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前兩期我們聊了壓力"過高""歸零"和"狂跳"，今天要說的問題更隱蔽——流速明明設置對了，但峰面積就是對不上；或者更直接的，泵頭底下濕了一片。

別找別的原因了，十有八九是那個"小圈圈"——柱塞密封圈的鍋。

 

01.流速不準=泵在"偷懶"

你有沒有遇到過這種情況：

方法寫的是1.0 mL/min，結果做出來的峰面積比昨天少了20%。重新進樣還是一樣，換個標準品依然如此。

問題出在哪？流速！

HPLC就像個"定量泵"，你設置多少流速，它就該給你多少流速。如果實際流速和設定值不一樣，那就說明液體在中途"跑路"了。

 

02.液體都"跑"哪兒去了？

跑路1號：柱塞密封圈磨損（頭號嫌疑犯）

密封圈就像水龍頭里的橡膠墊，用久了就會磨損。一旦磨損，液體就會從泵頭內部泄漏——你看不見，但它確實在漏。

癥狀：

（1）流速莫名其妙變慢；

（2）峰面積逐漸變小；

（3）保留時間輕微延長；

（4）泵頭底部慢慢濕了；

判斷方法：用紙巾墊在泵頭底部，跑幾分鐘看看——如果紙巾濕了，基本確定是密封圈的問題。

跑路2號：單向閥泄漏（內鬼作案）

單向閥如果密封不嚴，液體會在泵內部"空轉"——泵以為自己在工作，其實液體只是在泵頭里"轉圈圈"，根本沒往外送。

癥狀：

（1）流速嚴重偏低（比設定值少30%以上）；

（2）壓力偏低但不歸零；

（3）沒有明顯外漏

判斷方法：后面會教你一個"量筒大法"，一測便知。

跑路3號：內部管路接頭松動（少見但致命）

泵內部的高壓管路如果接頭松了，液體會從內部泄漏。這種情況比較少見，但一旦發(fā)生，流速會嚴重失準。

癥狀：

（1）流速極不穩(wěn)定；

（2）壓力忽高忽低；

（3）打開泵蓋能看到濕痕；

 

03.實戰(zhàn)診斷："量筒大法"驗真身

別總靠猜，咱們用科學方法驗證！

操作步驟：

第1步：斷開色譜柱，用兩通直接連接泵和檢測器（或直接接到廢液瓶）；

第2步：設置流速為1.0 mL/min，用純甲醇或水作為流動相；

第3步：用10 mL量筒接在出口，同時用手機秒表計時；

第4步：收集5分鐘，看量筒里的液體體積；

理論值：5分鐘 × 1.0 mL/min = 5.0 mL；

實際情況：

如果接近5.0 mL（±5%）：流速正常，問題在別處；

如果只有3-4 mL：嚴重泄漏，優(yōu)先更換密封圈；

如果只有1-2 mL：可能是單向閥完全失效；

 

04.看得見的漏液=密封圈"壽終正寢"

如果你直接看到泵頭底下濕了一灘，或者有液體順著泵頭往下滴——

恭喜，不用診斷了，直接換密封圈吧！

這種明顯的外漏，基本上就是密封圈磨損到極限了。這是正常的消耗過程，就像汽車換機油一樣，定期更換密封圈是必須的預防性維護。

更換密封圈的注意事項：

1. 準備工具

（1）專用工具包（一般儀器都配）；

（2）新密封圈（注意型號！不同泵頭規(guī)格不同）；

（3）異丙醇或超純水；

2. 更換步驟

（1）參照儀器手冊，別憑感覺拆；

（2）拆下舊密封圈后，用異丙醇清洗柱塞桿；

（3）安裝新密封圈時注意方向（有倒角的一面朝外）;

（4）擰緊時別用蠻力，按手冊要求的扭矩；

3. 安裝后測試

（1）先用純溶劑跑10分鐘；

（2）再用"量筒大法"驗證流速；

（3）確認無誤后再接色譜柱；

老司機提醒：如果你不確定怎么換，別硬上！打電話給售后或者看視頻教程，密封圈雖然小，但裝錯了會更麻煩。

 

05.預防勝于治療

密封圈的壽命有多長？

這取決于：

（1）使用頻率（每天8小時 vs 偶爾用一次）；

（2）流動相類型（緩沖鹽比純有機相更"傷圈"）；

（3）維護情況（定期沖洗 vs 從不保養(yǎng)）；

一般來說：

高頻使用：3-6個月換一次；

中頻使用：6-12個月換一次；

低頻使用：1年左右換一次；

如何延長密封圈壽命？

1. 緩沖鹽用完及時沖洗鹽結晶就像砂紙，會加速磨損密封圈。

2. 流動相過濾干凈顆粒物是密封圈的天敵。

3. 停機前沖洗別讓溶劑在泵頭里干掉，特別是含鹽的流動相。

4. 常備備件密封圈不貴，但關鍵時刻能救命。建議實驗室常備2-3套。

 

結語

流速不準和漏液，90%的原因都指向那個"小圈圈"——柱塞密封圈。

記住三個關鍵點：

（1）懷疑流速不準？ 用"量筒大法"驗證；

（2）看到漏液？ 果斷換密封圈；

（3）想要預防？ 定期沖洗+及時更換；

這個"小圈圈"雖然不起眼，但它的狀態(tài)直接決定了你的數據準不準。別等到峰面積對不上了才想起來檢查，定期維護，才是王道。