腫瘤控制。
Englumafusp alfa（Roche）：CD19導(dǎo)向的CD137L融合蛋白。與CD20 TCE glofitamab（COLUMVI™）聯(lián)用，在復(fù)發(fā)/難治性侵襲性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤（r/rB-NHL）患者中顯示出強(qiáng)協(xié)同作用和令人鼓舞的臨床療效。
這類“腫瘤導(dǎo)向共刺激”策略可將共刺激信號(hào)空間限制在腫瘤微環(huán)境內(nèi)，既增強(qiáng)療效，又降低系統(tǒng)毒性。
二、單分子整合策略：三特異性TCE（含共刺激結(jié)構(gòu)域）
設(shè)計(jì)：在一個(gè)分子中同時(shí)整合三個(gè)功能域：TAA靶向域+CD3結(jié)合域+共刺激受體結(jié)合域（如CD28、CD137、CD2）；
例如：靶向CD38或HER2的CD28三特異性抗體（Sanofi開發(fā)），但因安全性或療效問題已終止臨床開發(fā)。
最新方向已轉(zhuǎn)向其他共刺激通路。如CD137（4-1BB），用于實(shí)體瘤，如Chugai公司開發(fā)的靶向DLL3或CLDN6的三特異性TCE。又如CD2，用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤。
挑戰(zhàn)：安全性風(fēng)險(xiǎn)高，“武裝型TCE”（armed engagers）若共刺激過強(qiáng)，易引發(fā)CRS或肝毒性；信號(hào)比例難以優(yōu)化，CD3/TCR信號(hào)與共刺激信號(hào)的最佳配比未必是1:1；若因毒性限制劑量，可能導(dǎo)致CD3信號(hào)不足，反而削弱抗腫瘤效果。
因此，相比單分子設(shè)計(jì)，TCE與腫瘤導(dǎo)向共刺激激動(dòng)劑的聯(lián)合用藥可能更具靈活性與可控性。
三、多藥聯(lián)用與給藥順序的重要性
最新臨床前研究表明：CD20 TCE+CD19-CD28雙抗+CD19-CD137L雙抗的三聯(lián)療法中，CD28和CD137L具有非重疊功能（CD28促進(jìn)初始擴(kuò)增，CD137L支持記憶形成與持久性）；給藥順序?qū)Π踩院童熜в酗@著影響——需精細(xì)優(yōu)化以平衡免疫激活強(qiáng)度與毒性。
TCE聯(lián)合療法在癌癥治療中的挑戰(zhàn)與未來方向
本文系統(tǒng)梳理了TCE在腫瘤免疫治療中的最新進(jìn)展，并指出成功開發(fā)高效TCE的關(guān)鍵要素，包括：精細(xì)調(diào)控對(duì)CD3/TCR復(fù)合物的結(jié)合親和力；開發(fā)雙靶點(diǎn)邏輯門控TCE（OR/AND門控）；設(shè)計(jì)基于TME的條件性激活策略；引入共刺激信號(hào)以增強(qiáng)T細(xì)胞功能。新一代TCE旨在實(shí)現(xiàn)更強(qiáng)效、更精準(zhǔn)、更安全的腫瘤殺傷，同時(shí)克服單藥治療常見的耐藥與復(fù)發(fā)問題。然而，臨床轉(zhuǎn)化仍面臨多重挑戰(zhàn)。
一、當(dāng)前主要臨床挑戰(zhàn)
CRS：目前主要依賴劑量控制策略緩解：如“啟動(dòng)劑量”（priming dose）、“階梯遞增給藥”（step-up dosing）或皮下制劑；這些策略可降低初始細(xì)胞因子風(fēng)暴，提升患者耐受性，但尚未確立最優(yōu)給藥方案。
缺乏真正腫瘤特異性抗原（TSAs）：多數(shù)TCE靶向TAAs，而這些抗原常在正常組織中低水平表達(dá)，導(dǎo)致on-target off-tumor毒性。
患者篩選困難：除TAA表達(dá)外，缺乏可靠的療效預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物；加之TCE本身高活性，使得I期臨床試驗(yàn)周期長(zhǎng)、劑量探索復(fù)雜。
免疫抑制性TME：腫瘤通過招募MDSCs（髓源抑制細(xì)胞）、Tregs（及分泌抑制性細(xì)胞因子（如TGF-β、IL-10），構(gòu)建對(duì)T細(xì)胞“不友好”的微環(huán)境，嚴(yán)重限制TCE介導(dǎo)的T細(xì)胞浸潤(rùn)、活化與持久性。
二、聯(lián)合療法：突破瓶頸的關(guān)鍵路徑
隨著TCE安全性不斷提升（如條件性激活、雙靶點(diǎn)設(shè)計(jì)等），其治療窗口擴(kuò)大，為更積極的聯(lián)合策略奠定基礎(chǔ)。潛在組合包括：
1.TCE+免疫檢查點(diǎn)抑制劑
臨床證據(jù)：Blinatumomab（CD19-TCE）聯(lián)合nivolumab（抗PD-1）±ipilimumab（抗CTLA-4）或pembrolizumab，在血液瘤中顯示良好安全性和初步療效（NCT02879695, NCT03160079）。
Tarlatamab（DLL3-TCE，商品名IMDELLTRA™）聯(lián)合durvalumab（抗PD-L1）正在開展III期臨床試驗(yàn)（NCT06211036），用于復(fù)發(fā)/難治性小細(xì)胞肺癌（SCLC）。
新型單分子平臺(tái)：將抗PD-1、PD-L1或LAG-3結(jié)構(gòu)域直接融合到BiTE樣骨架中，同時(shí)靶向TAA（如FAP、CD33、5T4），實(shí)現(xiàn)“一體化”聯(lián)合治療。
2.TCE+工程化細(xì)胞因子
代表性藥物：
AB248（AsherBio）：一種IL-2突變體與抗CD8β抗體片段的融合蛋白，特異性激活CD8?T細(xì)胞，避免刺激Treg和NK細(xì)胞。臨床前（含非人靈長(zhǎng)類）顯示高選擇性、低毒性。即將與tarlatamab聯(lián)用進(jìn)入臨床評(píng)估。
RG6279/IBI363（PD-1-IL2v融合蛋白）：將IL-2活性導(dǎo)向PD-1?T細(xì)胞；
STAR0602（Marengo）：通過TCRVβ結(jié)構(gòu)域靶向特定T細(xì)胞亞群遞送IL-2。
這些“智能細(xì)胞因子”可與TCE協(xié)同，擴(kuò)增并維持腫瘤特異性T細(xì)胞池，延長(zhǎng)抗腫瘤應(yīng)答。
三、未來展望
TCE有望成為多種腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療組成部分，尤其在傳統(tǒng)免疫療法無效的實(shí)體瘤中。通過多維度工程優(yōu)化（親和力、邏輯門控、條件激活、共刺激整合），TCE正從“強(qiáng)力武器”進(jìn)化為“智能制導(dǎo)導(dǎo)彈”。個(gè)體化聯(lián)合策略將成為主流——根據(jù)患者TME特征、抗原表達(dá)譜、免疫狀態(tài)定制治療方案。最終目標(biāo)是擴(kuò)大免疫治療受益人群，實(shí)現(xiàn)深度且持久的臨床緩解。
這些創(chuàng)新為TCE這一新型免疫治療類別奠定了演進(jìn)基礎(chǔ)，預(yù)示著一個(gè)兼顧更高療效與更好安全性的新治療時(shí)代即將到來。
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